專利名稱：梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種梓醇的新用途，具體是梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物中的應(yīng)用，以及在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用，屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
缺血性腦卒中后遺癥是指患者急性腦梗塞發(fā)作經(jīng)治療存活后而遺留不同程度的偏癱、失語、意識輕度障礙等局灶性癥狀。腦卒中是危害人類生命和健康的常見病和多發(fā)病，全球每年約有1500萬腦卒中患者，其中缺血性腦卒中占有相當(dāng)大的比例(75%-85%)。而現(xiàn)在認(rèn)為，缺血性腦卒中發(fā)生過程中，實質(zhì)上是缺血再灌注造成的損傷。腦缺血再灌注損傷病理生理機制包括許多方面，其中氧化損傷和過度的炎癥反應(yīng)不僅影響局部的血液供
應(yīng)，而且可以直接破壞組織結(jié)構(gòu)。大量實驗研究表明，缺血后再灌注早期產(chǎn)生的黏附因子和細(xì)胞因子構(gòu)成了缺血性損傷向炎癥性損傷轉(zhuǎn)變的基礎(chǔ)，大腦炎癥系統(tǒng)的激活，促炎因子與抑炎因子之間的平衡失調(diào)，促進了炎癥過程的發(fā)生發(fā)展，可導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞進一步損害；并可使自由基的連鎖反應(yīng)激化，破壞組織結(jié)構(gòu)而加重組織損傷，引起遲發(fā)性神經(jīng)功能損害。腦缺血再灌注早期，產(chǎn)生大量自由基，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過機體的清除能力，如果氧自由基得不到及時清除，將引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，形成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物。SOD是體內(nèi)重要的抗氧化酶，可清除自由基，保護受損細(xì)胞，常作為清除氧自由基能力的主要指標(biāo)。丙二醛是氧自由基攻擊脂質(zhì)導(dǎo)致過氧化的代謝產(chǎn)物，其含量反映體內(nèi)氧自由基的生產(chǎn)水平及對組織的損傷程度。在既往報道的大量缺血性腦卒中病例中，僅少數(shù)患者完全恢復(fù)，大多數(shù)患者殘留有不同程度的神經(jīng)功能障礙即后遺癥狀，主要表現(xiàn)為肢體運動感覺功能障礙。缺血性腦卒中后遺癥狀可伴隨患者持續(xù)加重直到死亡，給患者帶來了很大的痛苦，也給家庭造成了很大的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。但是，迄今為止，缺血性腦卒中后遺癥尚無特殊的良效藥物治療，相對而言，中藥具有毒副作用小，適合長期服用，成本低的優(yōu)點。因此，發(fā)掘中醫(yī)藥寶庫，創(chuàng)新缺血性腦卒中后遺癥治療理論，尋找治療缺血性腦卒中后遺癥更為有效的中藥制劑，已經(jīng)倍受國內(nèi)外的關(guān)注。
HQ H
梓醇化學(xué)結(jié)構(gòu)式梓醇是一種環(huán)烯醚萜單糖苷類化合物，分子式C15H22010。梓醇廣泛分布于合瓣花亞綱、馬錢科醉魚草屬、玄參科泡梧屬及地黃屬、柴葳科樟屬、列當(dāng)科肉蓯蓉屬、車前科車前屬等植物中，來源及其豐富。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種梓醇的新用途，即梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所說的梓醇的新用途，是梓醇在制備改善缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用。根據(jù)上述的梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物、以及改善缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用，梓醇具有改善缺血性腦卒中再灌注損傷能量代謝障礙的作用。根據(jù)上述的梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物、以及改善缺血性腦卒 中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用，梓醇具有抗缺血性腦卒中再灌注損傷氧化應(yīng)激的作用。根據(jù)上述的梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物、以及改善缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用，梓醇具有抑制缺血性腦卒中再灌注損傷炎癥反應(yīng)的作用。根據(jù)上述的梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物、以及改善缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用，其特征是梓醇在藥物中的含量為O. 1-99%。本發(fā)明在現(xiàn)有的腦缺血再灌注損傷認(rèn)識的基礎(chǔ)上，采用線栓法腦缺血再灌注損傷大鼠模型，觀察梓醇對腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)缺損功能的影響、對腦缺血損傷大鼠腦能量代謝紊亂的影響、對腦缺血損傷大鼠腦皮層氧化應(yīng)激的影響，以及對腦缺血損傷大鼠腦皮層炎癥因子及其轉(zhuǎn)錄因子的影響。結(jié)果表明(I)對神經(jīng)功能缺損癥狀的影響梓醇給藥組可明顯的改善神經(jīng)缺損癥狀，明顯改善橫木行走能力、提高抓握力量(同模型組相比較，P < O. 05，P < O. 01)，且作用明顯好于陽性對照藥天保寧，表明梓醇對腦缺血再灌注損傷大鼠恢復(fù)早期具有神經(jīng)保護作用，能明顯的改善腦缺血神經(jīng)功能缺損癥狀，促進受損的肢體運動感覺功能恢復(fù)。(2)對能量代謝障礙的影響梓醇組能顯著降低腦組織中乳酸的含量，明顯提高丙酮酸、Na+, K+-ATPase和Ca2+，Mg2+_ATPase的含量(同模型組相比較，P < O. 05，p
<0.01)，上述作用與陽性對照藥天保寧，表明梓醇可以促進腦缺血再灌注損傷大鼠恢復(fù)早期能量代謝障礙的改善，增強能量及改善乳酸酸中毒癥狀。(3)對氧化應(yīng)激的影響梓醇組能顯著提高腦皮質(zhì)中SOD活力、減少MDA含量(同模型組相比較，P < O. 05，P < O. 01)，上述作用與陽性對照藥丁苯酞相似，表明梓醇可以促進腦缺血再灌注損傷大鼠恢復(fù)早期腦皮質(zhì)SOD的活性，減少脂質(zhì)過氧化，具有抗氧化應(yīng)激作用。
具體實施例方式實施例I對神經(jīng)功能缺損癥狀的影響
1.1 目的采用線栓法腦缺血再灌注損傷大鼠模型，觀察梓醇對腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)缺損功能的影響，以確定其是否具有促進缺血性腦卒中后遺癥狀恢復(fù)的作用。I. 2試驗材料I. 2. I 動物健康SD雄性大鼠，體重240_280g。I. 2. 2 藥物I. 2. 2. I 受試藥 梓醇，白色或無色粉末，稱O. 3g粉末，用去離子水溶至100ml，灌胃給藥lml/100g體重。I. 2. 2. 2 陽性藥天保寧浙江康恩貝制藥股份有限公司生產(chǎn)，臨床每日用量為6片。配制方法取片劑7片，研磨成粉后用去離子水溶解定溶至100ml，灌胃給藥lml/100g體重。丁苯酞石藥集團恩必普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，臨床每日用量為O. 6g。配制方法用注射器抽取7粒膠囊內(nèi)容物，用食用油稀釋成20ml，灌胃給藥O. 2ml/100g體重。I. 2. 3主要實驗儀器YLS-12A大小鼠抓力測試儀，山東科學(xué)技術(shù)設(shè)備站生產(chǎn)。I. 3方法與結(jié)果I. 3. I大鼠腦缺血再灌注(MCAO)模型的制備參照文獻方法制作MCAO模型。大鼠用10%水合氯醛O. 35g/kg腹腔注射麻醉，分離右側(cè)頸總動脈、頸內(nèi)動脈及頸外動脈，于頸外動脈與頸內(nèi)動脈分叉處作一切口，從切口處插入頭端成圓球形的光滑釣魚尼龍線，插入深度18-19mm左右，實現(xiàn)大腦中動脈阻塞導(dǎo)致腦缺血。結(jié)扎切口處，固定尼龍線，逐層縫合肌肉和皮膚。2h后將尼龍線頭端輕輕拔出到近切口處，實現(xiàn)再灌注。假手術(shù)組大鼠除不栓塞大腦中動脈外，余處理同缺血組。I. 3. 2分組與給藥將神經(jīng)癥狀1-3分的大鼠分成模型組；梓醇15mg/kg,30mg/kg,60mg/kg給藥組；天保寧O. 7片/kg陽性對照組；依達拉奉7mg/kg陽性對照組。以及假手術(shù)組。缺血后3d至14d灌胃給藥，依達拉奉組腹腔注射給藥，假手術(shù)組與模型組給予等量食用油灌胃和相應(yīng)生理鹽水腹腔注射，每天一次。I. 3. 3 方法I. 3. 3. I橫木行走實驗橫木行走實驗評價運動的協(xié)調(diào)和整合缺損。橫木寬2. Ocm,長120cm,厚I. Ocm,距地面80cm水平懸空放置，橫木一端連接一個暗盒，用噪音刺激大鼠通過橫木走進暗盒。評分標(biāo)準(zhǔn)不能呆在橫木上，O分；能呆在橫木上但不能動，I分；試圖通過，但從橫木上摔下，2分；走上橫木，但損傷的后肢滑落次數(shù)超過50%，3分；超過I次但不到50%，4分；僅滑落I次，5分；順利通過，6分。術(shù)前訓(xùn)練5d，每天一次，讓所有大鼠評到6分為止。以缺血3、6、9、12、14d為觀察時間點進行檢測。I. 3. 3. 2抓握力量測試抓握力量測試評價抓握力量的大小。大鼠兩前肢抓住拉力測試儀的拉力橫桿，測試者左手先固定拉力板，右手向后拉住鼠尾，松開左手，右手加力向后拉拽大鼠身體，大鼠為了不從橫桿滑脫會抓握橫桿不放，直至滑脫，讀取使大鼠滑脫的最大拉力值，每只測2次，取最大值。以缺血3、6、9、12、14d為觀察時間點進行檢測。I. 4.結(jié)果見表 1_1、1_2、1_3，表 1_4、1_5、1_6。表1-1梓醇對MCAO模型大鼠神經(jīng)癥狀評分的影響(^ ±s)
組另|J~ ~木后3天 木后6夫 η 木后9天 η 木后12關(guān) η 木居14天假手術(shù) 9 0±0**9 0±0 林 9 0±0林9 0±0**9 0±0**
模型 11 1.54±0.82 10 1.20±0.42 10 1.30±0.95 9 1.00±0.00 8 1.00±0.00梓醇 9 1.44土0.73 9 I. 11±0.33 9 0·44±0·53* 9 0.44±0.53林 9 0.44±0.53林天保寧 9 1·44±0.73 9 1.22±0.44 9 0.67±0· 50* 8 0.63±0.52* 8 0.63±0.52*注與模型組比較*p < O. 05，林p < O. 01。從表1-1可見，假手術(shù)組大鼠沒有神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，各缺血組大鼠神經(jīng)癥狀表現(xiàn)明顯，但隨著時間的延長而逐漸的自行恢復(fù)，而給藥組大鼠的神經(jīng)缺損的恢復(fù)速度明顯快于模型組，但從術(shù)后9天開始其恢復(fù)速度逐漸減慢，在觀察期內(nèi)仍然有部分大鼠未能完全恢復(fù)到正常水平。術(shù)后9、12、14d各給藥組與模型組比較均具有顯著性差異。表1-2梓醇對MCAO模型大鼠橫木行走能力的影響(;士s)
組別 η術(shù)后3天 η 術(shù)后6天 η 術(shù)后9天 n 術(shù)后12天 η術(shù)后14天手術(shù) 9 6 土 O**9 6 土 O**9 6 土 O**9 6 士 O**9 6 士 O**
模型 11 2.00±1.48 10 3·00±1.56 10 3·00±2.05 9 3.33±1.94 8 3.88±1.73梓醇 9 2.33±2, 18 9 3·67±1.66 9 4·56±1.81* 9 4.89±1.76* 9 5.22土 1.20*天保寧 9 2.33±2.40 9 3.67±1.50 9 4. 11±1.62 8 5. 13±0.84* 8 5.25±0·89*注與模型組比較*ρ < O. 05，**ρ < O. 01。從表1-2可見，假手術(shù)組大鼠橫木行走能力沒有變化，各缺血組大鼠橫木行走能力隨著時間的延長而明顯改善，而給藥組大鼠的橫木行走能力的恢復(fù)速度明顯快于模型組，但在觀察期內(nèi)仍然有個別大鼠未完全恢復(fù)到正常水平。在術(shù)后9、12、14山梓醇301^/kg、60mg/kg組，均能夠促進大鼠行走能力的恢復(fù)，與模型組比較行走評分顯著提高，(P
<O. 05);天保寧組分別在術(shù)后9d和12d促進大鼠行走能力的恢復(fù)，與模型組比較具有顯著性差異，且在術(shù)后14d均表現(xiàn)出明顯的促進橫木行走能力恢復(fù)的作用。表1-3梓醇對MCAO模型大鼠抓握力量的影響(—x 士s)
組別 η術(shù)后3天_η 術(shù)后6夭 η 術(shù)后9天 η 術(shù)后12天 η 術(shù)后14天
假手術(shù) 9 699. 8±63. 7** 9 780. 4±71. I** 9 750. 0±86. 3** 9 840. 9±87· 8* 9 960. 8±84. O**模型 11 550. 5± 108. 9 10 608.9 土 88.0 10 555. 6± 155. 3 9 692. 3 土 161. 5 8 718. 1±92. O梓醇 9 552.3 土 118.8 9 642.7±45.8 9 668. 3± 102. 2* 9 786. 2 土 87. O 9 831. I ± 123. I*天保寧 9 531.6±83.4 9 647, 2土 105. 7 9 703·7±107. I* 8 786. 8±108. 5 8 810.4±98. 9*注與模型組比較*p < O. 05，林P < O. 01。從表1-3可見，腦缺血后大鼠前肢的抓握力量顯著降低，缺血9d，各給藥組與模型組比較，均能明顯增加大鼠的前肢抓握力量，P < O. 05，P < O. 01 ;缺血14d，與模型組比較，梓醇30mg/kg、60mg/kg組,天保寧組能明顯增加大鼠的前肢抓握力量，p < O. 05。表1-4梓醇對MCAO模型大鼠神經(jīng)癥狀評分的影響(;±s)
權(quán)利要求
1.梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述，梓醇在制備改善缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述，梓醇具有改善缺血性腦卒中再灌注損傷能量代謝障礙的作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述，梓醇具有抗缺血性腦卒中再灌注損傷氧化應(yīng)激的作用。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的梓醇新用途，其特征是梓醇在藥物中的含量為10-99%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種梓醇的新用途，屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。具體是梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物中的應(yīng)用，以及在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P9/10GK102885838SQ20111020281
公開日2013年1月23日 申請日期2011年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月20日
發(fā)明者玄振玉, 黃孝春, 蔡垠, 魏惠華, 陳葉明 申請人:蘇州玉森新藥開發(fā)有限公司