專利名稱：銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途。
背景技術(shù)：
皮膚癌是人類常見的惡性腫瘤之一，在過去的二十年，人類皮膚腫瘤的發(fā)病率顯著增加，并以每年4%的速率繼續(xù)增長。皮膚鱗癌可發(fā)生于正常皮膚，亦可由日光性角化等癌前病變發(fā)展而來，其侵襲性和轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)，臨床危害大。因此人們一直在探討皮膚腫瘤的有效治療方案。皮膚腫瘤可采用手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療、中醫(yī)治療等綜合治療方法。但某些患者不能接受手術(shù)治療，且手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療對患者損害大，放化療毒副作用明顯，部分患者不能耐受。對于某些不適于接受皮膚外科手術(shù)治療和放化療，或者術(shù)
后需要預(yù)防復(fù)發(fā)的病例，選擇適當(dāng)有效的外用藥物進(jìn)行局部治療非常重要；且外用藥物比口服藥物具有更好的安全性。因此，臨床需要研制開發(fā)一種來源于天然、效果顯著、無明顯不良反應(yīng)的治療皮膚腫瘤的外用制劑，以減輕患者痛苦。開發(fā)此類治療皮膚腫瘤的外用制劑產(chǎn)品具有良好的臨床應(yīng)用前景，對患者是十分有益和必要的。銀杏是我國珍貴的藥用植物，銀杏的葉、果和外種皮等皆具有藥用開發(fā)價值。據(jù)《本草綱目》記載，銀杏性甘、苦、平、澀；有定喘止咳、止帶濁、止痛之功；主治寒嗽痰喘、哮喘、小便頻數(shù)、赤白帶下、手足皸裂等。特別是近幾十年來人們發(fā)現(xiàn)銀杏葉中含有多種有效成分，主要有效成分為黃酮類和萜類內(nèi)酯化合物，具有防治心腦血管疾病的功能。銀杏酚酸為無色或淡黃色的油狀或粉末狀物質(zhì)，是存在于銀杏葉、果和外種皮中一類具有重要生理活性的組分。本發(fā)明所涉及的銀杏酚酸為烷基或烯基苯酚酸類物質(zhì)，根據(jù)分子中苯環(huán)上是否連接有羧基，將其分為銀杏酸和銀杏酚兩大類。銀杏酸是水楊酸分子在苯環(huán)C6位上有飽和或不飽和長鏈烷基的系列化合物，按化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為5種，側(cè)鏈R為C13H27' C15H29' C15H31' C17H31 和 C17H33，對應(yīng)的分子量分別為 320、346、348、372、374。銀杏酚酸包括白果酸、氫化白果酸、白果新酸、白果亞酸、氫化白果亞酸、漆樹酸、銀杏酚、銀杏二酚、白果醇等。銀杏酚酸(銀杏酸、銀杏酚、銀杏二酚)結(jié)構(gòu)見下。
OH1 R=C13H27 (C13:0) hoYVr 銀杏勘
5 0-Λ U 們(H、I JginkgoKcardanols)
人 COOHr c<shm(c :” 3 R=Cj7H31 (￠17:2)A
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V^r 5—⑴ I銀杏酚酸的結(jié)構(gòu)隨著對銀杏酚酸類物質(zhì)研究的逐漸深入，發(fā)現(xiàn)銀杏酚酸具有多種生物活性。已有研究表明，銀杏酚酸對體外多種細(xì)菌有良好的抑制作用，能抑制部分農(nóng)業(yè)病原菌的生長；銀杏酚酸對部分內(nèi)臟器官腫瘤細(xì)胞株的生長有良好的抑制作用。有關(guān)銀杏酚酸的提取、分析及體外抗菌活性、抗農(nóng)業(yè)病原菌和病原蟲、抗部分內(nèi)臟器官腫瘤已有文獻(xiàn)報道。目前尚未見銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途的報道。因此，有關(guān)銀杏酚酸外用制劑治療皮膚腫瘤新型藥物的研究開發(fā)，以及對銀杏資源的充分開發(fā)利用，將產(chǎn)生巨大的社會和經(jīng)濟(jì)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供銀杏酚酸的新用途，即銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途。它具有療效顯著和使用安全的特點(diǎn)。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的提供銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途。所述銀杏酚酸包括銀杏酸、銀杏酚、銀杏二酚等，可通過化學(xué)分離方法，從銀杏的葉、果、外種皮、根莖等部位的提取物中得到；或?qū)︺y杏葉、果、外種皮、根莖提取加工產(chǎn)物在提取加工過程中剩余的廢料中重新回收；或從其它植物含有本類化合物的各部分提取物中獲得；或通過化學(xué)合成的方法獲得。本發(fā)明要求保護(hù)該類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物、結(jié)晶形態(tài)等物質(zhì)。還提供含有銀杏酚酸的治療皮膚腫瘤的藥物外用制劑，含有銀杏酚酸
O.001-80%，以重量百分比計，以及藥學(xué)上常用的外用制劑基質(zhì)或外用制劑可接受的載體。更進(jìn)一步的，含有銀杏酚酸O. 001-30 %，以重量百分比計。更進(jìn)一步的，含有銀杏酚酸O. 5_20%，以重量百分比計。按上述重量比范圍取主藥銀杏酚酸、藥學(xué)上常用的外用制劑基質(zhì)或可接受的載體制備得到銀杏酚酸外用制劑；以及包含銀杏酚酸和任何物質(zhì)組合用于治療皮膚腫瘤的藥物外用制劑。所述制劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的外用劑型，可以是液體制劑、膏霜劑、凝膠劑、粉劑、膜劑、洗劑、氣霧噴霧劑、透皮吸收制劑、皮下注射劑等。本發(fā)明的有益效果是，藥理藥效學(xué)試驗(yàn)研究表明，本發(fā)明銀杏酚酸外用制劑具有抑制皮膚腫瘤的發(fā)生和腫瘤增長、提高荷瘤小鼠生存率的作用，并能抑制皮膚癌細(xì)胞的增殖；對皮膚腫瘤具有顯著的治療作用。局部刺激性實(shí)驗(yàn)研究表明本發(fā)明安全，無皮膚刺激、過敏等不良反應(yīng)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步地描述。實(shí)施例I :銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝如下將銀杏果外種皮剝離下來，曬干，用粉碎機(jī)將其粉碎。準(zhǔn)確稱取一定量經(jīng)粉碎的銀杏外種皮，加入料液比為I : 6(w/v)的80%乙醇，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時間4小時，(注加液后，燒杯口用保鮮膜封住，以防止乙醇的揮發(fā))。浸提結(jié)束后，用抽濾器抽濾，收集濾液。用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮濾液，條件為溫度55°C，壓強(qiáng)O. 008-0. 009MPa,減壓濃縮。于60°C真空干燥，得銀杏酚酸浸膏，性狀為淺褐色浸膏，微臭，溶于醇，不溶于水；稱重，并測定銀杏酚酸含量(mg/g)。
銀杏酚酸含量測定采用HPLC法進(jìn)行測定。銀杏酚酸的標(biāo)準(zhǔn)品溶液在100-1200 μ g/ml之間，相應(yīng)峰面積與銀杏酚酸質(zhì)量濃度有顯著的線性關(guān)系，制訂了標(biāo)準(zhǔn)曲線。用無水乙醇(色譜純)將銀杏酚酸浸膏溶解，過濾。在柱溫室溫；流動相甲醇-水(9 : I, v/v);流速lml/min ;進(jìn)樣量20μ I ;檢測波長310nm ;分析時間25min條件下測定浸膏中銀杏酚酸含量。根據(jù)標(biāo)樣的保留時間進(jìn)行定性，用外標(biāo)法計算銀杏酚酸的含量。浸膏中銀杏酚酸含量為662. 30mg/g。銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法為公知公用的方法。凝膠劑的制備將卡波普IOg灑在500ml蒸懼水表面,溶脹過夜。稱取甘油60g,丙二醇120ml，分別加入至溶脹好的卡波普中，迅速研磨均勻，得到透明的凝膠基質(zhì)。取上述銀杏酚酸浸膏40g，溶解于IOOml 95%乙醇溶液中，緩慢加入至凝膠基質(zhì)中，攪拌均勻。再緩慢加入三乙醇胺15ml，補(bǔ)蒸餾水至足量lOOOg，即得淡黃色銀杏酚酸凝膠lOOOg，銀杏酚
酸含量為2. 65% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。凝膠劑制備工藝為公知公用的方法。實(shí)施例2 銀杏果實(shí)白果中銀杏酚酸提取工藝如下將白果去皮，放入組織搗碎機(jī)中粉碎。準(zhǔn)確稱取一定量經(jīng)粉碎的白果，加入料液比為I : 10(w/v)的80%乙醇，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時間4小時，(注加液后，燒杯口用保鮮膜封住，以防止乙醇的揮發(fā))。浸提結(jié)束后，離心(5000轉(zhuǎn)/分，15分鐘)，取上清液。用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮上清液，條件為溫度551，壓強(qiáng)0. 008-0. 009MPa，減壓濃縮，并于60°C真空干燥，得銀杏酚酸浸膏，性狀為淺褐色浸膏，微臭，溶于醇，不溶于水。稱重，并測定銀杏酚酸含量(mg/g)。銀杏酚酸含量測定同實(shí)施例I。浸膏中銀杏酚酸含量為503. 91mg/g。軟膏劑的制備取上述銀杏酚酸浸膏40g，溶解于IOOml 95%乙醇溶液中，再向其中加入三乙醇胺50ml，加溫至70°C。將石蠟300g、硬脂酸300g、丙二醇IOOml分別加入攪拌融化，補(bǔ)蒸餾水至足量lOOOg，攪拌均勻至膏狀，即得淡黃色銀杏酚酸軟膏l(xiāng)OOOg，銀杏酚酸含量為2. 02% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。軟膏劑制備工藝為公知公用的方法。實(shí)施例3 銀杏葉中銀杏酚酸提取工藝如下將銀杏葉剪碎，放入粉碎機(jī)中將其粉碎。準(zhǔn)確稱取一定量經(jīng)粉碎的銀杏葉，加入料液比為I : 6(W/V)的80%乙醇，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時間4小時，(注加液后，燒杯口用保鮮膜封住，以防止乙醇的揮發(fā))。浸提結(jié)束后，離心(5000轉(zhuǎn)/分，15分鐘)，取上清液。用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮上清液，條件為溫度55°C，壓強(qiáng)0. 008-0. 009MPa，減壓濃縮，并于60°C真空干燥，得銀杏酚酸浸膏，性狀為淺褐色浸膏，微臭，溶于醇，不溶于水。稱重，并測定銀杏酚酸含量(mg/g)。銀杏酚酸含量測定同實(shí)施例I。浸膏中銀杏酚酸含量為537. 68mg/g。酊劑的制備取上述銀杏酚酸浸膏80g，溶解于600ml 95%乙醇溶液中，再向其中分別加入三乙醇胺50ml，丙二醇200ml攪拌，補(bǔ)95%乙醇溶液至足量1000ml，即得淡黃色銀杏酚酸酊劑1000ml，銀杏酚酸含量為4. 3% (W/V)。分裝于50支小管中，每支20ml。酊劑制備工藝為公知公用的方法。實(shí)施例4
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為655. 04mg/g。取銀杏酚酸浸膏80g，按實(shí)施例I凝膠劑制備工藝制備銀杏酚酸凝膠1000g，銀杏酚酸含量為5.24% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。實(shí)施例5 銀杏果實(shí)白果中銀杏酚酸提取工藝同實(shí)施例2，含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為534. 39mg/g。取銀杏酚酸浸膏10g，按實(shí)施例2軟膏劑制備工藝制備銀杏酚酸軟膏1000g，銀杏酚酸含量為O. 53% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。實(shí)施例6 銀杏葉中銀杏酚酸提取工藝同實(shí)施例3，含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為552. 47mg/g。取銀杏酚酸浸膏200g，按實(shí)施例3酊劑制備工藝制備銀
杏酚酸酊劑1000ml，銀杏酚酸含量為11. 05% (W/V)。分裝于50支小管中，每支20ml。實(shí)施例7 銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為634. 53mg/g。取銀杏酚酸浸膏300g，按實(shí)施例3酊劑制備工藝制備銀杏酚酸酊劑1000ml，銀杏酚酸含量為19. 04% (W/V)。分裝于50支小管中，每支20ml。實(shí)施例8 銀杏葉中銀杏酚酸提取工藝同實(shí)施例3，含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為549. 24mg/g。取銀杏酚酸浸膏200g，按實(shí)施例I凝膠劑制備工藝制備銀杏酚酸凝膠1000g，銀杏酚酸含量為10. 98% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。實(shí)施例9 銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為672. 02mg/g。取銀杏酚酸浸膏500g，按實(shí)施例3酊劑制備工藝制備銀杏酚酸酊劑1000ml，銀杏酚酸含量為33.6% (W/V)。分裝于50支小管中，每支20ml。實(shí)施例10 銀杏果實(shí)白果中銀杏酚酸提取工藝同實(shí)施例2，含量測定方法同實(shí)施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為441. 93mg/g。取銀杏酚酸浸膏l(xiāng)g，按實(shí)施例2軟膏劑制備工藝制備銀杏酚酸軟膏1000g，銀杏酚酸含量為0.044% (W/W)。分裝于50支小管中，每支20g。用以上方法制成的銀杏酚酸外用制劑，進(jìn)行相關(guān)的藥理藥效學(xué)試驗(yàn)和局部刺激性安全性評價實(shí)驗(yàn)。下面是本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)慢性應(yīng)用窄譜中波紫外線(UVB)對各組小鼠背部剃毛部位皮膚進(jìn)行照射，建立小鼠皮膚腫瘤模型，干預(yù)治療小鼠皮膚腫瘤發(fā)生的數(shù)目及體積，進(jìn)行比較分析；同時比較各組小鼠存活率。腫瘤計數(shù)自照射28周出現(xiàn)第一個腫瘤起至33周停止照射，每周分別計數(shù)各組小鼠皮膚腫瘤數(shù)目。腫瘤體積的測量與計算自照射28周出現(xiàn)第一個腫瘤起至33周停止，分別測量各鼠背部腫瘤的最大直徑(a)及與之垂直的短徑(b)，單位mm;運(yùn)用公式(aXb2)/2計算腫瘤的體積，單位mm3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，表2。結(jié)果表明，與模型組小鼠相比，本發(fā)明銀杏酚酸組小鼠照射區(qū)皮膚腫瘤數(shù)目和腫瘤體積均明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。模型組小鼠在實(shí)驗(yàn)過程中有一定比例的死亡，而本發(fā)明銀杏酚酸組小鼠存活率達(dá)100%。說明本發(fā)明銀杏酚酸外用制劑能有效地抑制慢性窄譜UVB照射所致小鼠皮膚腫瘤的發(fā)生和腫瘤增長，并能明顯提聞荷瘤小鼠的生存率。
表I.對UVB照射33w小鼠存活率及皮膚腫瘤體積的影響
權(quán)利要求
1.銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途。
2.如權(quán)利要求I所述的銀杏酚酸外用制劑，為含有銀杏酚酸的具有治療皮膚腫瘤的藥物外用制劑；以及包含銀杏酚酸和任何物質(zhì)組合用于治療皮膚腫瘤的藥物外用制劑；其特征是，所述制劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的外用劑型，可以是液體制劑、膏霜劑、凝膠劑、粉劑、膜劑、洗劑、氣霧噴霧劑、透皮吸收制劑、皮下注射劑等。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物外用制劑，其特征是，含有銀杏酚酸O.001-80%,以重量百分比計。
4.如權(quán)利要求2所述的藥物外用制劑，其特征是，含有銀杏酚酸O.001-30%，以重量百分比計。
5.如權(quán)利要求2所述的藥物外用制劑，其特征是，含有銀杏酚酸O.1-20%，以重量百分比計。
6.所述銀杏酚酸包括銀杏酸、銀杏酚、銀杏二酚等，可通過化學(xué)分離方法，從銀杏的葉、果、外種皮、根莖等部位的提取物中得到；或?qū)︺y杏葉、果、外種皮、根莖提取加工產(chǎn)物在提取加工過程中剩余的廢料中重新回收；或從其它植物含有本類化合物的各部分提取物中獲得；或通過化學(xué)合成的方法獲得；包括銀杏酚酸藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物，結(jié)晶形態(tài)的物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明涉及銀杏酚酸在制備治療皮膚腫瘤的外用制劑中的用途。所述銀杏酚酸包括銀杏酸、銀杏酚、銀杏二酚等，可通過化學(xué)分離方法，從銀杏的葉、果、外種皮、根莖等部位的提取物中得到。含有銀杏酚酸的治療皮膚腫瘤的藥物外用制劑，含銀杏酚酸0.001-80％(以重量百分比計)，以及藥學(xué)上常用的外用制劑基質(zhì)或可接受的載體；所述制劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的外用劑型。藥理學(xué)試驗(yàn)研究表明，本發(fā)明具有抑制皮膚腫瘤的發(fā)生、抑制皮膚癌細(xì)胞的增殖和腫瘤增長、提高生存率的作用；且使用安全無副作用，具有良好的臨床應(yīng)用前景。
文檔編號A61P35/00GK102846677SQ201210292068
公開日2013年1月2日 申請日期2012年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月14日
發(fā)明者雷紅, 王青 申請人:王青