專利名稱：一種精制靈芝孢子油及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以植物為原料的一種藥品和保健品及其制備方法，具體涉及的是精制靈芝孢子油及其制備方法。
背景技術(shù)：
靈芝孢子粉是靈芝成熟時期不斷從菌蓋下釋放的孢子，八十年代開始，就較多的對靈芝及其孢子粉抗腫瘤方面的基礎(chǔ)研究；到九十年代，美國、日本等國將靈芝應(yīng)用至臨床，用于癌癥及AIDS(艾滋病)治療方面，得到了國際研究學(xué)者的廣泛注意。近年來研究和應(yīng)用更多的是人工培育的靈芝孢子粉及其提取物，文獻報導(dǎo)的靈芝孢子粉主要成分包括脂肪酸類、甾醇類、三萜類、維生素類、胡蘿卜素、內(nèi)酯、蛋白質(zhì)和氨基酸類、糖肽類、生物堿類和無機離子等。據(jù)文獻[江蘇藥學(xué)與臨床研究，2001，9(2)55]報導(dǎo)，我國科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)是靈芝孢子的抗病“主力”。破壁靈芝孢子用超臨界二氧化碳萃取的脂質(zhì)活性物質(zhì)為靈芝孢子油。有關(guān)靈芝孢子油的化學(xué)組成研究較少，僅田弋夫等[中國油脂，2003，28(9)44]用GC/MS法分析了靈芝孢子油中的脂肪酸成分，并稱在其靈芝孢子油中不含三萜成分。發(fā)明專利申請?zhí)?9123952.0稱采用超臨界CO2萃取法得到的靈芝孢子油含三萜類物質(zhì)200mg/g，發(fā)明專利申請?zhí)?00410017638.2稱其采用超臨界CO2萃取法得到的靈芝孢子油含三萜類物質(zhì)200mg/g～500mg/g，而陳若蕓等[藥學(xué)學(xué)報，1991，26(4)267～273]報導(dǎo)的國家自然科學(xué)基金資助項目《赤芝孢子粉三萜化學(xué)成分研究》中，采用了8kg赤芝孢子粉的脂溶性提取物分離三萜化學(xué)成分，結(jié)果只獲得了5個三萜化合物，總量為1.135g，即脂溶性提取物中三萜的得率為0.014％。
靈芝孢子油的提取方法有傳統(tǒng)的溶劑提取法，由于存在提取效率低、能耗高、費時長等缺點，現(xiàn)有采用超臨界CO2萃取法的報道和專利申請較多，如CN144536A、CN1094766C等，與傳統(tǒng)方法相比，有生產(chǎn)周期短、有效成分不易破壞，無溶劑殘留、不污染環(huán)境等優(yōu)點。盡管如此，超臨界CO2萃取法萃取靈芝孢子油需要的較高的壓力和較長的提取時間，而且提取收率不穩(wěn)定，批與批之間收率有較大的誤差等缺點。
另外由于靈芝孢子粉粉體太細(破壁完全的孢子粉細度可達400目以上)，在超臨界CO2的萃取時，在高壓條件下容易造成噴料，不僅影響孢子油的提取質(zhì)量，也給生產(chǎn)帶來安全隱患。為了解決這一問題，有報導(dǎo)采用制粒方法，如專利CN1094766C，其方法是將靈芝孢子粉加水、明膠和淀粉，在室溫下擠壓成型；專利CN1586295A是制粒時選用乙醇水溶液5～95％，制粒后在30～50℃進行減壓或熱風(fēng)干燥循環(huán)干燥。這此方法雖然解決了噴料問題，但因加入輔料和粘合劑而造成了污染提取物的可能，或因加熱而造成成分破壞的可能，直接影響提取收率。
靈芝孢子粉的產(chǎn)地不同，種植的方法不同及提取方法的不同均影響靈芝孢子油的提取收率及有效成分的組成和療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種有明確化學(xué)組成的精制靈芝孢子油及其制備方法。
本發(fā)明所提供的精制靈芝孢子油，含有靈芝孢子油酯類、脂肪酸類、麥角甾醇類、三萜類成分，其靈芝孢子油酯類中的結(jié)合有機酸與脂肪酸類組成的總有機酸的重量含量為靈芝孢子油的85％～95％，麥角甾醇類的重量含量為靈芝孢子油的0.1％～3％；三萜類的重量含量為靈芝孢子油的0.05％～1.2％。
靈芝孢子油酯類是由有機酸與甘油結(jié)合構(gòu)成，為靈芝孢子油的主成分，在靈芝孢子油中此類成分為本項目研究者首次發(fā)現(xiàn)并提出；脂肪酸類為靈芝孢子油中游離脂肪酸，氣相色譜法測定其重量含量約為靈芝孢子油的1.5％～20％，靈芝孢子油酯類中的結(jié)合有機酸與游離脂肪酸之和為總有機酸，靈芝孢子油酯類通過水解，得到的有機酸，與游離脂肪酸一起，采用滴定法測定，以油酸為標準計算其總有機酸的含量，本發(fā)明所提供的靈芝孢子油中總有機酸的重量含量為靈芝孢子油的85％～95％。
麥角甾醇類含量的測定取靈芝孢子油通過硅膠柱富集處理，以麥角甾醇標準品對照，采用紫外分光光度法測定，測定波長282nm，以本發(fā)明的方法獲得的靈芝孢子油中含麥角甾醇類的重量含量可達到靈芝孢子油的0.1％～3.0％。
三萜類成分為靈芝孢子中的微量成分，在靈芝孢子油中單一的三萜難以檢測到。靈芝孢子油的三萜類成分通過硅膠柱富集處理，以靈芝酸A標準品對照，采用紫外分光光度法測定，測定波長254nm，以本發(fā)明的方法獲得的靈芝孢子油中三萜類的重量含量為靈芝孢子油的含量為0.05％～1.2％。
麥角甾醇類為靈芝孢子油中的特有成分，其它植物油(菌類植物油除外)中不含此類成分；在本發(fā)明的靈芝孢子油所說的麥角甾醇類的成分有麥角甾醇(Ergosterol)、麥角甾-7，22-二烯-3β，5α，6β-三醇、麥角甾-7，22-二烯-3β，5α，6α-三醇、麥角甾-7，9，22-三烯-3β，5α，6α-三醇、麥角甾-4，6，8(14)，22-四烯-(3)-酮、麥角甾醇棕櫚酸酯等，為靈芝孢子油防癌抗癌有效成分之一。其中麥角甾醇通過硅膠柱富集處理，以麥角甾醇標準品對照，采用HPLC法測定，282nm波長檢測，以本發(fā)明的方法獲得的靈芝孢子油中含麥角甾醇的重量含量可達到靈芝孢子油的0.04％～1.0％。
在靈芝孢子油酯類成分中甘油三油酸酯為其代表成分之一，以甘油三油酸酯標準品對照，采用HPLC法測定，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，以本發(fā)明的方法獲得的靈芝孢子油中甘油三油酸酯的含量為20％～35％。
為實施本發(fā)明的另一個目的，所提供的靈芝孢子油的制備方法是采用加裝了超聲提取裝置的超臨界流體設(shè)備，即用超聲強化超臨界流體技術(shù)提取靈芝孢子油的制備方法，對靈芝孢子粉進行提取分離。
先將破壁的孢子粉原料采用一步制粒機用干壓法制成粒徑大小為0.1～0.5cm的顆粒，置于超聲強化超臨界萃取釜中，在超聲的聲頻為20～80kHz，功率為10～1000W，聲強為10～1500W/cm2下，同時通入CO2超臨界流體，在萃取溫度為40～50℃，萃取壓力為25～35MPa，CO2流量為5.0～40L/h，進行萃取1～4小時后，從分離釜的出口處出料得到靈芝孢子油，用每分鐘4000～20000轉(zhuǎn)的高速離心法進行精制。
該方法將超聲提取技術(shù)與超臨界流體提取技術(shù)相結(jié)合，同時應(yīng)用二種技術(shù)提取靈芝孢子油，達到提高出油率、降低萃取溫度和壓力，縮短提取時間的目的。采用一步制粒機干壓法制粒時，優(yōu)選制粒機主壓力為2～8MPa，側(cè)壓力為0.1～1Mpa。同時超聲強化超臨界萃取時，可以用一級分離，也可以用多級分離法，在通入CO2超臨界流體的同時也可以加入乙醇或甲醇作夾帶劑，以達到提高收率的目的，超臨界流體萃取的工藝也可采用CN144536A、CN1094766C所公開的制備方法。
本發(fā)明的有益效果1、本發(fā)明所提供的靈芝孢子油的化學(xué)組成清楚，易控制產(chǎn)品的質(zhì)量，產(chǎn)品純度高。
2、本發(fā)明所提供的制備方法，將超聲提取和超臨界流體萃取技術(shù)相結(jié)合，靈芝孢子油的提取率比超臨界流體萃取法可提高15～30％。
3、本發(fā)明的制備方法與超臨界流體萃取法相比，在相同的提取時間內(nèi)能明顯降低超臨界流體萃取時的溫度和壓力；在相同的萃取溫度和壓力下又能縮短提取時間。
4、本發(fā)明采用一步干壓制粒法將破壁孢子粉制成顆粒后提取，解決了超臨界CO2提取時的沖料的安全性和提取不完全的問題，制粒方法簡單，不需加入任何輔料和粘合劑，也不需要經(jīng)過加熱和干燥的過程，避免了因加入輔料和粘合劑而造成污染提取物或因加熱而造成成分破壞的可能，簡化了工藝，節(jié)約了生產(chǎn)成本。
下面通過實施例進一步闡述本發(fā)明的技術(shù)方案。
具體實施例方式
實施例1.
一.采用超臨界流體萃取法取廣東梅州產(chǎn)、破壁率在95％以上的赤芝的靈芝孢子粉，用干壓制粒機直接干壓制粒，主壓力2MPa，側(cè)壓力0.5MPa，制成0.1～0.4cm的顆粒，過篩，篩去60目以上的細粉，細粉再同法制粒。稱取1kg顆粒，置于5立升的超臨界萃取釜中萃取，萃取壓力30Mpa、萃取溫度50℃，CO2流量為12L/小時，萃取時間為2小時，從分離釜得到靈芝孢子油，經(jīng)10000轉(zhuǎn)/分鐘的高速離心分離，得到精制靈芝孢子油，收率17.8％；二.超聲強化超臨界流體萃取法用與實施例1基本相同的實驗條件，但當達到相同的溫度和壓力時，開啟超聲設(shè)備，超聲波的頻率為15kHz，功率為30W，聲強為30W，提取時間為2小時，從解析釜得到靈芝孢子油，經(jīng)10000轉(zhuǎn)/分鐘的高速離心分離，得到精制靈芝孢子油，收率20.5％，與實施例1相比收率提高了15.2％。
兩種方法比較結(jié)果見下表1
表1

實施例2.
采用與實施例1相同的實驗條件，唯一不同的是超臨界CO2提取4小時，而強化超聲超臨界提取2小時，試驗結(jié)果見下表2表2

實施例3采用與實施例1相同的實驗條件，不同的是投料量為5kg，強化超聲超臨界提取的萃取壓力23Mpa、萃取溫度42℃，超聲波的頻率為40kHz，功率為50W，聲強為100W/cm2，提取時間為2小時，試驗結(jié)果見下表3表3

實施例4.
將5kg破壁后的靈芝孢子粉用干壓一步制粒機直接壓制成顆粒，過60目篩，除去篩出的細粉，細粉再同法制粒。制粒機主壓力3MPa，側(cè)壓力為0.5MPa。將制粒后的靈芝孢子粉置于加裝了超聲提取裝置的超臨界流體萃取釜中提取，超聲波的頻率為50kHz，功率為100W，聲強為200W/cm2；超臨界提取流體為CO2，萃取溫度為45℃，萃取壓力為25MPa，萃取時間為2小時，萃取流量為13L/h。
將5kg破壁后的靈芝孢子粉直接加入萃取釜中，按以上同條件進行提取，兩種試驗結(jié)果見下表4
表4

實施例5與實施例4的操作過程相同，不同的是投料量為20kg，制粒機主壓力為4kg，制成0.2～0.3cm的顆粒，超臨界CO2萃壓力25Mpa、萃取溫度45℃，超聲波的頻率為60kHz，功率為500W，聲強為900W/cm2，提取時間為2小時，從解析釜得到5300g靈芝孢子油，收率26.5％。
實施例6與實施例4的操作過程相同，不同的是投料量為100kg，制粒機主壓力為5kg，制成0.2～0.4cm的顆粒，超臨界CO2萃壓力28Mpa、萃取溫度50℃，超聲波的頻率為80kHz，功率為1000W，聲強為1200W/cm2，提取時間為3小時，從解析釜得到27300g靈芝孢子油，收率27.3％。
實施例7對用強化超聲超臨界CO2萃取法實施例的樣品進行成分檢測，結(jié)果見下表5
表5

權(quán)利要求
1.一種精制靈芝孢子油，其特征在于含有靈芝孢子油酯類、脂肪酸類、麥角甾醇類、三萜類成分，其靈芝孢子油酯類中的結(jié)合有機酸與脂肪酸類組成的總有機酸的重量含量為靈芝孢子油的85％～95％，麥角甾醇類的重量含量為靈芝孢子油的0.1％～3％；三萜類的重量含量為靈芝孢子油的0.05％～1.2％。
2.按權(quán)利要求1所述的靈芝孢子油，其特征在于靈芝孢子油酯類中甘油三油酸酯的重量含量為靈芝孢子油的20％～35％；麥角甾醇類成分中麥角甾醇的重量含量為靈芝孢子油的0.04％～1.0％。
3.一種精制靈芝孢子油的制備方法，其特征在于采用超聲強化超臨界流體萃取的制備方法，先將破壁的孢子粉原料采用一步制粒機用干壓法制成粒徑大小為0.1～0.5cm的顆粒，置于超聲強化超臨界萃取釜中，在超聲的聲頻為20～80kHz，功率為10～1000W，聲強為0.3～1500W/cm2下，同時通入CO2超臨界流體，在萃取溫度為40～50℃，萃取壓力為25～35MPa，CO2流量為5.0～40L/h，進行萃取1～4小時后，從分離釜的出口處出料得到靈芝孢子油，經(jīng)4000～20000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心分離得精制靈芝孢子油。
4.按權(quán)利要求3所述的靈芝孢子油的制備方法，其特征在于采用一步制粒機干壓法制粒時，制粒機主壓力為2～8MPa，側(cè)壓力為0.1～1Mpa。
全文摘要
一種精制靈芝孢子油及其制備方法。涉及以植物為原料的藥品和保健品及制備方法。精制靈芝孢子油含有靈芝孢子油酯類、脂肪酸類、麥角甾醇類、三萜類成分，其靈芝孢子油酯類中的結(jié)合有機酸與脂肪酸類組成的總有機酸的量含量為85％～95％，麥角甾醇類含量為0.1％～3％；三萜類含量為0.05％～1.2％。它采用加裝了超聲提取裝置的超臨界流體設(shè)備，用超聲強化超臨界流體技術(shù)提取靈芝孢子油的制備方法。本發(fā)明所提供的靈芝孢子油的化學(xué)組成清楚，易控制產(chǎn)品的質(zhì)量；靈芝孢子油的提取率比超臨界流體萃取法可提高15～30％。
文檔編號A61P35/00GK1907303SQ20051003619
公開日2007年2月7日 申請日期2005年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月1日
發(fā)明者陳路林, 李吉來, 劉菊妍, 寧德山, 馬芳勵, 蒙庚海, 黃海, 吳德玄 申請人:廣州漢方現(xiàn)代中藥研究開發(fā)有限公司