專利名稱：一種治療脊髓損傷的方法和治療劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療脊髓損傷(SCI)的新方法和治療劑。具體地說，本發(fā)明涉及通過向SCI忠者的脊髓的損傷部位局部注射CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞而治療脊髓損傷的方法和活性成分是CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的治療劑。
背景技術(shù)：
脊髓損傷引起嚴(yán)重的癥狀截癱(雙下肢麻痹)或四肢癱瘓或甚至呼吸肌麻痹兼四肢癱瘓，因此輪椅和臥床不起的生活是不可避免的。至今仍未發(fā)現(xiàn)治療SCI的有效療法。由于瞬間的交通或運(yùn)動(dòng)事故而被剝奪手和腳自由的患者極渴望活動(dòng)他或她自己的手和腳并通過恢復(fù)損傷的神經(jīng)通路而再次行走。
自19世紀(jì)末期以來，人們已相信哺乳動(dòng)物CNS通路根本不能再生或者很少再生，即使有，也無明顯的功能[例如Ra’mon y Cajal，Degeneration and Regeneration in the Nervous System，1959，Hafner，New York(1928)]。但是，過去二十年的研究披露哺乳動(dòng)物CNS通路的功能上的明顯再生是可能的，因而否定了全世界認(rèn)為的不能再生的觀念。
一種關(guān)于CNS環(huán)境的假說于最近出現(xiàn)并逐漸成為一個(gè)教條。它主張哺乳動(dòng)物CNS的環(huán)境不允許軸突生長(zhǎng)，因而必需使環(huán)境允許誘導(dǎo)軸突的再生。Schwab和他的合作者發(fā)現(xiàn)了CNS白質(zhì)中與髓磷脂相關(guān)的生長(zhǎng)抑制因子，并推測(cè)所述因子導(dǎo)致哺乳動(dòng)物CNS不允許再生。事實(shí)上，他們報(bào)道由抗體導(dǎo)致的因子的中和誘導(dǎo)橫切之后錐體束的再生，且該束的外延越過整個(gè)成年大鼠的損傷部位[Nature，343(18)，269(1990)]。除了他們的報(bào)道之外，還進(jìn)行了多種嘗試使CNS環(huán)境允許誘導(dǎo)成年大鼠脊髓的再生移植外周神經(jīng)節(jié)、雪旺氏細(xì)胞、嗅覺鞘樣細(xì)胞(OEC，對(duì)嗅神經(jīng)和嗅球具有特異性的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞)。Cheng和他的合作者報(bào)道在除去成年大鼠脊髓節(jié)段之后通過在空的脊髓間隙中橋接神經(jīng)節(jié)發(fā)生功能恢復(fù)(Science，273(26)，510(1996)]。Guest和他的合作者報(bào)道通過移植雪旺氏細(xì)胞，即PNS的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞而發(fā)生脊髓的再生[Exp.Neurol.，148，502(1997)]。Li和他的合作者報(bào)道在部分橫切頸上脊髓之后通過將培養(yǎng)的OEC移植到損傷部位發(fā)生錐體束的再生和功能恢復(fù)[Science，277(26)，2000(1997)]。
但是通過這些嘗試使環(huán)境允許再生的投射數(shù)量小且長(zhǎng)度短(至多10mm)，且大部分是異常的，達(dá)不到適當(dāng)?shù)哪繕?biāo)。因此功能恢復(fù)程度小，因而后肢不能完全支持體重。為了使SCI患者從輪椅上解放出來并用他們自己的腳再次行走，重要的是開發(fā)一種新能夠重建類似于正常的神經(jīng)投射的治療方法。
本發(fā)明的目的是提供一種新的在數(shù)量(投射神經(jīng)元的數(shù)量)、長(zhǎng)度(軸突的范圍)、通路和末端方面實(shí)現(xiàn)恢復(fù)類似于正常的神經(jīng)投射的方法，并使SCI患者能夠再次行走。本發(fā)明還提供所述方法的治療劑。預(yù)期本發(fā)明能減少患者和他們的家庭護(hù)理者的生理和心理負(fù)擔(dān)，并節(jié)約沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)和社會(huì)福利成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明基于我們的假設(shè)，即局部損傷癥狀而不是CNS的整體不允許環(huán)境導(dǎo)致軸突再生失敗。所述假設(shè)與目前所持觀點(diǎn)相當(dāng)不同，但與我們的脊髓損傷研究的發(fā)現(xiàn)一致我們發(fā)現(xiàn)被橫切的CNS通路中顯著的再生自發(fā)地發(fā)生在小于一個(gè)月齡的大鼠被急速切割之后。在2-3個(gè)月齡的成年大鼠中，自發(fā)性再生不發(fā)生，推測(cè)因?yàn)槠銫NS組織比年幼動(dòng)物堅(jiān)硬，因而橫切導(dǎo)致?lián)p傷部位的水腫。但是，當(dāng)將胚胎大鼠脊髓組織移植到損傷部位時(shí)，類似于正常投射的軸索再生被誘導(dǎo)。因此，我們推測(cè)CNS環(huán)境不是整體不允許再生，而再生失敗是由于局部條件惡化，即使生長(zhǎng)軸突能夠發(fā)現(xiàn)正確通路和目標(biāo)的軸突指導(dǎo)線索紊亂導(dǎo)致的。似乎很有可能有多種因素使CNS環(huán)境允許破壞軸突指導(dǎo)線索的一致性，從而限制軸突再生的數(shù)量和范圍，導(dǎo)致異常投射。根據(jù)我們的推測(cè)，我們嘗試通過移植從新生大鼠脊髓收集的培養(yǎng)的混合的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞來改善損傷部位的局部條件，期望恢復(fù)損傷部位的微環(huán)境。在完全橫切成年大鼠胸節(jié)段水平的脊髓之后將神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞移植到損傷部位。移植的動(dòng)物從完全截癱恢復(fù)到幾乎正常行走。再生的投射在數(shù)量、范圍、通路和末端方面類似于正常。本發(fā)明通過對(duì)哺乳動(dòng)物CNS再生的新認(rèn)識(shí)來實(shí)現(xiàn)。與CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞妨礙軸突再生的常規(guī)觀念完全相反，我們使用這種細(xì)胞成功地實(shí)現(xiàn)脊髓的神經(jīng)修復(fù)。神經(jīng)連接恢復(fù)和功能復(fù)原的程度大大高于根據(jù)常規(guī)觀念進(jìn)行嘗試的程度。
本發(fā)明提供一種通過將CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞移植到損傷的人或其它哺乳動(dòng)物的脊髓而治療脊髓損傷的方法。用于移植的細(xì)胞包括除了II型星形膠質(zhì)細(xì)胞之外的培養(yǎng)的CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中的至少一種。本發(fā)明還提供適用于所述治療脊髓損傷的方法的治療劑。
所述治療劑包含至少一種除了I型星形膠質(zhì)細(xì)胞之外的培養(yǎng)的CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞作為活性成分，并可以包含任何醫(yī)療允許的賦形劑。本發(fā)明的進(jìn)一步特征和優(yōu)點(diǎn)將在以下“本發(fā)明的最佳實(shí)施方式”中變得清晰。
本發(fā)明的最佳實(shí)施方式CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞由I型和II型星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞和它們的祖細(xì)胞組成。本發(fā)明的治療劑包含至少一種除了I型星形膠質(zhì)細(xì)胞之外的培養(yǎng)的CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞作為活性成分；它們可以是多于2種CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的混合的細(xì)胞。所述的CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞優(yōu)選包括所述三種細(xì)胞即I型星形膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞、II型星形膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞和O4祖細(xì)胞中的至少一種。最適宜的治療劑主要包含II型星形膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞，但可以包含I型星形膠質(zhì)細(xì)胞、II型星形膠質(zhì)細(xì)胞，少突膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞。此外，它們可以包含雪旺氏細(xì)胞和嗅覺鞘樣神經(jīng)膠質(zhì)。
用于本發(fā)明的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的來源無限制；可以使用自體的或同種異體的或異種的CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。其中優(yōu)選自體的細(xì)胞和同種異體的細(xì)胞。對(duì)于臨床應(yīng)用，可以從患者自身損傷的脊髓中收集自體的細(xì)胞?？梢詮牧鳟a(chǎn)的胚胎或腦/心臟死亡的尸體中收集同種異體的細(xì)胞?？梢詮呢i、猴或某些其它哺乳動(dòng)物的CNS中收集異種細(xì)胞。由于CNS是免疫學(xué)豁免部位，異種細(xì)胞可以在施用少量免疫抑制藥物時(shí)存活。
CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的來源優(yōu)選胚胎、新生兒或幼小的哺乳動(dòng)物，但可以是年老的動(dòng)物。優(yōu)選但不是必須地從它們的脊髓中進(jìn)行收集。任何其它CNS部分，例如大腦皮層、腦干或全腦可以是供應(yīng)來源。來源于胚胎干細(xì)胞或神經(jīng)干細(xì)胞的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞也可以是供應(yīng)來源。神經(jīng)干細(xì)胞分成成人型、胚胎型和神經(jīng)上皮型。它們不僅可以從胚胎或新生兒中收集，也可以從成人中收集。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞可以通過常規(guī)的生物技術(shù)，使用刺激劑EGF、bFGF、CNTF、視黃酸或T3由這些來源制備[(Genes Dev.，10，3129-3140(1996)，Neuron，18，81-93(1997)，J.Neurosci.，18，3620-3629(1998))。
任何細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以用于制備神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。例如，用蛋白酶(如胰蛋白酶)處理在無菌中切除的脊髓或大腦皮層以制備單細(xì)胞或小細(xì)胞群。然后將它們接種于陪替氏培養(yǎng)皿并在含有血清的培養(yǎng)基中于CO2恒溫箱中培養(yǎng)一定的時(shí)間。在培養(yǎng)期間，神經(jīng)元早早死亡而混合的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞存活。關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)，可以使用含有10-20％胎牛血清、F-10培養(yǎng)基或RPMI1640或某些其它培養(yǎng)基的Dulbecco’s MEM(DMEM)。培養(yǎng)基每3-4天更換，并保持在大約30-40℃下。
過了幾天，星形膠質(zhì)細(xì)胞由于其旺盛的增殖潛能而變成占絕大多數(shù)的細(xì)胞，如果需要的話可以通過使用不含血清的培養(yǎng)基而增加少突膠質(zhì)細(xì)胞。Percoll密度梯度法或粘合劑差異法有效地分離少突膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞。
可以通過制備在培養(yǎng)基或適宜的緩沖溶液如PBS中的培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的懸浮液而制備適于應(yīng)用的本發(fā)明的治療劑。細(xì)胞懸浮液的培養(yǎng)基可以包含醫(yī)學(xué)上允許的添加劑，除非它們抑制細(xì)胞活性。應(yīng)用的細(xì)胞密度的范圍為103-106細(xì)胞/μL，優(yōu)選104-105細(xì)胞/μL。
所述治療脊髓損傷的方法是將有效量的懸浮液注射到損傷部位。所述方法適用于人和其它哺乳動(dòng)物，用于部分或全部橫切。對(duì)損傷的位置沒有限制髓質(zhì)、頸、胸、腰或骶骨節(jié)段中的任何部分。所述的方法適用于呼吸麻痹、四肢癱瘓、截癱，而不管其嚴(yán)重程度。
所述的方法最好用于由跌落事故或運(yùn)動(dòng)事故導(dǎo)致的脊髓損傷，但不一定應(yīng)用于這些外傷性事故。例如它也可以用于腦血管導(dǎo)致的錐體束損傷。所述治療可以優(yōu)選進(jìn)行急性治療，即在24小時(shí)之內(nèi)，優(yōu)選8小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行治療。但是，所述的治療也可以在慢性階段進(jìn)行，例如損傷后一周、5年或者甚至大于10年進(jìn)行。后者的依據(jù)是發(fā)現(xiàn)相當(dāng)數(shù)量的投射神經(jīng)元在切斷軸突之后存活數(shù)個(gè)月(大鼠為數(shù)個(gè)月，對(duì)應(yīng)于人則多于10年)。因此似乎軸突的再生是可能的，條件是損傷部位的局部條件得到改善。
可以使用任何方法將培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的懸浮液施用于損傷部位，只要它是注射安全和可靠的。例如，通過椎板切除術(shù)暴露脊髓，然后可以在外科顯微鏡下使用微量調(diào)節(jié)注射器髓內(nèi)注射懸浮液。當(dāng)獲得高清度MRI圖像時(shí)，可以不用椎板切除術(shù)注射細(xì)胞懸浮液，如利用腰穿刺技術(shù)進(jìn)行注射。
待注射的CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量取決于損傷的程度。通常對(duì)于成年患者它的總量范圍為103-107細(xì)胞，優(yōu)選105-107細(xì)胞。
在注射細(xì)胞之前，可以施用免疫抑制藥物如環(huán)孢菌素、他克莫司(FK505)、環(huán)磷酰胺(cyclophosamid)、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤或咪唑立賓。它在移植異種細(xì)胞時(shí)是必需的。
實(shí)施例在以下的工作實(shí)施例中更為完整地解釋本發(fā)明，所述實(shí)施例不限制本發(fā)明的范圍。
工作實(shí)施例1制備從新生大鼠的脊髓中收集的培養(yǎng)的混合的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞并分析它們的組成無菌下從1-2日齡的EGFP-轉(zhuǎn)基因SD大鼠中切除脊髓[EGFP增強(qiáng)的綠色熒光蛋白，SD＝Sprague-Dawley系；指FEBS Letter，407，313-319，1997]。通過胰蛋白酶和DNase處理將它解離成單細(xì)胞和小細(xì)胞群。以在補(bǔ)充10％的胎牛血清、青霉素100單位/mL、兩性霉素B2.5μg/mL、鏈霉素100μg/mL的DMEM培養(yǎng)基中的5×105細(xì)胞/75cm2的密度將它們接種于陪替氏培養(yǎng)皿，并在常規(guī)條件下培養(yǎng)。細(xì)胞密度對(duì)應(yīng)于取自3-4個(gè)脊髓/皿的物質(zhì)。在第2、6和10天，加入相同組成的DMEM培養(yǎng)基。2周后細(xì)胞達(dá)到融合。用胰蛋白酶-EDTA(由GIBCO/BRL、0.25％胰蛋白酶、1mM EDTA制備)將它們離解，將其再接種(1皿→1皿)并培養(yǎng)。每3-4天進(jìn)行一次培養(yǎng)基更換。在開始培養(yǎng)后的第3-4周，用胰蛋白酶-EDTA離解細(xì)胞，并用DMEM培養(yǎng)基(1皿提供50μL)將其制成4-5×104細(xì)胞/μL的懸浮液。在工作實(shí)施例2中施用所述細(xì)胞懸浮液。
培養(yǎng)的混合的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的組成由抗原特異性標(biāo)記分子分析并列在表1中。應(yīng)用Neuroglia，Helmut Kettenmann等人，OxfordUniversity Press(1995)所述的分類。
從大鼠脊髓中收集的培養(yǎng)的混合的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的組成細(xì)胞類型 抗原的表達(dá)充足率Vim1Ran2 A2B5 O4 GFAP (％)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的直系祖細(xì)胞 + + + -- 5I型星形膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞+ + - -- 25I型星形膠質(zhì)細(xì)胞- + - -+ 502A祖細(xì)胞 + - + -- 0II型星形膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞 + - + -+ 45II型星形膠質(zhì)細(xì)胞 - - + -+ 0O4祖細(xì)胞 - - + +- 15橈骨神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞 + - - -- 3(RC2+)小膠質(zhì)細(xì)胞(ED1+) - - - -- 21Vim-波形蛋白工作實(shí)施例2將神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞注射到損傷脊髓的損傷部位在胸下節(jié)段快速地完全橫切成年SD大鼠(♀，2個(gè)月大)的脊髓。用哈密頓微量調(diào)節(jié)注射器，以4-5×104細(xì)胞(1μL)每個(gè)部位的數(shù)量將在工作實(shí)施例1中制備的細(xì)胞懸浮液注射到橫斷面嘴側(cè)和尾側(cè)的兩個(gè)部位。用Basso，Beattie和Bresnahan[J.Neurotrauma 121-21(1995)]開發(fā)的BBB度量評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)。簡(jiǎn)言之，得分0和21分別表示癱瘓大鼠的運(yùn)動(dòng)和正常運(yùn)動(dòng)。得分1至8集中在不能站立或支持重量的大鼠的肢體運(yùn)動(dòng)。得分9至13描述能夠站立然后以不同程度的后前肢協(xié)調(diào)行走的大鼠。得分14至20描述作為腳放置、趾間隙、尾位置和軀干穩(wěn)定性漸漸得到改善的良好的行走大鼠。
在開始時(shí)，用神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞注射處理的脊髓損傷的大鼠完全截癱和無尿，具有濕潤(rùn)和骯臟的肛門與生殖器區(qū)域。在外科手術(shù)后3-4天，它們開始移動(dòng)后肢。一周后，后肢變得能夠支持體重。2周后觀察到有后-前肢協(xié)調(diào)的行走。3周后它們能夠以類似于正常動(dòng)物的方式行走。BBB得分從0升高到大于15。通過示蹤法檢查的再生的軸突在數(shù)量、范圍和通路方面類似于正常的投射。它們終于正常目標(biāo)并形成突觸。
工作實(shí)施例3制備從成年大鼠的損傷的脊髓中收集的培養(yǎng)的混合的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的懸浮液在胸下節(jié)段橫切60天大的EGFP-轉(zhuǎn)基因成年SD大鼠的脊髓[參考FEBS Letter，407，313-319，1997]。將動(dòng)物飼養(yǎng)一個(gè)月。在外科手術(shù)后一個(gè)月，在無菌下切除2-3個(gè)包括損傷部位的節(jié)段，并用蛋白酶處理以以類似于工作實(shí)施例1所述的方式制備單細(xì)胞或小細(xì)胞群。將這些細(xì)胞或細(xì)胞群以5×106細(xì)胞(取自一只或二只大鼠的物質(zhì))/皿的密度接種于陪替氏培養(yǎng)皿(75cm2)，并在常規(guī)條件下在補(bǔ)充10％胎牛血清、青霉素100單位/mL、兩性霉素B2.5μg/mL、鏈霉素100μg/mL的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在第2、6和10天加入相同組成的DMEM培養(yǎng)基。然后每3-4天進(jìn)行培養(yǎng)基更換。來源于成年的物質(zhì)的細(xì)胞增殖大大慢于來源于新生兒的物質(zhì)，且細(xì)胞在3-4周后達(dá)到融合。如所述地用胰蛋白酶-EDTA將它們離解，將其再接種(1皿→1皿)，并再培養(yǎng)2周。在培養(yǎng)開始后5-6周，收集細(xì)胞，并以類似于工作實(shí)施例1所述的方式制備密度為4-5×104細(xì)胞/μL的懸浮液。來源于成年大鼠損傷脊髓的培養(yǎng)的混合的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的懸浮液用于注射到工作實(shí)施例4的損傷部位。
工作實(shí)施例4將來源于成年大鼠的損傷的脊髓的培養(yǎng)的混合的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞注射到脊髓損傷部位。
在胸下節(jié)段快速地完全橫切成年SD大鼠(♀，2個(gè)月大)的脊髓。以類似于實(shí)施例2所述的方法將實(shí)施例3制備的細(xì)胞懸浮液注射到損傷部位。然后動(dòng)物從完全截癱恢復(fù)到如實(shí)施例2中的行走。
對(duì)比實(shí)施施1將培養(yǎng)的I型星形膠質(zhì)細(xì)胞注射到損傷部位以類似于先前的Wang JJ等人(Effects of astrocytesimplantation into the hemisected adult rat spinal cord.Neuroscience 65，973-981，1995)的研究的方式制備來源于新生大鼠大腦皮層的I型星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液。在胸下節(jié)段快速地完全橫切成年SD大鼠(♀，2個(gè)月大)的脊髓，并用哈密頓微量調(diào)節(jié)注射器，以4-5×104細(xì)胞(1μL)每個(gè)部位的數(shù)量將細(xì)胞懸浮液注射到橫斷面嘴側(cè)和尾側(cè)的兩個(gè)部位。所述的方法類似于工作實(shí)施例2所述的方法。在開始時(shí)，大鼠如實(shí)施例2那樣完全截癱和無尿，具有濕潤(rùn)和骯臟的肛門與生殖器區(qū)域，而功能恢復(fù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)差于工作實(shí)施例2。一周后發(fā)生微小的后肢運(yùn)動(dòng)，但體重支持從未發(fā)生。BBB度量的評(píng)價(jià)總是小于8分。
比較實(shí)施例2將活化的培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞注射到損傷部位我們制備巨噬細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液，并通過以類似于先前SchwartzM等人(Implantation of stimulated homologous macrophagesresults in partial recovery of paraplegic rats，1998)的研究的方式共培養(yǎng)坐骨神經(jīng)節(jié)段而進(jìn)行培養(yǎng)和活化。在胸下節(jié)段快速地完全橫切成年SD大鼠(♀，2個(gè)月大)的脊髓，并用哈密頓微量調(diào)節(jié)注射器，以4-5×104細(xì)胞(1μL)每個(gè)部位的數(shù)量將細(xì)胞懸浮液注射到橫斷面嘴側(cè)和尾側(cè)的兩個(gè)部位。所述的方法類似于工作實(shí)施例2所述的方法。在開始時(shí)，大鼠如工作實(shí)施例2那樣完全截癱和無尿，具有濕潤(rùn)和骯臟的肛門與生殖器區(qū)域，而功能恢復(fù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)差于工作實(shí)施例2。一周后發(fā)生微小的后肢運(yùn)動(dòng)，但體重支持從未發(fā)生。BBB度量的評(píng)價(jià)總是小于8分。結(jié)果非常類似于對(duì)比實(shí)施例2的結(jié)果。
工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供一種通過將培養(yǎng)的混合的CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞注射到損傷部位而治療脊髓損傷的方法。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)修復(fù)在數(shù)量(投射神經(jīng)元的數(shù)量)、長(zhǎng)度(軸突的范圍)、通路和末端方面幾乎難以與正常大鼠區(qū)分的神經(jīng)連接。從完全截癱快速恢復(fù)至不僅支持體重而且進(jìn)行后前肢協(xié)調(diào)行走的程度。盡管存在多種治療脊髓損傷的努力，但這種突破是迄今未實(shí)現(xiàn)的，且它提供了目前不存在的有效治療策略。當(dāng)開發(fā)出有效治療時(shí)，它將減少患者和他們的家庭護(hù)理者的醫(yī)療和心理負(fù)擔(dān)，并節(jié)約沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)和社會(huì)福利成本。
權(quán)利要求
1.一種用于治療脊髓損傷的治療劑，所述治療劑包含作為活性成分的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞包括選自除了I型星形膠質(zhì)細(xì)胞之外的培養(yǎng)的CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的至少一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑，其中所述的CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞包括選自I型和II型星形膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的治療劑，其中所述的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞主要包含II型星形膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之任一項(xiàng)的治療劑，其中所述的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是來源于脊髓的混合的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之任一項(xiàng)的治療劑，其中所述的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是自體的或同種異體的。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4之任一項(xiàng)的治療劑，其中所包含的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量為103-106細(xì)胞/μL。
7.一種通過向人或其它哺乳動(dòng)物的損傷的脊髓局部注射有效劑量的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞而治療脊髓損傷的方法，所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞包括選自除I型星形膠質(zhì)細(xì)胞之外的培養(yǎng)的CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中的至少一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是來源于脊髓的混合的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8的治療劑，其中所述的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是自體的或同種異體的。
10.根據(jù)權(quán)利要求7-9之任一項(xiàng)的方法，其中所述損傷的脊髓是成人身體的部分，而所述培養(yǎng)的CNS神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的注射總數(shù)為103-107。
全文摘要
一種用于治療脊髓損傷的治療劑，所述治療劑包含作為活性成分的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，所述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞包括作為CNS膠質(zhì)細(xì)胞的I型星形膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞和II型星形膠質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞和04祖細(xì)胞；和一種特征在于通過將有效劑量的上述治療劑局部給藥而治療脊髓損傷的方法。
文檔編號(hào)A61K35/12GK1545416SQ0281643
公開日2004年11月10日 申請(qǐng)日期2002年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月23日
發(fā)明者川口三郎, 西尾健資, 資 申請(qǐng)人:川口三郎, 西尾健資