專利名稱：(－)－表沒食子兒茶素沒食子酸酯－鈣絡(luò)合物固體分散體及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥組合物領(lǐng)域，具體涉及一種(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯-鈣絡(luò)合物固體分散體及其制備方法與醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯[(-)-Epigallocatechin-3-gallate，簡稱EGCG]具有很好的清除自由基、抗氧化、抗突變、延緩衰老、防輻射、抗病毒、防癌抗癌、降血脂和降膽固醇、抗動脈粥樣硬化、抗菌、降血糖、降血壓等種保健及藥理作用。
但是，由于EGCG不穩(wěn)定，極容易吸潮、氧化，生物利用度低，吸收差，并對胃腸道造成刺激，長期使用會降低鐵等金屬在機體內(nèi)含量等缺點局限EGCG的應(yīng)用。單純茶多酚與金屬絡(luò)合物Ca2+形成絡(luò)合物，文獻報道僅用于制備茶多酚，無應(yīng)用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)制備EGCG、EGCG-金屬絡(luò)合物固體分散體并應(yīng)用于藥理作用的報道。這是由于EGCG與金屬Ca2+形成絡(luò)合物，難溶于水、乙酸乙酯、氯仿、吡啶等溶劑，在胃酸性環(huán)境下易分解為EGCG及金屬離子，而在腸道堿性環(huán)境下難于溶解、難于吸收。有報道不溶于水的交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(PPVP)應(yīng)用于對茶多酚的吸附，但無應(yīng)用水溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP)應(yīng)用于EGCG制備固體分散體的報道。
由于生活水平的提高和醫(yī)療保健的不斷進步，人均壽命越來越長，使世界人口老齡化的趨勢越來越明顯。據(jù)中國老年協(xié)會專家指出，我國老年人口迅速增長，1990年以來，我國老年人口以平均每年3.32％的速度增長，到1994年底，全國60歲以上老年人口總數(shù)已達(dá)到1.1億，約占人中總數(shù)的9.5％。2000年，我國已成為“老年型”國家，隨著老年人口增加，對老年性疾病的防治問題也越來越突出。因此，研制開發(fā)新的抗衰老及防治常見老年性疾病的新藥，已成為當(dāng)今醫(yī)藥學(xué)界的一個研究熱點。
鈣為人體內(nèi)最豐富也是最重要的物質(zhì)，占體重2％，其中99％固定于骨鈣庫，1％游離在血液和細(xì)胞外液里。鈣不足時，調(diào)節(jié)機能從骨骼釋放鈣來保持正常血鈣濃度，易導(dǎo)致骨質(zhì)疏松、嬰幼兒的佝僂病、成人的骨質(zhì)軟化。常用的無機鈣等補鈣劑難于在骨骼形成鈣沉積。在各種老年性疾病中，最常見的就是骨質(zhì)疏松，但是現(xiàn)有治療該疾病的藥物普通存在療效不盡理想的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有老年性疾病骨質(zhì)疏松治療中普遍存在療效不盡理想的問題，提供一種療效顯著的EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體的制備方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體在制備用于治療骨質(zhì)疏松的藥物或保健品中的應(yīng)用。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案本發(fā)明利用EGCG分子中相鄰的兩個酚羥基與Ca2+離子形成絡(luò)合物，再利用EGCG分子中的活潑氫與PVP分子中的羰基0以氫鍵結(jié)合在一起，形成EGCG-鈣絡(luò)合物PVP固體分散體，發(fā)揮EGCG與鈣的協(xié)同作用，增強EGCG的藥理作用，同時，避免EGCG在胃腸道與蛋白質(zhì)以疏水鍵和氫鍵等方式結(jié)合，減少EGCG對胃腸道的刺激，大大提高EGCG-鈣絡(luò)合物的水溶性。
EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體中EGCG-Ca與PVP-k30的質(zhì)量比一般為1∶4～1∶25，優(yōu)選比例為1∶6～1∶15，最佳比例為1∶7～1∶12。將EGCG溶于去離子水，滴加飽和鈣鹽溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，收集沉淀物，再用去離子水懸浮、洗滌、離心收集沉淀物，得到EGCG-鈣絡(luò)合物；將EGCG-鈣絡(luò)合物和聚乙烯吡咯烷酮混合溶解于水中，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體。EGCG為(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯[(-)-Epigallocatechin-3-gallate]。聚乙烯吡咯烷酮為PVP-k30(簡稱PVP)。所述鈣鹽溶液為水溶性鈣鹽，如氯化鈣溶液。
EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體大大提高EGCG-鈣絡(luò)合物的水溶性84倍，療效高于純EGCG，在制備用于治療骨質(zhì)疏松的藥物或保健品中有著重要的應(yīng)用。
EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體可與普通常規(guī)的藥劑填充劑配合，經(jīng)常規(guī)方法而制得；可根據(jù)需要制成適當(dāng)?shù)膭┬停玑槃?、輸液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、膏劑、糖漿劑或栓劑等。通常以口服方式使用，當(dāng)然也可以采用其它給藥方式；EGCG-鈣每天使用劑量一般為約1～60000毫克，成年人常用量為每天10～40000毫克，最常用劑量為20～10000毫克。每天一次或分?jǐn)?shù)次使用。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下有益效果1、EGCG-Ca絡(luò)合物固體分散體克服了EGCG不穩(wěn)定，極容易吸潮、氧化，生物利用度低，吸收差，并對胃腸道造成刺激，長期使用會降低鐵等金屬在機體內(nèi)含量等等缺點，大大提高了EGCG的藥理作用。
2、本發(fā)明的EGCG-Ca絡(luò)合物固體分散體在治療各種老年性疾病骨質(zhì)疏松中療效顯著。
3、本發(fā)明的制備方法簡單，應(yīng)用前景廣闊。
具體實施例方式
實施例1 EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體的制備EGCG，純度為99.6％，由中山大學(xué)藥學(xué)院中藥與海洋藥物實驗室提供。聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學(xué)試劑批發(fā)部提供。
將10克EGCG溶于20ml去離子水，滴加飽和CaCl2溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，5000rpm離心5min，收集沉淀物，重新用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min，收集沉淀物，再用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min(重復(fù)3次)，得EGCG-Ca 6.9克。將EGCG-Ca 6.9克和40克PVP混合溶解于300ml水中，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-Ca PVP固體分散體40.3克。
實施例2 EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體的制備EGCG，純度為99.6％，由中山大學(xué)藥學(xué)院中藥與海洋藥物實驗室提供。聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學(xué)試劑批發(fā)部提供。
將10克EGCG溶于20ml去離子水，滴加飽和CaCl2溶液，邊滴加邊攪拌，至沉淀完全，5000rpm離心5min，收集沉淀物，重新用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min，收集沉淀物，再用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min(重復(fù)3次)，得EGCG-Ca 6.9克。將EGCG-Ca 6.9克和95克PVP混合溶解于600ml水中，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-CaPVP固體分散體84.2克。
實施例3 EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體的制備EGCG，純度為99.6％，由中山大學(xué)藥學(xué)院中藥與海洋藥物實驗室提供。聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學(xué)試劑批發(fā)部提供。
將10克EGCG溶于20ml去離子水，滴加飽和乙酸鈣溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，5000rpm離心5min，收集沉淀物，重新用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min，收集沉淀物，再用200ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min(重復(fù)3次)，得EGCG-Ca 7.2克。將EGCG-Ca 7.2克和180克PVP混合溶解于2000ml水中，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-Ca PVP固體分散體154.3克。
實施例4對小鼠急性毒性試驗實驗樣品EGCG-Ca固體分散體(質(zhì)量比EGCG∶Ca＝1∶6)，由中山大學(xué)藥學(xué)院中藥與海洋藥物實驗室提供。使用時分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥(20mg/膠囊).
實驗動物NIH系小鼠18-22g，60只，雌雄各半，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供；方法與結(jié)果選取健康NIH系小鼠，體重20±2g，20只，雌雄各半，對小鼠禁食不禁水12h后，對應(yīng)每只小鼠1次灌胃分別裝EGCG-Ca固體分散體小動物腸溶膠囊(20mg/膠囊)，連續(xù)觀察7d，小鼠活動正常、敏捷，未引起死亡或異常反應(yīng)，限于給受試樣品體積不能再增大，故進行最大耐受量試驗。
另選擇健康NIH系小鼠20只，體重20±2g，雌雄各半，對小鼠禁食不禁水12h后，對應(yīng)每組小鼠1次灌胃分別裝EGCG-Ca固體分散體小動物腸溶膠囊(20mg/膠囊)，每隔2h灌胃一次，共8次，此后連續(xù)觀察7d，此期間讓小鼠自由進食和飲水，觀察期間小鼠活動正常，未引起死亡或異常反應(yīng)。
小鼠限于給受試樣品體積不能再增大不能測出LD50。故改作最大耐受量試驗，結(jié)果如下小鼠灌服EGCG-Ca固體分散體最大耐受量不少于8g·kg-1體重，在最大耐受量給受試樣品觀察期間，小鼠活動敏捷，毛皮光滑，未見死亡。
由此可知，EGCG-Ca固體分散體(質(zhì)量比EGCG∶Ca＝1∶6)的最大耐受量均不小于8g/kg體重，屬于實際無毒級，服用安全。
實施例5對骨質(zhì)疏松的藥理作用一、實驗材料動物SD系大鼠，雌雄各半，體重(196±47.3)g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供。
藥品與試劑EGCG，純度為99.6％，由中山大學(xué)藥學(xué)院中藥與海洋藥物實驗室提供。EGCG-Ca PVP固體分散體(EGCG-Ca∶PVP，質(zhì)量比為1∶7)，由中山大學(xué)藥學(xué)院中藥與海洋藥物實驗室提供。使用時，采用去離子水配置；維甲酸，重慶華邦制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(95)衛(wèi)藥準(zhǔn)字X-140號。
儀器XSP-BM生物顯微鏡，由上海光學(xué)儀器六廠制造。Panasonic彩色閉路監(jiān)控攝象機，由Matushita Electric Industrial Co.Ltd制造。創(chuàng)格圖象分析軟件，由中青旅創(chuàng)格科技集團公司設(shè)計。IRIS Advantage(HR)等離子體發(fā)射光譜儀(中山大學(xué)測試中心提供)由Thermo Jarre男Ash Corporation，U.S.A.制造。
二、實驗方法維甲酸誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松模型選取大鼠70只，體重(196±47.3)g，雌雄各半，按表6隨機分成4組正?？瞻捉M、模型組、EGCG組、EGCG-CaPVP固體分散體組。除正?？瞻捉M大鼠灌服等量PVP外，其余各組大鼠每天上午灌服維甲酸70mg.Kg-1體重，下午各組大鼠相應(yīng)灌服受試物。EGCG組、EGCG-Ca PVP固體分散體組大鼠分別對應(yīng)給予含EGCG或EGCG-Ca 90mg/Kg體重相應(yīng)制劑受試樣品。連續(xù)給藥30天后，處死大鼠，取大鼠右股骨。
股骨骨組織計量學(xué)觀察與測量取右股骨相同部位組織塊，常規(guī)脫鈣，石蠟包埋，HE染色。在普通光學(xué)顯微鏡下觀察，將所有圖象經(jīng)攝象機模數(shù)轉(zhuǎn)換后輸入主機，經(jīng)圖象分析軟件處理可得到如下參數(shù)指標(biāo)相對骨體積，指骨小梁占骨髓腔的百分比，1.25×10×4倍；平均骨小梁寬度，1.25×10×10倍；單位面積骨小梁內(nèi)骨細(xì)胞數(shù)，用圖象分析軟件采集同樣面積骨小梁的圖象(640×480)，計算相應(yīng)區(qū)域內(nèi)的骨細(xì)胞數(shù)，1.25×10×40倍；平均骨細(xì)胞陷窩長度，1.25×10×40倍；平均骨細(xì)胞陷窩寬度，1.25×10×40倍。以上5個靜態(tài)指標(biāo)參數(shù)，均觀察10個視野，求其均值。
表1對維甲酸誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松模型的股骨病變的影響(n＝10，x±s)

與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與EGCG組，###P＜0.001從表1所示維甲酸誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松實驗結(jié)果可知，與模型組相比，EGCG-CaPVP固體分散體具有治療骨質(zhì)疏松作用，有效提高相對骨體積、單位面積骨小梁內(nèi)細(xì)胞數(shù)、平均骨小梁寬度，優(yōu)于EGCG。
權(quán)利要求
1.一種EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體，其特征在于由EGCG-Ca絡(luò)合物和聚乙烯吡咯烷酮組成，其質(zhì)量比為1∶4～1∶25。
2.如權(quán)利要求1所述的EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體，其特征在于所述EGCG-Ca絡(luò)合物和聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量比為1∶6～1∶15。
3.如權(quán)利要求2所述的EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體，其特征在于所述EGCG-Ca絡(luò)合物和聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量比為1∶7～1∶12。
4.一種權(quán)利要求1或2或3所述固體分散體的制備方法，其特征在于包括如下步驟將EGCG溶于去離子水，滴加飽和鈣鹽溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，離心收集沉淀物，再用去離子水懸浮、洗滌、離心收集沉淀物，得到EGCG-鈣絡(luò)合物；將EGCG-鈣絡(luò)合物和聚乙烯吡咯烷酮按比例混合溶解于水中，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體。
5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述鈣鹽為可溶性鈣鹽。
6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于所述可溶性鈣鹽為氯化鈣。
7.權(quán)利要求1或2或3所述EGCG-鈣絡(luò)合物固體分散體在制備用于治療骨質(zhì)疏松的藥物或保健品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種EGCG－鈣絡(luò)合物固體分散體及其制備方法與應(yīng)用。EGCG－鈣絡(luò)合物固體分散體中EGCG－鈣絡(luò)合物與聚乙烯吡咯烷酮(PVP－k30)的質(zhì)量比為1∶4～1∶25，優(yōu)選比例為1∶6～1∶15，最佳比例為1∶7～1∶12。將EGCG溶于去離子水，滴加飽和鈣鹽溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，收集沉淀物，再用去離子水懸浮、洗滌、離心收集沉淀物，得到EGCG－鈣絡(luò)合物；將EGCG－Ca絡(luò)合物和聚乙烯吡咯烷酮按比例混合溶解于水中，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG－鈣絡(luò)合物固體分散體。EGCG－鈣絡(luò)合物固體分散體解決了EGCG存在的多種缺點，能治療老年性疾病骨質(zhì)疏松，療效顯著；制備方法簡單，應(yīng)用前景廣闊。
文檔編號A61K47/32GK1739498SQ200510036980
公開日2006年3月1日 申請日期2005年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月5日
發(fā)明者許東暉, 梅雪婷, 許實波 申請人:中山大學(xué)