專利名稱：生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/γ-聚谷氨酸復合材料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學領(lǐng)域，具體涉及一種生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料及其制備方法。
背景技術(shù)：
磷酸三鈣(TCP)是近年來發(fā)展起來的一種人工骨移植材料，它主要由鈣、磷離子構(gòu)成，化學式為Ca3 (PO4)2，與骨中的無機成分相似，包括高溫型的α相和低溫型的β相兩種。TCP作為骨修復材料已經(jīng)有三十多年的研究歷史。但磷酸三鈣單獨作為骨修復材料使用時，又存在種種缺陷，使其在臨床上的應用受到了限制。磷酸三鈣主要不足有(1)具有韌性差、脆性大、抗折強度低，不能承重，只能用于不承重的骨缺損；(2)缺乏誘導活性，材料植 入骨缺損區(qū)后只能靠骨傳導作用使骨組織生長，骨生長量少，需時長，骨長入深度有限，不適合修復長段骨的缺損；(3)降解速度難以控制，不能與新生骨生長速度相匹配。Y -聚谷氨酸(Poly Y-gl μ tamic acid, Y-PGA)是一種可由微生物大量生物合成的氨基酸聚合物，它由D-型或L-型谷氨酸通過Y -酰胺鍵連接而成，通常它由5，000個左右谷氨酸單體組成，相對分子質(zhì)量一般在10萬 100萬。作為一種水溶性、生物可降解性、無毒、生物適應性的高分子聚合物，Y-聚谷氨酸具有增稠、乳化、凝膠、成膜、保濕和粘結(jié)等功能，可以與其他材料聚合形成新型復合材料，在生物醫(yī)學領(lǐng)域中，可以作為藥物載體、止血劑、生物性粘著劑、組織修復，具有很大的應用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種磷酸三鈣分布均勻、磷酸三鈣與Y-聚谷氨酸結(jié)合緊密、降解速率連續(xù)可調(diào)的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料及其制備方法。本發(fā)明的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料是通過以下方法制備的，該方法包括以下步驟(a)將Y-聚谷氨酸和去離子水混合，攪拌直至形成透明粘稠乳液，得到Y(jié)-聚谷氨酸溶液，Y-聚谷氨酸質(zhì)量百分比為2 10% ;(b)將β -磷酸三鈣溶解在鹽酸或硝酸水溶液中，超聲波處理至完全溶解，再調(diào)節(jié)PH值為4 6，得到β-磷酸三鈣溶液，β-磷酸三鈣質(zhì)量百分比為2.5% 25%;(C)將步驟(b)所得的磷酸三鈣溶液和步驟(a)所得的Y-聚谷氨酸溶液相混，得到Y(jié)-聚谷氨酸/β_磷酸三鈣溶液，其中磷酸三鈣與Y-聚谷氨酸的質(zhì)量之比為 5:1 1:5 ;(d)在步驟(C)得到的Y -聚谷氨酸/ β -磷酸三鈣溶液中攪拌下逐滴加入交聯(lián)劑溶液，交聯(lián)劑與Y-聚谷氨酸的質(zhì)量之比為1:2. 5 25，繼續(xù)攪拌直至溶液中出現(xiàn)白色膠狀懸浮物質(zhì)，停止攪拌；(e)待膠狀物質(zhì)全部沉積后，繼續(xù)攪拌溶液，并逐滴滴加堿溶液，直至pH值為6 7時停止滴加；(f)在步驟(e)得到的溶液中加入α-磷酸三鈣粉末，α-磷酸三鈣的濃度為質(zhì)量體積比O 25%，快速攪拌均勻；(g)若步驟(f)的溶液中無α-磷酸三鈣，則將溶液靜置，除去上清液，傾入模具中，然后置于液氮中冷卻5 15min，冷凍干燥；若步驟(f)的溶液中含有α-磷酸三鈣，則快速攪拌，固化前傾入模具，然后置于液氮中冷卻20 30min，冷凍干燥，消毒，洗滌，再次冷凍干燥，而得到本發(fā)明的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料。本發(fā)明Y-聚谷氨酸的來源是按照專利公開號為CN1932007A，發(fā)明名稱為Y-聚谷氨酸產(chǎn)生菌及其利用該菌株制備Y-聚谷氨酸的方法制備獲得。所述的步驟(b)的鹽酸或硝酸水溶液優(yōu)選為O. lmol/L鹽酸或硝酸水溶液。
步驟(d)中所述的交聯(lián)劑可以為聚縮水甘油醚，包括烯丙基縮水甘油醚、甘油三縮水甘油醚、乙二醇二縮水甘油醚、聚乙二醇二縮水甘油醚或聚環(huán)氧乙烷山梨醇聚縮水甘油醚及其混合物。進一步優(yōu)選為質(zhì)量濃度為1%的交聯(lián)劑水溶液。步驟(e)所述的堿溶液包括氫氧化鈉溶液或者氨水。步驟(g)中所述的消毒優(yōu)選為將材料放入體積分數(shù)75%的乙醇水溶液中反復浸泡，一般3 6次，每次12 24h。步驟(g)中所述的洗滌是通過真空抽濾法，加入5倍體積水反復洗滌。本發(fā)明通過控制液氮中冷卻時間，可以控制生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/Y-聚谷氨酸復合材料內(nèi)部的孔徑大小，按照本發(fā)明的液氮冷卻時間，制備的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料內(nèi)部的孔徑在60 μ πΓ280 μ m之間，孔隙率在64% 85%。為了減少材料冷凍干燥的時間，采用表面帶有微孔的模具為好。本發(fā)明以原位絡合的方法制備了生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料，該材料由磷酸三鈣和Y-聚谷氨酸依靠分子間基團羧酸根絡合而成，在Y-聚谷氨酸基體上沉積磷酸三鈣粉末，并在交聯(lián)劑的作用下增加復合材料的力學強度，改善磷酸三鈣的韌性，提高磷酸三鈣的骨結(jié)合能力和降解性，從而能促進骨缺損的修復。在微觀尺度上具有分布均勻的特點。依據(jù)磷酸三鈣粉末的降解速率隨粉末對復合材料的降解速率進行連續(xù)調(diào)節(jié)，可以滿足不同組織工程的要求。通過這種生物相容性好、降解速率可連續(xù)調(diào)節(jié)的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料在冷凍干燥工藝條件下可以制備孔徑尺寸在60 μ πΓ280 μ m的骨修復材料，可以作為可降解生物醫(yī)學材料在醫(yī)療方面得到廣泛應用。采用本發(fā)明的方法制備出的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/Y-聚谷氨酸復合材料為透明乳白色，孔徑大小為60 μ m 280 μ m,孔隙率范圍為64% 85%，在O. 9%生理鹽水浸泡并于37°C恒溫下靜置3個月后其失重率為8. 60% 39. 57%。該材料具有磷酸三鈣分布均勻、磷酸三鈣與Y-聚谷氨酸結(jié)合緊密以及降解速率連續(xù)可調(diào)等特點，材料孔徑大小合適，可作為骨修復材料應用在骨組織工程等生物醫(yī)用領(lǐng)域。


圖1是實施例1制得的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料的掃描電鏡照片。圖2是對比例I制得的磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料的掃描電鏡照片。
具體實施例方式以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。以下實施例中的Y-聚谷氨酸是按照專利公開號為CN1932007A，發(fā)明名稱為Y-聚谷氨酸產(chǎn)生菌及其利用該菌株制備Y-聚谷氨酸的方法制備獲得的。實施例1 :將Ig Y -聚谷氨酸溶解于50mL去離子水中，攪拌直至形成透明粘稠乳液，得到Y(jié)-聚谷氨酸溶液，備用。將5g β -磷酸三韓加入IOml O. lmol/L稀鹽酸中，攪拌O. 5h至完全溶解，然后將其用超聲波處理(超聲頻率40KHZ，IOmin),再用氫氧化鈉溶液將pH值到
4.0，定容至50mL，得到β -磷酸三鈣溶液。在處理后的β -磷酸三鈣溶液中加入Y -聚谷氨酸溶液，攪拌混合均勻，得到Y(jié)-聚谷氨酸/β_磷酸三鈣溶液。在Y -聚谷氨酸/β_磷 酸三鈣溶液中攪拌下逐滴加入IOml含O. 05g烯丙基縮水甘油醚水溶液，將該混合物置于室溫下攪拌lh，溶液中出現(xiàn)白色膠狀懸浮物質(zhì)，停止攪拌，待膠狀物質(zhì)全部沉積后，繼續(xù)攪拌溶液，并逐滴滴加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至7. O停止滴加，靜置，除去上清，將下層沉積物傾入塑料培養(yǎng)皿中，置于液氮中冷卻15min，真空冷凍干燥。以適量的氫氧化鈉溶液中和材料中的稀鹽酸，用體積分數(shù)75%的乙醇水溶液反復浸泡3次，每次12h，用5倍體積的去離子水真空抽濾法洗滌材料，然后將其二次真空冷凍干燥，干燥后的材料置于干燥器中干燥，由此得到本實施例的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料。如圖1所示，本實施例的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/Y-聚谷氨酸復合材料為透明乳白色，平均孔徑為100. 29±40. 46μ ，空隙率85. 15%。將該材料浸泡于O. 9%生理鹽水中于37°C恒溫靜置3個月后其失重率為39. 57%。該材料具有磷酸三鈣分布均勻、磷酸三鈣與Y-聚谷氨酸結(jié)合緊密以及可降解等特點。實施例2將5g Y-聚谷氨酸溶解于50mL去離子水中，攪拌直至形成透明粘稠乳液，得到Y(jié)-聚谷氨酸溶液，備用。將IgP-磷酸三鈣加入IOml 1.0mol/L稀鹽酸中，攪拌Ih至完全溶解，然后將其用超聲波處理(超聲頻率40KHZ，lOmin)，再氨水溶液調(diào)節(jié)pH值到5. 0，定容至40mL，得到β -磷酸三鈣溶液。在處理后的β -磷酸三鈣溶液中加入Y -聚谷氨酸溶液，攪拌混合均勻，得到Y(jié)-聚谷氨酸/β_磷酸三鈣溶液。在Y-聚谷氨酸/β_磷酸三鈣溶液中攪拌下逐滴加入IOml含O. 2g甘油三縮水甘油醚水溶液，將該混合物置于室溫下攪拌lh，溶液中出現(xiàn)白色膠狀懸浮物質(zhì)，停止攪拌，待膠狀物質(zhì)全部沉積后，繼續(xù)攪拌溶液，并逐滴滴加氨水調(diào)節(jié)PH值至6. 5停止滴加，靜置，除去上清，將下層沉積物傾入塑料培養(yǎng)皿，置于液氮中冷卻5min，真空冷凍干燥。以適量的氫氧化鈉溶液中和材料中的稀鹽酸，用體積分數(shù)75%的乙醇水溶液反復浸泡4次，每次24h，用5倍體積的去離子水真空抽濾法洗滌材料，然后將其二次真空冷凍干燥，干燥后的材料置于干燥器中干燥，由此得到本實施例的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料。本實施例的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料為透明乳白色，平均孔徑為180. 11 ±34. 27 μ m，空隙率83. 45%。將該材料浸泡于O. 9%生理鹽水中于37°C恒溫靜置3個月后其失重率為31. 45%。該材料具有磷酸三鈣分布均勻、磷酸三鈣與Y-聚谷氨酸結(jié)合緊密以及可降解等特點。
實施例3將2. 5g Y-聚谷氨酸溶解于50mL去離子水中，攪拌直至形成透明粘稠乳液，得到Y(jié) -聚谷氨酸溶液，備用。將IOg β -磷酸三鈣加入20mL1. OmoI/L稀鹽酸，攪拌O. 5h至完全溶解，然后將其用超聲波處理(超聲頻率40KHZ，IOmin )，再用氫氧化鈉將pH值調(diào)節(jié)至6. O，定容至40mL，得到β-磷酸三鈣溶液。在處理后的磷酸三鈣溶液中加入Y-聚谷氨酸溶液，攪拌混合均勻，得到Y(jié)-聚谷氨酸/β_磷酸三鈣溶液。在Y-聚谷氨酸/β_磷酸三鈣溶液中攪拌下逐滴加入IOml含1. Og聚環(huán)氧乙烷山梨醇聚縮水甘油醚水溶液，將該混合物置于室溫下攪拌lh，溶液中出現(xiàn)白色膠狀懸浮物質(zhì)，停止攪拌，待膠狀物質(zhì)全部沉積后，繼續(xù)攪拌溶液，并逐滴滴加氨水調(diào)節(jié)PH值至6. O停止滴加，再加入4g α -磷酸三鈣(終質(zhì)量體積比為4%)，快速攪拌均勻，在固化前快速傾入塑料培養(yǎng)皿中，置于液氮中冷卻20min，真空冷凍干燥。以適量的氫氧化鈉溶液中和材料中的稀鹽酸，用體積分數(shù)75%的乙醇溶液反復浸泡6次，每次20h，用5倍體積的去離子水真空抽濾法洗滌材料，然后將其二次真空冷凍干燥，干燥后的材料置于干燥器中干燥，由此得到本實施例的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y-聚谷氨酸復合材料。本實施例的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料為透明乳白色，平均孔徑為150. 37±24. 23 μ m，空隙率75. 40%。將該材料浸泡于O. 9%生理鹽水中于37°C恒溫靜置3個月后，真空冷凍干燥材料并稱重，其失重率為22. 17%。具有磷酸三鈣分布均勻、磷酸三鈣與Y -聚谷氨酸結(jié)合緊密、降解速率連續(xù)可調(diào)以及生物相容性良好等特點。實施例4將4g Y -聚谷氨酸溶解于50mL去離子水中，攪拌直至形成透明粘稠乳液，得到Y(jié)-聚谷氨酸溶液，備用。將8g β -磷酸三韓加入IOml 3. Omol/L稀硝酸,攪拌O. 5h至完全溶解，然后將其用超聲波處理(超聲頻率40KHZ，30min)，再用氨水溶液將pH值調(diào)節(jié)至5. 0，定容至40mL，得到β-磷酸三鈣溶液。在處理后的磷酸三鈣溶液中加入Y-聚谷氨酸溶液，攪拌混合均勻，得到Y(jié)-聚谷氨酸/β_磷酸三鈣溶液。在Y-聚谷氨酸/β_磷酸三鈣溶液中攪拌下逐滴加入IOml含O. 2g烯丙基縮水甘油醚水溶液，將該混合物置于室溫下攪拌lh，溶液中出現(xiàn)白色膠狀懸浮物質(zhì)，停止攪拌，待膠狀物質(zhì)全部沉積后，繼續(xù)攪拌溶液，并逐滴滴加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6. O停止滴加，再加入25ga -磷酸三鈣(終質(zhì)量體積比為25%)，快速攪拌均勻，在固化前快速傾入塑料培養(yǎng)皿中，置于液氮中冷卻30min，真空冷凍干燥。以適量的氫氧化鈉溶液中和材料中的稀鹽酸，用體積分數(shù)75%的乙醇溶液反復浸泡5次，每次18h，用5倍體積的去離子水真空抽濾法洗滌材料，然后將其二次真空冷凍干燥，干燥后的材料置于干燥器中干燥，由此得到本實施例的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/Y-聚谷氨酸復合材料。本實施例的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料為透明乳白色，平均孔徑為280. 22±9. 71 μ m,空隙率64. 38%。將該材料浸泡于O. 9%生理鹽水中于37°C恒溫靜置3個月后其失重率為8. 60%。該材料具有磷酸三鈣分布均勻、磷酸三鈣與Y-聚谷氨酸結(jié)合緊密以及可降解等特點。對比例I將Ig Y -聚谷氨酸溶解于50mL去離子水中，攪拌直至形成透明粘稠乳液，得到Y(jié)-聚谷氨酸溶液，備用。將5g β -磷酸三韓加入IOml O. lmol/L稀鹽酸中，攪拌O. 5h至完全溶解，然后將其用超聲波處理(超聲頻率40KHZ，lOmin)，再用氨水溶液將pH值調(diào)節(jié)至4.0，定容至501^，得到β-磷酸三鈣溶液。在處理后的磷酸三鈣溶液中加入Y-聚谷氨酸溶液，攪拌混合均勻，得到Y(jié) -聚谷氨酸/ β -磷酸三鈣溶液。在Y -聚谷氨酸/ β -磷酸三鈣溶液中攪拌下逐滴加入IOml含O. 05g烯丙基縮水甘油醚水溶液，將該混合物置于室溫下攪拌lh，溶液中出現(xiàn)白色膠狀懸浮物質(zhì)，停止攪拌，待膠狀物質(zhì)全部沉積后，繼續(xù)攪拌溶液，并逐滴滴加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至7. O停止滴加，靜置，除去上清，將下層沉積物傾入塑料培養(yǎng)皿中，真空冷凍干燥。以適量的氫氧化鈉溶液中和材料中的稀鹽酸，用體積分數(shù)75%的乙醇水溶液反復浸泡3次，每次12h，用5倍體積的去離子水真空抽濾法洗滌材料，然后將其二次真空冷凍干燥，干燥后的材料置于干燥器中干燥，由此得到本對比例的磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料。如圖2所示，本對比例的磷酸三鈣/Y-聚谷氨酸復合材料為乳白色，掃描電子顯微鏡觀察，由于沒有經(jīng)過液氮冷凍程序，該材料非多孔微觀結(jié)構(gòu)，因此能很好地展示復合材料中磷酸三鈣在Y-聚谷氨酸質(zhì)中分散均勻，兩者之間看不出明顯的分離痕跡，磷酸三鈣 顆粒被Y -聚谷氨酸包裹起來，形成了均勻的材料。將該材料浸泡于O. 9%生理鹽水中于37°C恒溫靜置3個月后其失重率為19. 25%。該材料具有磷酸三鈣分布均勻、磷酸三鈣與Y-聚谷氨酸結(jié)合緊密以及可降解等特點。
權(quán)利要求
1.一種生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/Y-聚谷氨酸復合材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 (a)將Y-聚谷氨酸和去離子水混合，攪拌直至形成透明粘稠乳液，得到Y(jié)-聚谷氨酸溶液，Y-聚谷氨酸質(zhì)量百分比為疒10%; (b)將β-磷酸三鈣溶解在鹽酸或硝酸水溶液中，超聲波處理至完全溶解，再調(diào)節(jié)PH值為4飛，得到β-磷酸三鈣溶液，β-磷酸三鈣質(zhì)量百分比為2.59Γ25%; (c)將步驟(b)所得的β-磷酸三鈣溶液和步驟(a)所得的Y-聚谷氨酸溶液相混，得到Y(jié)-聚谷氨酸/β_磷酸三鈣溶液，其中磷酸三鈣與Y-聚谷氨酸的質(zhì)量之比為5:1 1:5 ; (d)在步驟(C)得到的Y -聚谷氨酸/ β -磷酸三鈣溶液中攪拌下逐滴加入交聯(lián)劑溶液，交聯(lián)劑與Y-聚谷氨酸的質(zhì)量之比為1:2. 5 25，繼續(xù)攪拌直至溶液中出現(xiàn)白色膠狀懸浮物質(zhì)，停止攪拌； Ce)待膠狀物質(zhì)全部沉積后，繼續(xù)攪拌溶液，并逐滴滴加堿溶液，直至pH值為6 7時停止滴加； (f)在步驟(e)得到的溶液中加入α-磷酸三鈣粉末，α-磷酸三鈣的濃度為質(zhì)量體積比O 25%，快速攪拌均勻； (g)若步驟(f)的溶液中無α-磷酸三鈣，則將溶液靜置，除去上清液，傾入模具中，然后置于液氮中冷卻5 15min，冷凍干燥；若步驟(f)的溶液中含有α -磷酸三鈣，則快速攪拌，固化前傾入模具，然后置于液氮中冷卻20 30min，冷凍干燥，消毒，洗滌，再次冷凍干燥，而得到生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟(b)的鹽酸或硝酸水溶液為O. lmol/L鹽酸或硝酸水溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(d)中所述的交聯(lián)劑為聚縮水甘油醚。
4.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的聚縮水甘油醚包括烯丙基縮水甘油醚、甘油三縮水甘油醚、乙二醇二縮水甘油醚、聚乙二醇二縮水甘油醚或聚環(huán)氧乙烷山梨醇聚縮水甘油醚及其混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、3或4所述的制備方法，其特征在于，所述的交聯(lián)劑為質(zhì)量濃度為1%的交聯(lián)劑水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(e)所述的堿溶液為氫氧化鈉溶液或者氨水。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(g)中所述的消毒為將材料放入體積分數(shù)75%的乙醇水溶液中浸泡3 6次，每次12 24h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(g)中所述的洗滌是通過真空抽濾法，加入5倍體積水反復洗滌。
9.一種按照權(quán)利要求1所述的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料的制備方法制備得到的生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/ Y -聚谷氨酸復合材料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/γ-聚谷氨酸復合材料及其制備方法。本發(fā)明以原位絡合的方法制備了生物可降解醫(yī)用磷酸三鈣/γ-聚谷氨酸復合材料，該材料由磷酸三鈣和γ-聚谷氨酸依靠分子間基團羧酸根絡合而成，在γ-聚谷氨酸基體上沉積磷酸三鈣粉末，并在交聯(lián)劑的作用下增加復合材料的力學強度，改善磷酸三鈣的韌性，提高磷酸三鈣的骨結(jié)合能力和降解性，從而能促進骨缺損的修復。其孔徑大小為60μm～280μm，孔隙率范圍為64%～85%，在0.9%生理鹽水浸泡并于37℃恒溫下靜置3個月后其失重率為8.60%～39.57%，具有磷酸三鈣分布均勻、磷酸三鈣與γ-聚谷氨酸結(jié)合緊密以及降解速率連續(xù)可調(diào)等特點，材料孔徑大小合適，可作為骨修復材料應用在骨組織工程等生物醫(yī)用領(lǐng)域。
文檔編號A61L27/56GK103007342SQ20121054076
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月12日
發(fā)明者疏秀林, 施慶珊, 歐陽友生, 陳儀本 申請人:廣東省微生物研究所