專利名稱：一種抗缺血再灌注損傷組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥、試劑等技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是涉及一種藥物組合物及其制備方法和用途，更具體地說是涉及一種用于治療缺血再灌注損傷、特別是肝臟缺血再灌注損傷的藥物組合物及其制備方法和用途，再具體地說是涉及一種含有M膽堿受體阻斷劑和膽堿脂酶抑制劑的藥物組合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
(一 )缺血再灌注損傷的研究概況I、概述缺血的組織、器官重新獲得血液供應(yīng)后，不僅不能使組織、器官功能恢復(fù)，反而加重了功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)的破壞，這種現(xiàn)象被稱之為缺血再灌注損傷 (ischemia-reperfusion injury)。臨床常見于肝臟嚴(yán)重創(chuàng)傷手術(shù)、肝臟腫瘤切除、肝移植等。人類不同原因致肝臟損傷，甚至肝臟纖維化過程中凋亡是一個(gè)重要的特征。研究表明在缺血再灌注引起的肝損傷過程中存在肝細(xì)胞凋亡。但是，缺血再灌注損傷的病理生理過程復(fù)雜，涉及細(xì)胞凋亡和壞死等途徑，迄今尚無明確認(rèn)識(shí)，故對(duì)其發(fā)生機(jī)制的研究已成為熱點(diǎn)。2、HIRI的發(fā)生機(jī)制缺血所引起的組織損傷是致死性疾病的主要原因，諸如冠狀動(dòng)脈硬化導(dǎo)致的心肌梗死、腦卒中等。在缺血性疾病搶救和治療過程中，醫(yī)學(xué)家們漸漸發(fā)現(xiàn)，僅僅缺血還不足以導(dǎo)致組織損傷，而是在缺血一段時(shí)間后又突然恢復(fù)供血(即再灌注)時(shí)，致巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和血小板活化，繼而引發(fā)一系列細(xì)胞反應(yīng)，同時(shí)由于血管內(nèi)皮細(xì)胞的損害導(dǎo)致微循環(huán)障礙，進(jìn)一步加重組織損傷，這種損傷被稱為“組織缺血再灌注損傷”。肝臟缺血再灌注損傷(hepaticischemia-reperfusion injury,簡(jiǎn)稱HIRI)是許多因子參與的復(fù)雜的病理生理過程，好發(fā)于休克及多種肝臟外科手術(shù)中，是影響肝移植、肝臟葉段切除術(shù)后肝功能的一個(gè)多因素過程(Banga NR, Homer-Vanniasinkam S, Graham A, et al. Ischemic preconditioning in transplantation and major resection of the liver[J]· Br J Surg,2005,92(5) :528-538.)。肝臟缺血再灌注可致枯否式細(xì)胞(即Kupffer細(xì)胞)(Zeng Z, Huang HF, et al. Heme oxygenase-lprotects donor livers from ischemia/reperfusion injury The role of Kupffer cells[J]. World J Gastroenterol,2010Mar 14,16(10) :1285-92.)、中性粒細(xì)胞和血小板活化，繼而引發(fā)一系列細(xì)胞反應(yīng)，同時(shí)由于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的損害導(dǎo)致微循環(huán)障礙，進(jìn)一步加重肝臟缺血、缺氧這些Kupffer細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的激活， 可直接釋放大量促炎的細(xì)胞因子，如TNF-a、IL-I β、IL_6 ;也可釋放脂質(zhì)炎性介質(zhì)，如白三烯(簡(jiǎn)稱LTs)、血栓素A2(簡(jiǎn)稱TXA2)、血小板激活因子(簡(jiǎn)稱PAF)等。炎性介質(zhì)能激活炎癥細(xì)胞，使之合成和釋放多種炎癥因子；炎癥因子則在肝內(nèi)既可通過單個(gè)形式也可通過彼此間協(xié)同作用弓I起肝細(xì)胞損傷。例如，TNF-Q直接導(dǎo)致肝竇內(nèi)皮細(xì)胞腫脹；通過中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用導(dǎo)致肝臟微循環(huán)障礙(Zhou ff, Zhang Y, Hosch MS. Subcellular site of superoxide dismutase expression differentialIy controls AP-Iactivity and injury in mouse liver following ischemia/reperfusion[J]. Hepatology,2001,33 (4) :902-914; Tsuchiya Y, Suzuki S, Inaba K, et al. Impact of endothelin—lon microcirculatory disturbance after partial hepatectomy under ischemia/reperfusion in thioacetamide-induced cirrhotic rats [J]. J Surg Res, 2003，111 (I) :100-8.);可激活中性粒細(xì)胞釋放氧自由基；同時(shí)刺激單核巨噬細(xì)胞和其它細(xì)胞分泌IL-I β、IL-6等炎性因子。IL-I β可誘導(dǎo)IL-8的合成并增加細(xì)胞黏附分子選擇素、整合素的表達(dá)，這些均增強(qiáng)中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，進(jìn)一步導(dǎo)致合成更多的細(xì)胞因子。缺血組織再灌注時(shí)造成的微血管和實(shí)質(zhì)器官的損傷主要是由活性氧自由基引起的，這已在多種器官中得到的證明。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，氧自由基在肝臟缺血再灌注時(shí)發(fā)揮重要作用，其發(fā)生機(jī)制有(I)細(xì)胞缺血缺氧使ATP生成減少，Ca2+進(jìn)入線粒體增多，使線粒體功能受損，從而使氧自由基生成增加；(2)鈣超載又可激活鈣離子依賴性蛋白酶，后者可催化黃嘌呤脫氫酶轉(zhuǎn)化為黃嘌呤氧化酶.，而黃嘌呤氧化酶在有氧條件下能促進(jìn)黃嘌呤在分解為尿酸的同時(shí)產(chǎn)生大量的氧自由基。在再灌注時(shí)大量氧進(jìn)入的情況下，黃嘌呤氧化酶作用于次黃嘌呤，產(chǎn)生大量超氧陰離子自由基(Liu PG, He SQ, Wu Jian, et al. Protective effects of apocynin and allopurinol on ischemia/reperfusion induced liver injury in mice[J]. World J Gastroenterol,2008,14(18) :2832-2837. ；Liu JN, Zhang JX, Zhang XL, et al.The effect of oxidative stress in myocardial cell injury in mice exposed to chronic intermittent hypoxia [J]. Chin Med J (Engl), 2010,123 (I) :74-8.)。使用 SOD 清除自由基對(duì)缺血再灌流組織損傷有保護(hù)作用；(3)再灌注時(shí)，由于缺氧、ATP減少及鈣進(jìn)入線粒體增多，使細(xì)胞色素氧化酶功能失調(diào)、細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電勢(shì)喪失、呼吸鏈功能障礙、電子傳遞鏈漏電子增多、超氧化物歧化酶生成減少等，同時(shí)可導(dǎo)致大量氧自由基生成(Wang NT, Lin HI, et al. Effects ofthe antioxidants lycium barbarum and ascorbic acid on reperfusion liver injury in rats[J]. Transplant Proc,2009,41 (10) :4110-3.)；(4)缺血期組織細(xì)胞含氧量減少，作為電子受體的氧含量不足，再灌注后恢復(fù)組織氧供應(yīng)，使氧自由基在短時(shí)間內(nèi)爆發(fā)性增多。氧自由基損傷肝細(xì)胞的機(jī)制主要有(I)氧化細(xì)胞膜，改變膜的流動(dòng)性和通透性，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物，直接損傷細(xì)胞；(2)通過直接作用于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞膜增加血小板及中性粒細(xì)胞的粘附位點(diǎn)，增加血小板及中性粒細(xì)胞的的黏附、聚集，造成微循環(huán)障礙(GlanemannM,VollmarB,NusslerAK, et al.Ischemic preconditioning protects from hepatic ischemia/reperfusion injury by preservation of microcirculation and mitochondria redox-state[J]. J Hepatol,2003,38(I) :59-66.)；
(3)激活肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞核內(nèi)的氧化核酸酶，使DNA雙鏈斷裂而造成肝臟結(jié)構(gòu)和功能的損傷；(4)氧自由基抑制線粒體的氧化磷酸化，使能量物質(zhì)減少。缺血再灌注能導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的事實(shí)已經(jīng)有所報(bào)道。細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞受到某些特殊信號(hào)刺激后，由其內(nèi)部機(jī)制調(diào)控的主動(dòng)的細(xì)胞死亡，屬于機(jī)體自身的生理活動(dòng)，也稱為程序性細(xì)胞死亡(簡(jiǎn)稱p⑶)。P⑶是導(dǎo)致缺血再灌注損傷的重要機(jī)制之一，是肝功能衰竭的重要原因(Malhi H, Gores GJ, Lemasters JJ, et al. Apoptosis and necrosis in the liver a tale oftwo deaths [J]Hepatology，2006，43(2Suppl I) :831-44. ) 缺血再灌注后的細(xì)胞凋亡是一個(gè)復(fù)雜過程，能量代謝障礙、氧自由基、細(xì)胞因子、 細(xì)胞內(nèi)鈣超載以及Caspase家族、Bcl_2家族均可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其中氧自由基的爆發(fā)性形成是關(guān)鍵因素，在缺血再灌注時(shí)氧化磷酸化障礙，線粒體內(nèi)自由基及其代謝的中心產(chǎn)物增多，而此時(shí)自由基防御體系活性下降，自由基介導(dǎo)的DNA損傷可激發(fā)多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶的活化和P53積累，這二者均與凋亡有關(guān)。3、HIRI的藥物干預(yù)但到目前為止，尚無肯定的治療方法可以改變整個(gè)病程?，F(xiàn)有技術(shù)中，治療缺血再灌注損傷的方法眾多，主要包括缺血適應(yīng)預(yù)處理及術(shù)前藥物干預(yù)。(I)缺血適應(yīng)預(yù)處理缺血適應(yīng)預(yù)處理是指短暫的缺血再灌注過程致使器官對(duì)隨后的更加持久的缺血再灌注損傷更具耐受力，其可降低持續(xù)缺血過程中ATP降解，糖分解中間產(chǎn)物和乳酸產(chǎn)物的聚積(Clavien PA, Yadav S, Sindram D, et al. Protective effects of ischemic preconditioning for liver resection performed under inflow occlusion in humans[J]Ann Surg，2000，232(12) :163-165.)。藥物預(yù)處理是利用某些活性物質(zhì)直接或間接的藥理作用來達(dá)到類似缺血預(yù)處理的保護(hù)作用，增強(qiáng)組織或細(xì)胞對(duì)缺血再灌注損傷的耐受性，從而減輕損傷。對(duì)HIRI具有預(yù)處理效果的藥物主要原則有①保護(hù)生物膜，改善微循環(huán)及細(xì)胞能量代謝。缺血組織酵解過程增強(qiáng)，因此補(bǔ)充糖酵解底物能有效保護(hù)缺血組織，有利于生物膜功能的恢復(fù)。缺血時(shí)線粒體氧化磷酸化代謝受阻，鑒于此，可給予外源性ATP、磷酸肌酸、細(xì)胞色素C等；②自由基清除劑給予低分子自由基清除劑，例如維生素A、維生素C、維生素E和谷胱甘肽還原酶(簡(jiǎn)稱=GTH-PX)(張厚忠，韓喜春，姜偉棟.谷胱甘肽和缺血預(yù)處理對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2006，26 (10) 91-93.);酶型自由基清除劑，例如過氧化氫酶(簡(jiǎn)稱CAT)、超過氧化物歧化酶(簡(jiǎn)稱S0D)、過氧化物酶；③減輕炎癥反應(yīng)給予具有穩(wěn)定溶酶體酶膜作用的糖皮質(zhì)激素、阻斷中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞間粘附反應(yīng)的特定粘附分子的單抗等，均可明顯減輕缺血再灌注損傷(馬興久，耿振宏，李德春，等.烏司他汀對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的防護(hù)作用[J].醫(yī)師進(jìn)修雜志， 2005，28(7) :22-28.)；④減輕鈣超載的鈣通道阻斷劑。(2)術(shù)前藥物干預(yù)
目前，術(shù)前進(jìn)行干預(yù)的藥物主要以植物提取物為主。中草藥以安全范圍大、毒副作用小、作用環(huán)節(jié)較多等優(yōu)點(diǎn)，成為研究的熱點(diǎn)。一些活血化瘀中藥能清除氧自由基，對(duì)臟器缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用，如川芎、丹參、參附、銀杏葉提取物、大黃素等等(黃博，陳高飛，陳國(guó)勇，等.茶多酚對(duì)大鼠肝臟缺血灌注損傷的保護(hù)作用[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2006，15 (5) =522-524.;林勝璋，余耀軍，游濤，等.大黃素對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷的預(yù)防作用[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2006，12 :136-138.;趙珂.銀杏葉提取物對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J]·中原醫(yī)刊，2007，34 (3) :5-6.)。川芎可以抑制PMN聚集粘附、減輕鈣超載、抗TXA2、合成、阻止血小板聚集、清除自由基、保護(hù)線粒體；丹參具有減低OFR脂質(zhì)過氧化物含量，提高SOD活性，減少鈣超載，促進(jìn)再生修復(fù)功能。此外，有研究表明三七總阜苷、阿魏酸鈉(當(dāng)歸的有效成分)、綠茶Pingpien Gingseng Rhizome物(簡(jiǎn)稱GTE)、黃苗總黃酮等對(duì)肝臟缺血再灌注損傷都具有保護(hù)作用 (Ke QH,Zheng SS,Liang TB, et al. Pre-treatment of hypertonic saline can increase endogenous interleukin IOrelease to attenuate hepatic ischemia reperfusion injury [J]. Dig Dis Sc，2006，51 :2257-2263.) 其中許多藥物具有較大的毒副作用，臨床上一直使用植物的粗提物，對(duì)其藥品性成分不清、作用機(jī)制不明、質(zhì)量不穩(wěn)、毒副作用大等不之處，影響了它們?cè)谂R床上的應(yīng)用，難以滿足臨床需要。近年來，高張鹽水(簡(jiǎn)稱HS)也開始受到人們的重視。小劑量HS不僅能快速改善休克的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，提高心肌收縮力和心排出量，改善微循環(huán)，而且還能抑制應(yīng)激狀態(tài)下的過度炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)(Ke QH, Zheng SS, Liang TB, et al. Pre-treatment ofhypertonic saline can increase endogenous interleukin IOrelease to attenuate hepatic ischemia reperfusion injury[J]. Dig Dis Sc,2006,51 :2257-2263. ；Gonzalez EA, Kozar RA, Suliburk Jff, et al. Conventional dose hypertonic saline provides optimal gut protection and limits remote organ injury after gut ischemia reperfusion [J]. J Trauma, 2006,61 (I) :66-73.), HS 可抑制中性粒細(xì)胞過度激活，抑制 TNF-α、IL-6及黏附分子的分泌，同時(shí)增加抗炎細(xì)胞因子IL-10的釋放與表達(dá)。高張鹽水預(yù)處理能明顯增強(qiáng)缺血再灌注后肝臟血紅素加氧酶-I的mRNA及蛋白表達(dá)，明顯改善肝臟微循環(huán)，對(duì)肝臟缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用。4、展望肝臟缺血再灌注損傷的防治已經(jīng)在控制再灌注條件、應(yīng)用細(xì)胞保護(hù)劑和調(diào)動(dòng)機(jī)體內(nèi)源性防御能力等方面取得了豐碩成果。隨著對(duì)膽堿能抗炎通路的研究不斷趨于完善，也一定會(huì)產(chǎn)生更多相關(guān)的應(yīng)用思路和切實(shí)可行的方法服務(wù)于臨床治療，為研究防治缺血再灌注損傷提供了一條的新的策略。 科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，使人們對(duì)缺血再灌注損傷的機(jī)制研究不斷深入，防治疾病的方法也將越來越的有效。但是，肝臟缺血再灌注損傷的機(jī)制復(fù)雜，是多種因素相互、共同作用的結(jié)果，而單一機(jī)制的研究往往不能達(dá)到滿意的效果，因此多種機(jī)制的、多藥物聯(lián)合運(yùn)用的綜合性研究有待進(jìn)一步開展。(二)M膽堿受體阻斷劑的研究概況I、概述各種刺激引起內(nèi)源性乙酰膽堿的釋放在誘發(fā)哮喘中有重要作用。M膽堿受體阻斷劑能阻斷乙酰膽堿作用，因此可用于治療哮喘。例如異丙基阿托品(ipratiOpium)主要用于喘息型慢性支氣管炎吸入給藥很少吸收，因此有明顯擴(kuò)張支氣管作用，增加第一秒鐘最大呼氣量，而不影響痰液分泌，也無明顯全身性不良反應(yīng)。2、膽堿受體及其分類膽堿受體包括兩種(I)膽堿受體膽堿受體包括兩種①毒蕈堿型受體(簡(jiǎn)稱M受體)，產(chǎn)生副交感神經(jīng)興奮效應(yīng)，既心臟活動(dòng)抑制、支氣管胃腸平滑肌和膀胱逼尿肌收縮、消化腺分泌增加、瞳孔縮小等。阿托品為毒蕈堿受體阻斷劑。②煙堿型受體(簡(jiǎn)稱N受體)，N1位于神經(jīng)節(jié)突觸后膜，可引起自主神經(jīng)節(jié)的節(jié)后神經(jīng)元興奮；N2受體位于骨骼肌終板膜，可引起運(yùn)動(dòng)終板電位，導(dǎo)致骨骼肌興奮。六烴季胺主要阻斷N1受體功能，筒箭毒堿阻斷N2受體功能。(2)M膽堿受體的亞型和分布①M(fèi)膽堿受體的藥理學(xué)分型M膽堿受體的識(shí)別位點(diǎn)在各亞型間是相當(dāng)保守的，雖然目前已得到多種對(duì)M膽堿受體有選擇性的阻斷劑，但仍未發(fā)現(xiàn)僅對(duì)一種受體亞型具有高選擇性的阻斷劑。常用的M膽堿受體亞型的選擇性阻斷劑如下M1膽堿受體親和力最高的是MT17，它是近年發(fā)現(xiàn)的含于非洲綠毒蛇蛇毒中的一種毒素。其它尚有4-DAMP, tripitramine,哌侖西平等。M2膽堿受體親和力最高的是tripitramine。其他尚有AFDX384, himbacine和 4-DAMP。M3膽堿受體親和力最高的是4-DAMP。其他尚有darifenacin。外分泌腺、平滑肌、 血管內(nèi)皮、腦和自主神經(jīng)節(jié)。M4膽堿受體親和力最高的是MT3。其他尚有4-DAMP，himbacine和AFDX384。M5膽堿受體親和力最高的是4-DAMP。其他尚有darifenacin。②M膽堿受體的分子生物學(xué)分型隨著分子生物學(xué)克隆技術(shù)的發(fā)展，通過對(duì)克隆到的M受體cDNAs轉(zhuǎn)錄成不同的氨基酸序列的分析，發(fā)現(xiàn)至少存在五種不同基因編碼的M受體亞型，分別命名為m4、 m5受體，較為公認(rèn)的是M1、M2、和M3三種亞型。③M膽堿受體亞型的分布M1膽堿受體主要分布在胃壁細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)；M2膽堿受體主要分布于心臟、腦、自主神經(jīng)節(jié)和平滑??；M3膽堿受體主要分布于外分泌腺、平滑肌、血管內(nèi)皮、腦和自主神經(jīng)節(jié)； (3) N膽堿受體及其分布
N受體根據(jù)分布的不同，分為NpN2兩種。兩者都是配體門控型陽(yáng)離子通道，當(dāng)Ach 與N受體結(jié)合后，N受體空間構(gòu)象發(fā)生改變，通道開放，發(fā)生局部去極化。當(dāng)去極化水平達(dá)到鈉通道開放閾值時(shí)，鈉通道開放，引發(fā)動(dòng)作電位。具有N2受體的骨骼肌細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞外鈣內(nèi)流和細(xì)胞內(nèi)鈣釋放，肌肉收縮；具有N1受體的神經(jīng)節(jié)次一級(jí)神經(jīng)元表現(xiàn)為興奮的繼續(xù)傳遞。N1受體分布于神經(jīng)節(jié)；N2受體分布于神經(jīng)肌肉接頭(骨骼肌細(xì)胞膜)。3、M膽堿受體阻斷劑的分類M膽堿受體阻斷劑包括三類①天然形成的生物堿，如阿托品和東莨菪堿；阿托品、東莨菪堿和山莨菪堿均可由植物中提取，天然存在的生物堿為不穩(wěn)定的左旋莨菪堿，在提取過程中可得到穩(wěn)定的消旋莨菪堿，即為阿托品。東莨菪堿為左旋體，起作用較右旋體強(qiáng)許多倍。阿托品及其類似物基本結(jié)構(gòu)為托品酸的叔胺生物堿脂。②天然生物堿的半合成衍生物，其體內(nèi)過程和作用時(shí)間與母體藥物不同；③合成生物堿，其中某些藥物對(duì)M膽堿受體亞型具有選擇性拮抗作用，如后馬托品、托吡卡胺等。4、M膽堿受體阻斷劑的作用及其機(jī)理本類藥物作用廣泛，具有松弛內(nèi)臟平滑肌、解除平滑肌痙攣的作用；能抑制唾液腺、汗腺、胃腸腺等的分泌，用藥后可引起口干和渴感；解除迷走神經(jīng)對(duì)心臟的抑制，使心跳加快；松弛虹膜括約肌，散大瞳孔，眼壓升高；興奮呼吸中樞。本類藥物能與膽堿受體結(jié)合但不產(chǎn)生或極少產(chǎn)生擬膽堿作用，卻能妨礙乙酰膽堿 (簡(jiǎn)稱ACh)或膽堿受體激動(dòng)藥與平滑肌、心肌、腺體細(xì)胞、外周神經(jīng)節(jié)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的M 膽堿受體結(jié)合，從而拮抗其擬膽堿作用。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，如骨髓、皮層和皮層下中樞水平， 其膽堿能傳遞均涉及M膽堿受體的功能。有研究資料表明，M膽堿受體阻斷劑抗內(nèi)毒素休克作用涉及迷走神經(jīng)膽堿能抗炎通路，而尼古丁 α 7乙酰膽堿受體(a 7-nicotinic acetylcholine receptor,簡(jiǎn)稱 a 7nAChR)參與這一過程(Liu C, et al. Antishock effect of anisodamine involves a novel pathway for activating alpha7nicotinic acetylcholine receptor. Crit Care Med. 2009 ；37 :634-641)。近期的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道指出，煙堿受體激動(dòng)劑可減輕肝臟缺血再灌注損傷 (Crockett ET, et al. Protection of early phase hepatic ischemia-reperfusion injury by cholinergic agonists. BMC Clin Pathol. 2006Feb 15 ;6 :3);迷走神經(jīng)切斷后，a 7nAChR的特異性激動(dòng)劑能改善Fas蛋白所致急性重型肝炎的肝細(xì)胞凋亡(Hiramoto T，et al. The hepatic vagus nerve attenuates fas—induced apoptosis in the mouse liver via alpha7nicotinic acetylcholine receptor. Gastroenterology.2008 ； 134 2122-2131)。但是，M膽堿受體阻斷劑與缺血再灌注損傷的關(guān)系未見報(bào)道。5、M膽堿受體阻斷劑的用途與應(yīng)用M膽堿受體阻斷劑如阿托品常用于麻醉前給藥，可減少麻醉過程中支氣管粘液分泌，以防呼吸道阻塞及吸入性肺炎；可消除嗎啡對(duì)呼吸的抑制，解除迷走神經(jīng)興奮性，可防止硫噴妥鈉的喉痙攣。對(duì)中毒性痢疾、中毒性肺炎等所致的感染性休克，可用大劑量M膽堿受體激動(dòng)劑如阿托品進(jìn)行治療，以解除小動(dòng)脈痙攣而改善微循環(huán)，使血壓回升而改善癥狀， 其治療內(nèi)毒素休克的常規(guī)劑量為常用劑量阿托品I 2mg，每隔15 20分鐘靜脈注射； 山莨菪堿10 20mg,每隔15 20分鐘靜脈注射；東莨菪堿O. 01 O. 03mg/kg,每30分鐘靜推一次；其副作用主要表現(xiàn)為口干、面紅、輕度擴(kuò)瞳、視近物模糊等，個(gè)別患者有心率加快及排尿困難。M膽堿受體阻斷劑臨床主要用于①解胃腸道平滑肌的痙攣性疼痛；②緩用于麻醉前給藥，減少麻醉過程中支氣管粘液分泌，以防呼吸道阻塞及吸入性肺炎；可消除嗎啡對(duì)呼吸的抑制，解除迷走神經(jīng)興奮性，可防止硫噴妥鈉的喉痙攣；③用于感染性中毒休克。對(duì)中毒性痢疾、中毒性肺炎等所致的感染性休克，可用大劑量阿托品治療，以解除小動(dòng)脈痙攣而改善微循環(huán)，使血壓回升而改善癥狀；④治療心律失常；⑤局部給藥用于虹膜睫狀體炎，使瞳孔散大，使睫狀肌得到松弛休息(調(diào)節(jié)麻痹)，達(dá)到消炎、止痛的目的；并可利用散大瞳孔的作用來檢查眼底疾病；⑥解救有機(jī)磷酸酯類農(nóng)藥中毒。近年來，通過臨床觀察，還發(fā)現(xiàn)本類藥物的新用途①治療暴發(fā)性流行性腦脊髓膜炎；②治療小兒喘息性支氣管炎；③治療凍傷；④治療坐骨神經(jīng)痛。此外，山莨菪堿對(duì)小兒冬秋季腸炎、急性出血性壞死性腸炎、局灶性神經(jīng)征、小兒 “結(jié)腦”、重型嬰幼兒肺炎、急性彌漫性腎小球腎炎、小兒急性闌尾炎、小兒癲癇持續(xù)狀態(tài)、高血壓、冠心病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膽道蛔蟲癥、膽囊炎、小兒急性偏癱癥等都有一定療效。(三)膽堿酯酶抑制劑的研究概況I、概述膽堿酯酶抑制劑與ACh—樣，能與乙酰膽堿酯酶(簡(jiǎn)稱AChE)結(jié)合，但結(jié)合較牢固，水解較慢，是AChE活性受抑制，從而導(dǎo)致膽堿能神經(jīng)末梢釋放的ACh堆積，產(chǎn)生擬膽堿作用。2、膽堿酯酶抑制劑的作用本類藥物具有收縮胃腸道平滑肌、增加平滑肌張力作用；刺激瞳孔括約肌和睫狀肌收縮，調(diào)節(jié)睫狀肌痙攣；抑制骨骼肌神經(jīng)肌肉接頭AChE，松弛肌肉；能抑制唾液腺、汗腺、 胃腸腺等的分泌；作用于延髓的血管運(yùn)動(dòng)中樞，使心率減慢、心輸出量下降。3、膽堿酯酶抑制劑的用途與應(yīng)用膽堿脂酶抑制劑如新斯的明常用來幫助術(shù)后胃腸功能恢復(fù)；與麻醉劑合用，可用于麻醉后鎮(zhèn)痛，不需持續(xù)給藥即可獲得良好和持久的術(shù)后鎮(zhèn)痛效果，但會(huì)引起乙酰膽堿蓄積導(dǎo)致心血管系統(tǒng)和消化系統(tǒng)的副作用(Hofer S. ,Eisenbach C. ,Lukic I. K. , Schneider L，Bode K.，Brueckmann Μ.，Mautner S.，Wente Μ. N.，Encke J.，Werner J.，DalpkeA. H.，Stremmel W.，Nawroth P. P.，Martin E.，Krammer P. H.，Bierhaus A.，Weigand M. A. ,Pharmacologic cholinesterase inhibition improves survival in experimental sepsis. Crit. Care. Med. 2008，36 (2) :404-408)。臨床上主要用于①直接或間接興奮骨骼肌，治療重癥肌無力；②能興奮腸道平滑肌及膀胱逼尿肌，促進(jìn)排氣和排尿，常用于術(shù)后尿潴留；③治療青光眼，滴眼后可使瞳孔縮小，眼內(nèi)壓下降；④競(jìng)爭(zhēng)性神經(jīng)肌肉阻滯藥過量時(shí)解毒。近年來國(guó)內(nèi)使用該藥的新方法與新用途①越來越多的膽堿酯酶抑制劑被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于阿爾茲海默病(Alzheimer’ s disease，簡(jiǎn)稱AD)的治療。AD患者的中樞部位，尤其是皮層下區(qū)域，如下橄欖核膽堿能神經(jīng)元完整性缺陷，因此可用膽堿酯酶抑制劑增加中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)的方法改善認(rèn)知功能，延緩AD病情的進(jìn)展；②穴位注射，幫助胃腸功能恢復(fù)；③與麻醉劑合用，用于麻醉后鎮(zhèn)痛，不需持續(xù)給藥即可獲得良好和持久的術(shù)后鎮(zhèn)痛效果。因此，尋找新型、成分明確、療效確切、不良反應(yīng)小的抗缺血再灌注損傷仍然勢(shì)在必行。但是，M膽堿受體阻斷劑和膽堿脂酶抑制劑聯(lián)合使用的藥物組合物治療缺血再灌注損傷尚未見報(bào)道。經(jīng)文獻(xiàn)檢索等，到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)有新的抗缺血再灌注損傷產(chǎn)品及其制備方法和用途等方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)現(xiàn)所需要解決的技術(shù)問題是公開了一種含有M膽堿受體阻斷劑和膽堿脂酶抑制劑的藥物組合物及其制備方法和用途，即該藥物組合物具有抗缺血再灌注損傷的新作用，能夠用于制備抗缺血再灌注損傷產(chǎn)品，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。也就是說，本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，通過實(shí)驗(yàn)研究和理論探索，目的之一意在提供一種新的藥物組合物，即提供一種含有M膽堿受體阻斷劑和膽堿脂酶抑制劑的藥物組合物配方；本發(fā)明的目的之二是提供一種抗缺血再灌注損傷組合物的制備方法；本發(fā)明的目的之三是提供一種抗缺血再灌注損傷組合物的用途，即提供含有上述藥物組合物作為抗缺血再灌注損傷產(chǎn)品方面的應(yīng)用。本發(fā)明所述的抗缺血再灌注損傷產(chǎn)品是指醫(yī)藥等技術(shù)領(lǐng)域中，一種直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究缺血再灌注損傷及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品；優(yōu)選直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究肝臟缺血再灌注損傷及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，即抗肝臟缺血再灌注損傷產(chǎn)品。所述的抗缺血再灌注損傷產(chǎn)品是包括藥物、試劑等中的一種或多種，優(yōu)選藥物。(一)技術(shù)構(gòu)思自主開發(fā)研發(fā)創(chuàng)新藥物是中國(guó)目前的一項(xiàng)緊迫任務(wù)，發(fā)現(xiàn)新藥物、已有藥物的新組合或新用途等均是有效的快捷途徑，也是中國(guó)快捷創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢(shì)所在。缺血再灌注損傷的防治是近年來的一個(gè)研究熱點(diǎn)。在創(chuàng)傷性休克、外科手術(shù)、器官移植、燒傷、凍傷和血栓等血液循環(huán)障礙時(shí)，都會(huì)出現(xiàn)缺血后再灌注損傷。組織器官對(duì)氧的要求程度越高，越容易發(fā)生缺血再灌注損傷，如心、腦、肝臟、腎臟等。但是，缺血再灌注損傷的機(jī)制復(fù)雜，是多種因素相互、共同作用的結(jié)果，而單一機(jī)制的研究往往不能達(dá)到滿意的效果，因此多種機(jī)制的、多藥物聯(lián)合運(yùn)用的綜合性研究有待進(jìn)一步開展。目前，缺血再灌注損傷成為溶栓療法、搭橋術(shù)、斷肢再植、器官移植等醫(yī)療措施成敗的關(guān)鍵因素之一。因此，研制防治缺血再灌注損傷等方面的產(chǎn)品，特別是藥物，意義重大， 并具有顯著的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。隨著對(duì)膽堿能抗炎通路的研究不斷趨于完善，也一定會(huì)產(chǎn)生更多相關(guān)的應(yīng)用思路和切實(shí)可行的方法服務(wù)于臨床治療，同時(shí)也為研究防治缺血再灌注損傷提供了一條的新的策略。發(fā)明人通過對(duì)含有M膽堿受體阻斷劑和膽堿脂酶抑制劑的藥物組合物進(jìn)行系統(tǒng)的篩選，并推斷該藥物組合物在防治缺血再灌注損傷等方面的藥效，應(yīng)主要是通過膽堿能抗炎通路來發(fā)揮的，研究結(jié)果也證明和證實(shí)了該藥物組合物具有顯著的抗缺血再灌注損傷的藥理作用。根據(jù)此想法和思路，發(fā)明人通過反復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究與分析和理論探索，已成功得到預(yù)期的研究結(jié)果和應(yīng)用產(chǎn)品。( 二)抗缺血再灌注損傷組合物及其制備方法所述的抗缺血再灌注損傷組合物是包括M膽堿受體阻斷劑和膽堿脂酶抑制劑的藥物組合物；所述的M膽堿受體阻斷劑與膽堿脂酶抑制劑的重量比為I : O. 005 50 ;進(jìn)一步優(yōu)選I : O. I 8 ;最優(yōu)選為I : 2。所述的M膽堿受體阻斷劑是本領(lǐng)域常規(guī)使用的M膽堿受體阻斷劑，是包括阿托品、 山莨菪堿、含山莨菪堿的植物提取物、東莨菪堿、含東莨菪堿的植物提取物、后馬托品或托批卡胺等中的一種或多種，優(yōu)選阿托品、山莨菪堿、含山莨菪堿的植物提取物、東莨菪堿或含東莨菪堿的植物提取物等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選阿托品、山莨菪堿或東莨菪堿等中的一種或多種，最優(yōu)選阿托品；所述的阿托品的結(jié)構(gòu)式如式I所示，它是由托品酸和有機(jī)堿形成的酯類，結(jié)構(gòu)與山莨菪堿和東莨菪堿相類似；
權(quán)利要求
1.一種抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的該抗缺血再灌注損傷組合物包括以下組分M膽堿受體阻斷劑和膽堿脂酶抑制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的M膽堿受體阻斷劑與膽堿脂酶抑制劑的重量比為I : O. 005 50。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的M膽堿受體阻斷劑與膽堿脂酶抑制劑的重量比為I : O. I 8。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的M膽堿受體阻斷劑與膽堿脂酶抑制劑的重量比為I : 2。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的M膽堿受體阻斷劑是本領(lǐng)域常規(guī)使用的M膽堿受體阻斷劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的M膽堿受體阻斷劑是包括阿托品、山莨菪堿、含山莨菪堿的植物提取物、東莨菪堿、含東莨菪堿的植物提取物、后馬托品或托吡卡胺中的一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的M膽堿受體阻斷劑是包括阿托品、山莨菪堿或東莨菪堿中的一種或多種。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的M膽堿受體阻斷劑是阿托品。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的膽堿脂酶抑制劑是本領(lǐng)域常規(guī)使用的膽堿脂酶抑制劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的膽堿脂酶抑制劑是包括新斯的明或毒扁豆堿中的一種或多種。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的膽堿脂酶抑制劑是新斯的明。
12.根據(jù)權(quán)利要求I 11任一項(xiàng)所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的該組合物的制備方法如下將所述的M膽堿受體阻斷劑、膽堿脂酶抑制劑按比例進(jìn)行混合，即得所述的抗缺血再灌注損傷組合物。
13.根據(jù)權(quán)利要求I 11任一項(xiàng)所述的抗缺血再灌注損傷組合物，其特征在于，所述的該組合物的使用方法如下不進(jìn)行事先的混合，而是直接將M膽堿受體阻斷劑與膽堿脂酶抑制劑單品種分別使用，并先后連續(xù)使用。
14.根據(jù)權(quán)利要求I 11任一項(xiàng)所述的抗缺血再灌注損傷組合物用于制備抗缺血再灌注損傷產(chǎn)品。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的抗缺血再灌注損傷組合物用于制備抗肝臟缺血再灌注損傷產(chǎn)品。
16.根據(jù)權(quán)利要求I 11任一項(xiàng)所述的抗缺血再灌注損傷組合物的組合物用于制備抗缺血再灌注損傷產(chǎn)品。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的抗缺血再灌注損傷組合物的組合物用于制備抗肝臟缺血再灌注損傷產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療缺血再灌注損傷、特別是肝臟缺血再灌注損傷的藥物組合物及其制備方法和用途。該組合物含有M膽堿受體阻斷劑和膽堿脂酶抑制劑，制備工藝簡(jiǎn)便，使用安全，療效顯著，可明顯改善缺血再灌注損傷引起的細(xì)胞凋亡，克服了現(xiàn)有的常用藥物造成的副作用。本發(fā)明拓展了現(xiàn)有的毒蕈堿受體阻斷劑新的醫(yī)藥用途，也為防治缺血再灌注損傷提供了一種新的藥物干預(yù)手段。適于醫(yī)藥、試劑等工業(yè)和行業(yè)的大規(guī)模生產(chǎn)和商業(yè)應(yīng)用，具有良好應(yīng)用前景，具有顯著的社會(huì)效益、經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)A61K31/27GK102580099SQ20111032125
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2011年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月20日
發(fā)明者倪敏, 楊中偉, 沈甫明, 蘇定馮, 趙婷 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)