專利名稱：抗肥胖劑及抗肥胖食品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗肥胖劑和抗肥胖食品，更詳細(xì)地說，本發(fā)明涉及可以抑制脂質(zhì)從消化管的攝入、預(yù)防肥胖的抗肥胖劑和抗肥胖食品。
背景技術(shù)：
肥胖是以體脂肪過剩為特征的體重控制體系疾病?，F(xiàn)代社會(huì)中，由于運(yùn)動(dòng)不足和卡路里過剩的飲食導(dǎo)致中性脂肪在體內(nèi)蓄積并被判定為肥胖的人不斷增加，成為很大的問題。為了預(yù)防肥胖，首要的是進(jìn)行對消耗所攝取的脂肪來說充分的運(yùn)動(dòng)，但實(shí)際上進(jìn)行運(yùn)動(dòng)較為困難，需要減少脂肪的攝取。但是，想通過過度的節(jié)食來抑制肥胖時(shí)，其它必需營養(yǎng)的攝取量不足或平衡被破壞，結(jié)果還會(huì)對身體造成不良影響。可以說這與攝取被稱為減肥食品的營養(yǎng)少但可以帶來飽漲感的食品的情況相同。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題因此，強(qiáng)烈要求開發(fā)攝取正常飲食的同時(shí)可防止成為肥胖較大原因的脂質(zhì)(三酰甘油)被吸收到體內(nèi)的方法。用于解決問題的方法本發(fā)明人著眼于脂質(zhì)被吸收到體內(nèi)的機(jī)理，對于肥胖的抑制方法進(jìn)行了研究，結(jié)果注意到，如果腸內(nèi)的微生物群落(菌群)將脂質(zhì)攝取分解，則人攝取的脂質(zhì)減少，自然可以預(yù)防肥胖。于是，對于這樣的可攝取分解脂質(zhì)的微生物進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)屬于乳酸菌的微生物中具有這種作用的菌，進(jìn)而完成了本發(fā)明。S卩，本發(fā)明為抗肥胖劑，其以屬于羅伊氏乳桿菌的微生物為有效成分，該微生物產(chǎn)生由以下(1) (3)的氨基酸序列或該氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的脂肪酶。這里所說的1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價(jià)的序列、依然保持脂肪酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(I)M VKLMTIHELANNPTLSGQVRLIENIVYGA
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進(jìn)而，本發(fā)明為由下述(8)所示的氨基畫g序列或在該氨基SI序列中個(gè)或
基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的腸道黏附性蛋白質(zhì)。這里所說的1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價(jià)的序列，依然保持使乳酸菌黏附在腸道粘膜細(xì)胞附近的活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(8) MFGHDGRIVTKVYQWAGTYYYFDPNTYLRV
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PSEI 發(fā)明效果
通過攝取本發(fā)明的抗肥胖劑和抗肥胖飲食品，可以進(jìn)行正常飲食但防止脂質(zhì)由腸道的吸收。而且，乳酸菌自古就用于酸奶或發(fā)酵乳等發(fā)酵食品的制造中，安全性極高，因此可以放心地?cái)z取。


圖1為表示羅伊氏乳桿菌JCM 1112T代謝圖譜的圖。圖2為表示投與羅伊氏乳桿菌JCM 1112T的大鼠組隨時(shí)間的體重增加與比較組和對照組相比較的圖。
具體實(shí)施例方式作為本發(fā)明的抗肥胖劑和抗肥胖食品(以下有時(shí)稱為“抗肥胖劑等”)的有效成分的微生物，屬于乳酸菌的羅伊氏乳桿菌(LacTcAacillus reuteri)，是可以產(chǎn)生由上述 (1) (3)的氨基酸序列(分別對應(yīng)于序列表的1、3、5)或在該氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的脂肪酶(以下稱為“本發(fā)明脂肪酶類”)的乳酸菌(以下稱為“本發(fā)明乳酸菌”)。該本發(fā)明的脂肪酶類將存在于腸道粘膜細(xì)胞附近的脂質(zhì)(三酰甘油)分解為脂肪酸和甘油，攝入到本發(fā)明乳酸菌中。而且，如圖1所示，所攝入的脂肪酸作為菌體構(gòu)成要素被利用，甘油經(jīng)過各種代謝途徑成為二氧化碳、丙酮、乙醇、乳酸鹽或羅伊氏素(reuterin)。本發(fā)明乳酸菌除了具有產(chǎn)生上述脂肪酶類的能力，即具有編碼上述脂肪酶的核苷酸序列(基因)之外，優(yōu)選具有以下(4)所示的核苷酸序列(對應(yīng)于序列表的8)作為編碼運(yùn)載蛋白的基因。另外，本發(fā)明還包括與下述(4)所示核苷酸序列的同源性為80%以上、且能在嚴(yán)格條件下與編碼具有甘油轉(zhuǎn)運(yùn)活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列和下述(4)所示核苷酸序列雜交、且編碼具有甘油轉(zhuǎn)運(yùn)活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列。(4)ATGCATGGATTTATTGGCGAATTTTTTGGCACCATGGTTTTAATCCTATTAGGAGCAGGATGTTGTGCTGGTAATAGTTTGAATAAAACATATGGGAAACAAAGTGGCTGGTGGTTTATCTGTATTTCATGGGGCTTAGCAGTTACAATGGGAGTTTATGTTGCAGGATTTCTGGGTTCATTAGGGCACTTAAATCCCGCTGTAACAATTCCTTTTGCTATTTTTGGCTTATTCCCATGGAGTAACGTTATACCTTACTTACTTGGTCAATTTCTTGGTGCGTTTGTTGGTGCAGTATTAGTAATTATTCAATTCTATCCACAATTTAAAGCAACCCCAAATGAAGAAGAAGGAAATAATGTTGGTATTTTTGCTACTCGTCCAGCGATAAATAGTCCAATTTTTAACTTTTTCTCAGAAGTGATTGCGACCTTTGCATTTATTTTCATCTTATTAAATCTTGGCAACTTTACACAGGGATTGAAGCCATTTATCGTAGGAATGGTTATTGCAGTTGTTGGTACATGTCTCGGGACAACTACTGGCTTTGCATTAAACCCAGCTCGTGATTGGTCACCACGTTTAGCATATACTATTTTGCCAATTCCTAATAAGGGTGTTTCAGAATGGTGGTATGCATGGGTTCCAATGTGTGGCCCAATTGTTGGGGGCCTTCTTGCTTGTGCTTTACAAACGGCACTAGTTTAG該基因編碼將甘油攝入到本發(fā)明乳酸菌的細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)載蛋白，如圖1所示，所攝入的甘油通過乳酸菌內(nèi)的酶代謝。進(jìn)而，本發(fā)明乳酸菌優(yōu)選具有由上述式(5) (7)所示的氨基酸序列(分別對應(yīng)于序列表的序列號9、11、1；3)或該氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的亞基所構(gòu)成的甘油分解酶。該亞基(5) (7)所構(gòu)成的甘油分解酶為在pdu(propanediol utilization)操縱子中發(fā)揮作用的甘油脫水酶(glycerol dehydratase)，可以高效地代謝通過本發(fā)明脂肪酶的作用所產(chǎn)生的甘油。另外，可通過基因工程學(xué)方法將編碼該亞基(5) (7)的核苷酸序列(9) (11) (分別對應(yīng)于序列表的序列號10、12、14)整合到其它乳酸菌等中，由此獲得甘油分解性高的乳酸菌。本發(fā)明還包括與下述(9) (11)所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴(yán)格條件下與編碼具有甘油分解活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列和下述(9) (11)所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有甘油分解活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列。(9)ATGAAACGTCAAAAACGATTTGAAGAACTAGAAAAACGGCCAATTCATCAAGATACATTTGTTAAAGAATGGCCAGAAGAAGGTTTCGTTGCAATGATGGGGCCTAATGACCCTAAGCCTAGTGTAAAAGTTGAAAATGGCAAGATCGTAGAGATGGATGGTAAAAAGCTCGAAGATTTTGATTTGATTGACTTGTACATTGCTAAGTATGGAATCAATATTGACAACGTTGAAAAAGTTATGAATATGGATTCTACCAAGATTGCACGGATGCTTGTTGATCCTAATGTTTCTCGTGATGAAATTATTGAAATTACATCAGCTTTGACTCCTGCTAAGGCTGAAGAGATCATCAGTAAGCTTGATTTTGGTGAAATGATTATGGCTGTCAAGAAGATGCGCCCACGTCGTAAGCCTGACAACCAGTGTCACGTTACCAATACTGTTGATAACCCAGTTCAAATTGCTGCTGATGCTGCTGATGCCGCTCTTCGTGGATTTCCAGAACAAGAAACCACGACAGCTGTGGCACGTTATGCACCATTCAATGCTATTTCAATTTTAATTGGTGCACAAACAGGTCGCCCTGGTGTATTGACACAATGTTCTGTTGAAGAAGCTACTGAATTGCAATTAGGTATGCGTGGTTTTACCGCATATGCTGAAACCATTTCAGTTTACGGTACTGATCGTGTATTTACCGATGGTGATGATACTCCATGGTCTAAAGGCTTCTTGGCATCTTGTTATGCATCACGTGGTTTGAAGATGCGATTTACTTCAGGTGCCGGTTCAGAAGTTTTGATGGGTTATCCAGAAGGTAAGTCAATGCTTTACCTTGAAGCGCGTTGTATTTTACTTACTAAGGCTTCAGGTGTTCAAGGACTTCAAAATGGTGCCGTAAGTTGTATTGAAATTCCTGGTGCTGTTCCTAATGGTATTCGTGAAGTTCTCGGTGAAAACTTGTTATGTATGATGTGTGACATCGAATGTGCTTCTGGTTGTGACCAAGCATACTCACACTCCGATATGCGGCGGACTGAACGGTTTATTGGTCAATTTATTGCCGGTACTGATTATATTAACTCTGGTTACTCATCAACTCCTAACTACGATAATACCTTCGCTGGTTCAAACACTGATGCTATGGACTACGATGATATGTATGTTATGGAACGTGACTTGGGTCAATATTATGGTATTCACCCTGTTAAGGAAGAAACCATTATTAAGGCACGTAATAAGGCCGCTAAAGCCCTTCAAGCAGTATTTGAAGATCTTGGATTACCAAAGATTACTGATGAAGAGGTCGAAGCAGCAACGTATGCTAACACCCATGATGACATGCCAAAGCGGGATATGGTTGCAGATATGAAGGCTGCTCAAGATATGATGGATCGTGGAATTACTGCTATTGATATTATCAAGGCATTGTACAACCACGGATTTAAAGATGTCGCTGAAGCAATTTTGAACCTTCAAAAACAAAAAGTTGTTGGTGATTACCTTCAAACATCTTCTATTTTTGATAAAGATTGGAACGTCACTTCTGCTGTTAACGACGGAAATGATTATCAAGGACCAGGTACTGGATACCGTCTATATGAAGACAAGGAAGAATGGGATCGGATTAAAGACTTACCATTCGCCCTTGATCCAGAACATTTGGAACTGTAG(10)ATGGCTGATATTGATGAAAACTTATTACGTAAAATCGTTAAAGAAGTTTTAAGCGAAACTAATCAAATCGATACTAAGATTGACTTTGATAAAAGTAATGATAGTACTGCAACAGCAACTCAAGAGGTGCAACAACCAAATAGTAAAGCTGTTCCAGAAAAGAAACTTGACTGGTTCCAA
7
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AAGTACTTTGGTCCAGCTGGTCAGCAAGCTATTTCACGCTTTGAGAGACTTGATAATAAGTATTACTATTTCGATGCTAATGGGGCAGTTCTTAATATCCATGATCAATTTAAGAATATTGATAACCACACTTATTACTTTGGAGCTGATGGTGCTTGTTATACCAGTCAATTCTTAAATAAGGATGGTAAACAGTATTATTTCGATAATGATGGAATTATGCTCACTGATCAAGAGAAGATCATTGACGGTAAATTCTATCATTTCAATGTTAATGGTGAAGCAATCCAAGTAAATGATCCTTCTGAAATTTGA 另外，本發(fā)明乳酸菌優(yōu)選具有由下述式(16) (20)任一個(gè)所示的氨基酸序列 (分別對應(yīng)于序列表的序列號17、19、21、23、25)或該氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的甘油分解酶。該甘油分解酶為醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase，圖1中的ADH(S))，可以高效地代謝由本發(fā)明脂肪酶的作用所產(chǎn)生的甘油。 這里所說的1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價(jià)的序列，依然保持甘油分解活性的序列。作為這種氨基酸序列，可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(16)M KAAVINDPVDGFVTVKDVQLRDLKPGEALVDMEYCGLCHTDLHVAAGDFGKKPGRI IGHEGVGRVSKVAPGVTSLKVGDRVSIAWFFKGCGHCEYCLTGRETLCRNVLNAGYTADGAMAEQCIVPADYAVKVPEGLDPVEATSLTCAGVTMYKALKVADIKPGQWVSIVGAGGLGNLGIQLAHNVFGAHVIAVDGNPDKLEAAKKNGAEILINRHDGDVDKQIQEKVGGVHAAVVTAVSASAFDQAVDSLRPDGKLVAVALPQGDMKLNI A K T V L D G I IVAGSLVGTRQDLAECFQFGAEGKVHPIVKTRKLSEINDMIQELKDNKVVGRNVVDFVHNDND(17)M EKRENAIPKTMKAWAVTTPGPIDGKESPIEFTEKPVPTPKRGEVLVKVITCGVCHTDLHVTEGDLPVHHEHVTPGHEIVGKVVGFGPETQRFKFGERIGIPWFRHACGVCKFCRSGHENLCPHSLYTGffDHDGGYAEYVTVPEGFAYRLPEKFDSLEAAPLLCAGI IGYRAFERANVPAGGRLGLYGFGGSAHITAQIALAQGIEVHVFTRGEDAKKFALELGCASVQGSYDPAPVPLDSSI IFAPVGDMVLPALASLVPGGTLALAGIHMTDIPTMNYQKEIFHEKTLTSVESNTRRDGEEFLTLADRLNIHPEVHEYPLAKADEALRYVKHGDIKGACVLRVSED(18)M QIKAALATKPNADLEIQTVELDEPKENEVLIKIASTGFCHTDIVGRSGATTPLPVVLGH
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(34)ATGCAAATTAAAGCTGCTCTTGCAACCAAACCTAACGCTGATTTAGAGATTCAAACCGTCGAATTGGATGAACCAAAAGAAAATGAAGTATTAATAAAAATTGCTTCAACAGGTTTTTGTCATACAGATATTGTTGGTCGAAGCGGTGCCACTACCCCTCTCCCCGTTGTCCTCGGGCATGAAGGTGCGGGCGTCGTCCAAAAAGTAGGAGCTAACGTTACGGACGTTAAACCCGGCGACCATGTTGTTCTATCATTTAGCTACTGTGGCCATTGCTATAACTGTACTCATAATCATCAAGGCTTATGCGAAAACTTCAATCAGCTAAACTTTGAAGGAAAAACCTATGATGGTACTCACCGCCTGCACTTAGATGATGGCACGCCAGTCAGTGTCTTTTTTGGTCAGTCTTCCTTTGCGACCTATGTAACAGCCAATGTCCATAATATTGTTAAAGTTGATCAAGATGTTGATCTTAACTTATTAGGGCCACTCGGTTGTGGAATGCAAACAGGTGCTGGAACCGTTCTAAATTATATTAAACCTGCTCCTGAAGATGCAATTGCCGTTTTCGGTGCTGGTGCTGTTGGCTTAGCCGCAATTATGGCTGCTAAAATTGCTGGAGTTAAACATATTATTGCGATTAATCGTAACGGTAACCACCTTGACCTGGCGAAGGAATTGGGCGCTACTGAAACGATTAATAATACGGCTGAAGATCCCGTCAAAGCAATTAAAGAAATCGTTCCGCGTGGTGTAACTTATGCAATCGATACTACCGGAAACACCGGTGTAATTAAATCAGCAATTGATAGTCTTGCCACCGCTGGAGAATGTGTCCTCTTAGGAGTTGGCGGCGATATTACCTTAGACTTAATGAATGATATCTTATCAGAATCTAAGAAAATCTCTGGGGTTGTCGAAGGAGATAGCAATCCCCAAGAGTTTATTCCTCAACTAGTTAAGTACTACAAGCAAAGCAAGTTCCCCCTTGATAAGCTTGTTAAGTACTACGATTTTGCTGATATTAACCAAGTTATCGCTGACTCAACAAACGGAAAGGTTATTAAGCCAATCATCAAAATTGATCCTGAATTAGCTAAATAATTGCCGCTCACCAATGACGGAAGCAATGTTCAAAAAATGGTTGCAGAAGCTGGCCTTGCTGATCAAATTACTATTGATTCAGCCGGAACAAGTAACATTGCAGAAGGTTCACCTGCTGATAGTCGAACAAAAGCCATTCTCGATAAATATCACATTAAAGACGACGGAATGATTGCCCGTCAATTGCAGGACAGGGATTATTATGATGCCGATTATATTATCGCAATGGATCAGATGAATGTCCGGGACGCAAAAGATATGGCACCAGCTGGGTTAGAAAATAAGGTTCATGGAATCTTTGAAGCTACCCCAGGAAAAGAAAATTGCTATATCGTTGACCCCTGGATCACTCACTGA(35)ATGAAAAAAGCTATTTTTGAAAAGGCGGGTCAAATGAAGATTGTTGATGTTGACCGTCCAACAATTGAAAAGCCTGATGACGTAATTATTAAGGTAGTGCGGACCTGTGTTTGTGGTTCTGACCTATGGAACTTCCGAGGAATTAATCCGGTTGAAAAAGATTCTGAAAACTCTGGCCATGAAGCAATTGGAATTGTTGAAGAAGTTGGTGAAGATATCACTACTGTCAAACCTGGGGACTTTGTGATTGCTCCATTTACTCATGGATGTGGGCACTGTGCTGCTTGTCGCGCGGGCTTCGATGGTTCTTGCCAAAGTCACAACGATAACTTTAGCTCTGGTGTGCAAGCTCAATACGTTCGGTTCCAACACGGTCAATGGGCGCTTGTTAAAGTTCCGGGCAAGCCAAGTGACTACAGTGAAGGAATGCTTAAGTCCCTCTTAACCCTTGCTGATGTTATGGCTACTGGTTACCACGCTGCACGAGTTGCTAACGTTAGTGATGGTGATACAGTTGTTGTAATGGGTGACGGTGCTGTTGGCCTTTGTGCGATTATTGCTGCTAAGATGCGGGGCGCTAAGAAGATCATTTCTACTAGTCGCCATGCTGACCGTCAAGCCCTTGCTAAGGAATTTGGTGCTACTGACAATGTTGCTGAACGTAGTGACGAAGCGGTTCAAAAGATCATGGAACTCACTAACGGTGCCGGTGCTGATGCTGTCCTTGAATGCGTTGGTACTGAACAATCAACTGATACTGCCATGAAAGTTGGCCGTCCA
GGTACCATCGTTGGTCGGGTTGGCTTACCTCATACCCCAAAGATGGACATGACGGTGCTA
TTCTACAACAACACTATTGTCGGCGGTGGTCCAGCATCAGTAACCACTTACGACAAGGACGTATTGTTGAAGGCTGTTCTTGATGGTGACATTAACCCTGGTAAGGTCTTTACTAAGAGCTTCGACCTTGACCAAATTCAAGAAGCTTATGAAGCAATGGATAAGCGTGAAGCAATCAAGTCTTACATTATTATGGATGGCTTTGAACGCGATTAA(36)ATGGGTCGTTTAGATAATAAAGTTGCAATTATTACTGGTGGTTCTAAAGGAATTGGAGCTGCTGTCGCAAAAAAGTTTATCGAAGAAGGCGCAAAGGTTGTTTTAACCGCTCGGAAGATGGATGAGGGACAAAAAGTCGCTGACCAACTAGGTGACAATGCGATCTTTATCCAACAAGACGTTGCTCGGAAAGGAGACTGGGACCGGGTAATCCGCCAAACTGTCCAAGTCTTTGGGAAGCTCAATATTGTGGTTAACAATGCGGGAATTGCCGAATACGCCGATGTTGAGAAGACGGACGCTGAAATTTGGGATAAAACAATTGCCGTTAACCTTACCGGTACGATGTGGGGAACTAAGCTCGGTATTGAAGCAATGAAGAACAACGGGGAAAAGAATTCAATCATCAATATGTCATCCATTGAAGGACTAATTGGTGATCCTGATCTCTTTGCATACAATGCTTCTAAGGGTGGTGTCCGCCTCTTAACTAAGTCCGCTGCGCTTGATTGTGCCCGGAAAGGCTATGACATCCGTGTAAATACAATTCATCCTGGTTATATCTCAACTCCACTAGTTGATAATTTGGTCAAGGATGATCCAAAAGCAGAAGGACACCTAGAAAGCCTTCATCCCCTTGGCCGTCTTGGAAAGCCAGAAGAGATTGCTAACCTCGCTTTATACCTTGCTTCAGATGAATCAAGCTTTAGTACTGGTTCGGAATTTGTCGCTGATGGTGGCTATACGGCTCAATAA本發(fā)明乳酸菌優(yōu)選具有由下述式或0 所示的氨基酸序列(分別對應(yīng)于序列表的序列號27、29)或該氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的甘油分解酶。該甘油分解酶為醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase，圖1中的 ADH(S))，可以高效地代謝由本發(fā)明的脂肪酶作用所產(chǎn)生的甘油。這里所說的1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價(jià)的序列，依然保持甘油分解活性的序列。作為這種氨基酸序列，可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(21)MTNVPTVKLNNGVEMPTLGFEVFQVPDLSQ
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(37)ATGACAAATGTACCAACAGTAAAATTAAATAACGGAGTAGAAATGCCAACCCTTGGATTTGAAGTATTCCAAGTTCCAGACTTAAGCCAAGCTGAACAAGCAGTTACCGATGCTCTTGAAGTCGGCTATCGTTTAATCGATACTGCTGCTGCTTACCAAAATGAAGAAGCAGTTGGAAAGGCAATTAAGAATAGTAGTGTAAACCGTGAAGATGTCTTTGTAACTTCTAAGTTATGGGTGTCTGATTTTAACTATAAGCGGGCTAAAGCAGGGATTGACGCTTCACTGCAAAAACTTGGCCTTGATTACATGGATCTTTACCTTCTCCATCAACCATATGGCGATACAATGGGGGCTTGGCGAGCATTACAAGAAGCACAGAAAGAAGGTAAGATTCGCGCAATCGGTGTATCGAACTTCTACGCTGATCAACTAAAGGATCTTGAATTAACAATGCCTGTTAAGCCAGCGGTCAACCAAATTGAAGTTAACCCTTGGTACCAGCAAGATCAAGAGGTTAAGTTTGCGCAAAGTGAAGATATTCGTGTTGAAGCATGGGCACCATTTGCGGAAGGTAAGCATGATATTTTTACCAACGAAATAATTGCGGAAATTGCTGCCAAGTATGGCAAGAGCAATGGTCAAGTAATTCTTCGCTGGCTTTTACAACGGGGTATTACTGTCATTCCAAAGTCAGTCCACAAGAACCGGATGGAAGAAAATATCGATGTCTTTGATTTTGAACTTTCCAATGATGATATGAAAAAGATAGCTAGTCTTAACAAGAAGGAAAGCCAATTCTTTGACCACCGTGATCCGGTTACGATTGAACAAATCTTTGGCTCCAGCTTAAAGATGGTTCAAGATGACGAAAAATAA(38)ATGATTTTAGATGAGACAATTACTCTTAATAGTGGTGTGAAAATTCCAAAGTTTGCATTAGGAACCTGGATGATTGATGATGACCAAGCAGCCGAAGCAGTTCGGAATGCGATTAAGATGGGATATCGGCACATCGATACAGCTCAGGCTTATGATAATGAGCGGGGAGTCGGTGAAGGTGTACGAACAGCCGGTATTGATCGGGATAAAATCTTTGTTACTTCAAAGATCGCTGCTGAACACAAAGATTATGATGTAACTAAAAAGTCGATTGACGAGACTCTTGAAAAGATGGGTCTTGATTATATCGACATGATGCTTATTCATAGTCCTCAACCATGGAAAGAAGTAAATCAATCTGATAATCGTTACCTTGAAGGAAATCTCGCTGCTTGGCGAGCCATGGAAGATGCCGTTAACGAAGGTAAGATTCGAACAATTGGCGTTTCTAATTTCAAAAAAGCCGATCTTGAAAATATTATTAAGAATAGCGATACCGTTCCCGCTGTTGATCAAGTTTTAGCTCATATTGGTCATACTCCATTCAATCTTTTATCATTTACTCATGAACATGACATTGCGGTTGAAGCATATTCACCAGTTGCTCACGGCGCTGCTTTAGACAACCCCGTAATTGAAAAGATGGCTAAAAAGTACAACGTTTCAGTCCCACAATTGTGCATTCGGTATGATTGGCAAATAGGAATGATCGTCTTACCAAAGACTACTAATCCAGAACACATGAAGGAAAACACTGAAATTGATTTTGAAATTTCTGAAGCTGATATGGACCTATTGCGGCGAGTAAAGCCATTAGACTATGGCGATTTTGATATCTACCCTGTTTACGGTGGAAAAATGTAA
14
另外，本發(fā)明乳酸菌優(yōu)選具有由下述式 0 任一個(gè)所示的氨基酸序列 (分別對應(yīng)于序列表的序列號31、33、35)或該氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase)。該醛脫氫酶為圖1中所示的aldehyde dehydrogenase (9)，可以高效地代謝由本發(fā)明脂肪酶的作用而產(chǎn)生的甘油。 這里所說的1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價(jià)的序列，依然保持醛脫氫酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(23) MPANNKKQVEKKELTAEEKKQNAQKLVDDL
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15
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另外，還可以通過基因工程學(xué)的方法將編碼該醛脫氫酶-(25)的下酸序列(39) Gl)(分別對應(yīng)于序列表的序列號32、34、36)整合到其它乳酉I菌等，
得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本發(fā)明還包括與下述(39) 任一個(gè)所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴(yán)格條件下與編碼具有醛脫氫酶活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列和下述(39) 任一個(gè)所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有醛脫氫酶活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列。(39)ATGCCTGCTAACAACAAGAAACAAGTTGAAAAGAAAGAATTAACTGCTGAAGAAAAAAAGCAAAACGCCCAAAAGCTAGTTGACGATTTAATGACTAAGAGTCAAGCTGCTTTTGAAAAGTTACGTTACTATTCACAAGAACAAGTTGACAAGATTTGTCAGGCAATGGCTCTCGCTGCC
GAAGAACACCACATGGACTTAGCTGTTGATGCTGCTAACGAAACTGGTCGTGGGGTTGCTGAAGATAAGGCTATCAAGAACATCTACGCAAGTGAATACATTTGGAACAACATCCGTCACGATAAGACTGTTGGTATTATCGAAGACAATGATGAAGACCAAACTATCAAAATTGCTGATCCACTTGGTGTCATTGCCGGAATTGTTCCAGTTACTAACCCTACTTCAACAACGATCTTCAAATCAATCATTAGTGCTAAGACACGGAATACAATCATCTTTTCTTTCCACCGTCAAGCAATGAAGTCATCTATCAAGACTGCAAAGATTCTCCAAGAAGCTGCTGAAAAAGCCGGTGCGCCAAAGAACATGATTCAATGGCTCCCTGAAAGTACCCGCGAAAACACTACCGCATTACTCCAACACCCTAATACTGCTACTATTTTAGCAACCGGTGGTCCTTCATTAGTTAAGGCTGCCTACAGTTCTGGTAACCCTGCTCTTGGTGTTGGTCCTGGTAACGGTCCTGCTTACATCGAAAAAACTGCCAACATCGAACGTTCTGTTTACGACATCGTTCTTTCTAAGACATTCGATAACGGTATGATTTGTGCCACTGAAAACTCAGTTGTTGTTGATGAAGAAATCTACGACAAGGTTAAAGAAGAATTCCAAAAGTGGAACTGTTACTTCTTGAAGCCAAACGAAATTGATAAATTTACTGATGGCTTTATTGACCCAGATCGTCATCAAGTTCGTGGTCCAATCGCTGGTCGTTCAGCTAATGCTATTGCTGACATGTGTGGTATTAAAGTACCTGACAACACTAAGGTTATCATTGCTGAATACGAAGGTGTTGGTGACAAGTACCCACTTTCAGCTGAAAAGCTTTCACCAGTATTAACAATGTACAAGGCAACCTCTCACGAAAATGCCTTTGATATCTGTGCTCAATTATTACACTACGGTGGTGAAGGTCACACTGCTGCTATTCACACCCTTGATGATGATTTAGCTACTAAGTACGGTCTTGAAATGCGTGCTTCACGGATCATTGTTAACTCCCCATCTGGTATTGGTGGTATTGGTAACATCTACAACAACATGACTCCATCCCTTACTTTAGGTACTGGTTCATACGGTAGTAACTCAATTTCTCACAACGTTACTGATTGGGACCTCTTAAACATCAAAACAATTGCAAAGCGGCGTGAAAACCGTCAATGGGTTAAGATTCCCCCAAAAGTATACTTTCAACGCAACTCACTAAAAGAATTGCAAGATATTCCAAACATTAACCGGGCATTCATCGTTACTGGTCCTGGAATGAGCAAGCGTGGTTACGTTCAACGTGTTATCGATCAATTGCGTCAACGCCAAAACAACACTGCTTTCTTAGTATTTGATGACGTTGAAGAAGATCCATCAACAAACACTGTTGAAAAAGGTGTTGCCATGATGAATGACTTCAAACCTGATACAATTATTGCTCTTGGTGGTGGTTCACCAATGGATGCTGCTAAGGCTATGTGGATGTTCTATGAGCACCCAGAAACTTCATGGTATGGGGTTATGCAAAAGTACCTTGATATTCGGAAGCGTGCTTACCAAATCAAGAAGCCTACTAAGTCTCAACTTATTGGTATCCCTACTACATCAGGTACTGGTTCAGAAGTTACTCCATTTGCGGTTATTACCGATTCAAAAACTCATGTTAAGTACCCACTTGCTGACTACGCCTTAACACCAAACATTGCAATCGTTGACTCACAATTCGTTGAAACTGTTCCAGCAAAAACTACTGCTTGGACTGGACTAGATGTTTTATGTCACGCTACTGAATCATATGTTTCTGTTATGGCAACTGACTACACTCGTGGTTGGTCACTACAAACCATCAAGGGTGTTATGGAAAACCTTCCTAAGTCAGTTCAAGGTGATAAGTTAGCTCGTCGTAAGATGCACGACTTCTCAACAATGGCCGGGATGGCATTTGGTCAAGCCTTCTTAGGAATTAACCACTCCCTTGCCCACAAGATGGGTGGAGCATTCGGTCTTCCTCACGGTTTGCTTATCGCTATTGCAATGCCACAAGTAATTCGCTTTAACGCAAAACGTCCACAAAAGCTTGCTCTCTGGCCTCACTATGAGACTTACCATGCAACTAAGGACTACGCTGACATTGCACGGTTCATTGGTTTGAAAGGCAACACTGATGAAGAATTAGCTGAAGCATATGCTAAGAAAGTTATCGAACTTGCTCACGAATGTGGTGTTAAGCTTAGTCTTAAGGACAATGGTGTTACACGTGAAGAAT TTGATAAGGCGGTTGACGATCTT
GCTCGCTTAGCTTACGAAGATCAATGTACTACTACTAACCCAGTTGAACCACTTGTTAGCCAACTCAAGGAATTACTTGAACGTTGCTACGATGGTACTGGCGTTGAAGAAAAATAA(40)ATGGCATATCAAAGTATCAATCCATTTACGAACCAAGTAGAAAAAACGTTTGAAAATACAACTGATGAAGAATTAGAACAAACATTAACTACGGCGCATCAATTATATTTAGATTGGCGGAAGTATAATGACCTTGAAGAACGGAAACGGCAAATTTTAAAGTTAGGTCAAATATTACGTGAACGGCGTGTTGAATATGCGACAGTTATGAGTAAGGAAATGGGAAAATTAATTAGCGAAGCAGAAGGCGAGGTTGACCTTTGTGCTTCTTTCTGTGATTATTATGCAGCCCATGCAGATGAATTTCTGCAACCAAAAATTATTGCGACAACGAGTGGACGCGCCAAAGTTTTGAAGCAATCATTAGGAATTTTAGTTGCAGTTGAACCTTGGAATTTCCCATTCTATCAAATTGCCCGGGTATTTATTCCCAACTTTATTGCAGGAAACCCCATGATCTTGAAGGATGCGTCGAATTGTCCAGCATCCGCCCAAGCATTTAACGATGCCGTTAAGGAAGCTGGTGCGCCAGCCGGCAGTTTAACTAATTTATTCCTTTCATATGACCAAGTAAATAAGGCAATTGCTGATAAGCGGGTAGCCGGCGTTTGTCTTACTGGTTCTGAACGTGGTGGTGCAACCGTTGCTAAAGAGGCTGGTGCTAATTTGAAGAAGAGCACTTTGGAACTTGGTGGTAATGATGCCTTTATTATCTTAGACGATGCAGATTGGGATCTTGTCGAAAAAGTTGCCCCGGCAGCCCGTCTGTATAATGCTGGACAAGTATGTACATCATCAAAACGTTTTATTGTCCTTGAAAAGGATTATGATCGTTTCTTAAAGATGATGAAAGATGCGTTCTCGAAAGTTAAAATGGGTGATCCCCTTGATCCATTAACAACTCTGGCACCATTATCATCTAAGAAAGCAAAAGAAAAGCTCCAACAGCAAGTCGCAACAGCAGTAGAAAATGGGGCCAAAGTTTACTATGGTAATAAGCCGGTTGACATGGAAGGTCAATTCTTTATGCCAACGATCTTAACTGATATCACTCCAGATAACCCAATATTTGATACGGAAATGTTTGGGCCAGTGGCTTCGGTTTATAAGGTTAGTTCCGAAGAGGAAGCAATCGAACTGGCTAATAATTCAAGCTATGGGTTAGGAAACACTATCTTTAGCAATGATTCCGAACATGCGGAACGAGTAGCAGCGAAGATCGAAACTGGAATGAGTTGGATTAATGCCGGCTGGGCTTCATTACCAGAATTACCATTTGGTGGTGTTAAGAATTCAGGTTACGGTCGTGAACTCAGCAGT
TACGGAATTGATGAATTTACTAACAAACATCTAATTTACGAAGCACGACAATAA(41)ATGCAGATTAATGATATTGAAAGTGCTGTACGCAAAATTCTTGCCGAAGAACTAGATAATGCCAGCTCTTCAAGTGCAAACGTTGCAGCTACTACTGATAATGGTCATCGCGGAATTTTCACTAATGTCAATGATGCAATTGCTGCTGCAAAAGCTGCTCAAGAAATATATCGGGATAAGCCAATTGCTGTTCGCCAACAAGTGATTGATGCCATTAAGGAAGGATTCCGCCCATATATTGAAAAAATGGCTAAAGATATCAAAGAAGAAACAGGAATGGGAACAGTAGAGGCCAAAATTGCTAAGTTAAACAATGCCTTGTACAACACTCCTGGTCCCGAGATTCTTGAACCAGTTGTAGAAAACGGTGACGGTGGGATGGTTATGTATGAACGGTTACCATATGGTGTTATTGGTGCGGTTGGCCCAAGTACAAACCCTTCAGAAACTGTAATTGCTAATGCGATCATGATGCTTGCCGGTGGTAATACTCTTTACTTTGGTGCTCACCCTGGCGCAAAGAATGTTACTCGCTGGACAATTGAAAAGATGAACGATTTTATTGCAGATGCAACAGGCCTTCATAATTTAGTTGTAAGTATTGAAACACCAACAATTGAATCAGTTCAACAAATGATGAAGCACCCCGACATTGCAATGTTAGCAGTAACTGGTGGCCCAGCTGTTGTTCACCAAGCAATGACCAGTGGTAAGAAAGCGGTTGGTGCTGGTCCTGGTAATCCTCCTGCAATGGTTGATGCTACTGCTGATATTGATTTAGCTGCTCATAATATCATTACATCTGCTTCATTTGATAATGATATTTTATGTACTGCTGAA
AAGGAAGTAGTTGCAGAAAGTAGCATTAAAGATGAATTAATTCGTAAGATGCAAGATGAAGGTGCCTTTGTAGTTAACCGTGAACAAGCCGATAAATTAGCTGATATGTGTATCCAAGAAAATGGTGCTCCTGATCGTAAATTTGTTGGTAAGGATGCAACTTATATCTTAGACCAAGCTAATATTCCTTACACAGGCCACCCAGTTGAAATTATTTGTGAACTTCCTAAGGAACATCCATTAGTAATGACTGAAATGTTAATGCCAATTTTACCAGTTGTTTCTTGTCCAACATTTGATGATGTTTTGAAGACTGCTGTTGAAGTTGAAAAAGGTAACCATCACACAGCTACTATTCATTCCAATAACCTTAAGCATATTAATAATGCTGCTCACCGGATGCAATGTTCAATCTTTGTT GTTAATGGCCCATCCTATGTTGGTACAGGTGTTGCAGATAATGGAGCTCACTCAGGTGCTTCAGCATTAACAATTGCTACGCCAACTGGTGAAGGAACATGTACTGCACGAACATTTACTCGTCGGGTTCGTTTGAACTCACCACAAGGATTCTCAGTACGTAACTGGTATTAA本發(fā)明乳酸菌優(yōu)選具有由下述式(26)所示的氨基酸序列(對應(yīng)于序列表的序列號37)或該氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的甘油酸激酶(glycerate kinase)。該甘油酸激酶為圖1中所示的glyceratekinase (10)，可以高效地代謝由本發(fā)明脂肪酶的作用而產(chǎn)生的甘油。這里所說的1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價(jià)的序列，依然保持甘油酸激酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(26) M KFVIAPDSFKGGLTAKEAANVMAEGIKRVFPNAEYALVPMADGGEGTVQSLVDATNGQKMIAKVHNPLNKLVNAEYGILGDGETAVIEMAAASGLQFVNKETANPLITTTYGTGELIKDA L D H N I K K I I IGIGGSATVDGGAGMAQALGARLLDADNHEIGLGGGELASLEQVDFGGLDPRLKNVDIQIASDVTNPLTGKNGAAPVFGPQKGADEEMVNILDKNLHHYARKIVAAGGPDVEQTAGAGAAGGLGAGLIAFTGATMKRGVELVIEATQLQKKAVGADYVFTGEGGIDFQTKFGKTPYGVAKATKEVAPTAPVIVLAGNIGKGVNDLYSSTAIDAIFATPEGAKPLKTALADAPIDIAQTAENVARLIKVSHVSN另外，還可以通過基因工程學(xué)的方法將編碼該甘油酸激酶(26)的下述核苷酸序列(42)(對應(yīng)于序列表的序列號38)整合到其它乳酸菌等，由此獲得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本發(fā)明還包括與下述(42)所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴(yán)格條件下與編碼具有甘油酸激酶活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列和下述(42)所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有甘油酸激酶活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列。 (42)ATGAAATTTGTAATTGCTCCAGATTCATTTAAAGGCGGATTAACAGCAAAAGAAGCAGCAAATGTGATGGCAGAAGGAATCAAAAGAGTGTTTCCGAATGCCGAGTATGCTTTAGTTCCAATGGCTGATGGAGGAGAGGGGACTGTTCAATCCTTAGTTGATGCGACTAACGGTCAAAAAATGATTGCTAAAGTCCACAACCCATTAAATAAATTAGTTAATGCTGAGTACGGAATATTAGGTGATGGGGAAACGGCAGTGATTGAGATGGCGGCGGCAAGTGGCCTTCAATTTGTTAAT
AAGGAGACTGCGAACCCGCTTATTACAACTACATATGGTACCGGCGAGTTAATTAAGGATGCTCTTGACCATAACATTAAAAAAATAATTATTGGAATTGGTGGAAGTGCAACCGTTGATGGCGGAGCGGGGATGGCCCAAGCACTTGGAGCACGTTTATTGGATGCTGATAATCATGAAATTGGTTTAGGCGGTGGTGAGTTAGCAAGTTTAGAGCAAGTAGATTTTGGAGGATTAGATCCTCGCTTAAAAAATGTAGATATTCAGATTGCATCAGACGTAACCAACCCATTAACAGGAAAAAATGGGGCAGCCCCAGTATTTGGCCCGCAAAAAGGAGCTGATGAAGAAATGGTGAACATCTTGGACAAAAATCTTCATCATTATGCCCGAAAAATAGTTGCAGCTGGTGGGCCAGACGTTGAACAAACGGCAGGTGCAGGGGCAGCCGGTGGTTTAGGAGCCGGGTTGATAGCATTTACCGGTGCGACAATGAAGCGAGGAGTAGAATTAGTGATTGAAGCAACTCAACTACAAAAAAAGGCAGTTGGCGCTGATTATGTTTTTACTGGTGAAGGAGGAATTGATTTCCAGACTAAATTTGGTAAAACGCCATATGGAGTCGCTAAGGCAACTAAAGAGGTGGCTCCAACTGCTCCGGTAATTGTGTTGGCTGGAAATATTGGTAAAGGCGTAAATGATCTATATTCATCCACGGCCATTGATGCAATTTTTGCAACTCCTGAAGGGGCTAAACCATTAAAAACAGCATTAGCAGATGCACCTATTGATATTGCTCAAACAGCGGAAAACGTTGCACGTTTAATTAAAGTGAGTCATGTTAGTAATTAA本發(fā)明乳酸菌優(yōu)選具有由下述式(27)所示的氨基酸序列(對應(yīng)于序列表的序列號39)或該氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的甘油激酶(glycerolkinase)。該甘油激酶為圖1中所示的GK(5)，可以高效地代謝由本發(fā)明脂肪酶的作用而產(chǎn)生的甘油。這里所說的1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價(jià)的序列，依然保持甘油激酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(27) L SEQQYIMAIDQGTTSSRAIIFDHDGNKVAISQQEFPQYFPQPGWVEHDPLEIWDSVQSVISNVMIKSQIKPYKIAAIGITNQRETTVIWDRHTGKPIYNAIVWQSKQTSDIAEQLIKDGYKDMIHQKTGLVIDSYFAATKIKWILDHVPGAREKAAKGDLMFGTIDTffLLffNLSGRRVHATDVTNASRTMLFNIHTLDffDQDILDLLDIPQSLLPVVKPSSAIYGYTGDYHFYGVQIPIAGIAGDQQAALFGQAAYDKGSIKNTYGTGAFIVMNTGLKPTLSDNGLLTTIAYGLDGQTHYALEGSIFVAGSAVQWLRDGLKMFDKASESEQMAVDAKTTGGVYVVPAFTGLGAPYffDQEVRGAMFGLTRGTERGHI IRATLEAIAYQTKDVVDTMVKDTQLPLTALTVNGGASRNNFMMQFQADILQTPIKRAAMEETTALGAAFLAGLAVDFffEDQDELRKLSRIGDQFDPQMDPQKAADLYRGffQRAIAAAQFYGKD另外，還可以通過基因工程學(xué)的方法將編碼該甘油激酶(27)下述核苷酸序列G3)(對應(yīng)于序列表的序列號40)整合到其它乳酸菌等，由此獲得甘油分解性高的乳酸菌。 另外，本發(fā)明還包括與下述^幻所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴(yán)格條件下與編碼具有甘油激酶活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列和下述^幻所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有甘油激酶活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列。(43)TTGAGTGAACAACAATATATCATGGCGATTGACCAGGGAACGACGAGCTCACGGGCGATTATCTTTGACCATGACGGAAATAAGGTTGCGATCAGTCAGCAGGAATTTCCCCAATACTTCCCGCAGCCGGGGTGGGTTGAACATGATCCTCTAGAGATTTGGGATAGCGTTCAATCAGTGATTTCAAATGTAATGATTAAGTCCCAGATCAAGCCCTATAAGATTGCGGCAATTGGGATTACTAACCAACGGGAGACGACGGTTATTTGGGATCGCCATACCGGTAAGCCGATTTATAACGCAATTGTCTGGCAATCGAAGCAAACGAGCGACATCGCCGAACAATTGATTAAAGATGGTTATAAGGATATGATCCACCAGAAGACTGGCTTGGTGATTGATTCGTATTTCGCGGCCACTAAGATCAAGTGGATCCTTGACCATGTTCCTGGTGCCCGGGAAAAAGCAGCAAAGGGAGACTTGATGTTTGGGACTATCGATACTTGGTTACTATGGAATTTATCGGGACGGCGGGTCCACGCAACGGATGTGACCAATGCCAGCCGGACGATGCTTTTTAATATCCATACCCTCGACTGGGATCAAGATATCCTTGACCTGCTTGATATTCCCCAGTCGCTTTTGCCAGTAGTAAAGCCAAGTTCAGCCATTTACGGTTATACTGGCGACTACCACTTCTATGGGGTGCAGATTCCAATTGCCGGGATTGCAGGTGACCAACAAGCAGCCCTCTTTGGTCAAGCAGCCTATGATAAAGGTTCAATCAAGAACACCTATGGGACTGGAGCCTTCATCGTCATGAATACGGGACTAAAACCCACGCTTTCGGATAACGGCTTGTTGACGACGATTGCGTATGGCCTGGACGGGCAAACTCATTACGCGCTTGAAGGAAGTATCTTTGTGGCCGGTTCTGCCGTTCAATGGTTGCGGGATGGTCTCAAGATGTTTGATAAGGCAAGCGAGTCCGAACAAATGGCTGTCGATGCCAAGACAACTGGCGGCGTTTATGTCGTCCCCGCCTTTACAGGATTAGGCGCACCGTACTGGGATCAAGAAGTGCGGGGCGCAATGTTTGGCCTTACCCGTGGAACTGAACGGGGACATATCATCCGTGCAACTTTGGAAGCCATTGCCTACCAGACCAAAGATGTTGTCGATACGATGGTCAAGGACACCCAATTACCACTAACAGCACTAACGGTTAACGGGGGCGCTTCACGGAACAACTTCATGATGCAGTTCCAGGCCGATATCTTACAAACGCCAATCAAGCGGGCAGCAATGGAAGAGACAACCGCGCTGGGAGCAGCCTTTCTCGCTGGATTGGCCGTTGATTTCTGGGAAGACCAGGATGAGTTACGGAAGCTATCACGGATTGGCGACCAGTTTGATCCACAAATGGATCCGCAAAAGGCAGCTGACTTGTATCGGGGATGGCAACGGGCCATTGCAGCTGCGCAGTTTTATGGCAAAGATTAA本發(fā)明乳酸菌優(yōu)選具有由下述式08)所示的氨基酸序列(對應(yīng)于序列表的序列號41)或該氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的甘油-3-磷酸脫氫酶(glycerol-3-phosphate dehydrogenase)。該甘油_3_磷酸脫氫酶為圖1中所示的GPD(6)，可以高效地代謝由本發(fā)明脂肪酶的作用而產(chǎn)生的甘油。這里所說的 1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價(jià)的序列，依然保持甘油-3-磷酸脫氫酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序列。(28) M AEKIAVLGAGSffGSVLANMLTENGHDVTLWSRNEEQVKQLNTEHTNPRYMKDFVYSTNL
TATTDMKKAVKGASVVLIVIPTKGLREVAKQLNAILTELHQKPLVIHATKGLEQNTYKRPSEMLSEDISPENRQAIVVLSGPSHAEDVAIKDMTAVTAACEDLASAKKAQKLFSNSYFRVYTNDDVIGAEFGAALKNI IAIGAGAIQGLGYHDNARAALITRGLAEIRRLGVAFGANPMTFlGLSGVGDLVVTATSKNSRNffRAGYQLGQGKKLQDVIDNMGMVIEGVYTTKAAYELSRKRQVQMPITEALYRVLYEGEDIKTAISQLMDRDLTSENE另外，還可以通過基因工程學(xué)的方法將編碼該甘油-3-磷酸脫氫酶(28)的下述核苷酸序列(44)(對應(yīng)于序列表的序列號42)整合到其它乳酸菌等，由此獲得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本發(fā)明還包括與下述(44)所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴(yán)格條件下與編碼具有甘油-3-磷酸脫氫酶活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列和下述(44)所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有甘油-3-磷酸脫氫酶活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列。(44)ATGGCAGAAAAAATTGCTGTTTTAGGTGCTGGTTCGTGGGGCAGTGTTTTAGCAAACATGCTTACAGAAAATGGCCACGATGTAACATTATGGTCTCGTAATGAGGAACAAGTTAAGCAATTAAATACTGAACATACAAATCCTCGCTATATGAAAGATTTTGTTTATTCTACTAACTTAACAGCAACAACGGACATGAAAAAAGCTGTTAAGGGTGCCAGTGTGGTCCTGATTGTAATTCCAACAAAGGGTCTTCGTGAAGTTGCTAAGCAATTAAATGCAATTTTGACTGAATTACATCAAAAACCGCTAGTTATTCACGCAACGAAAGGCTTAGAACAAAATACTTATAAGCGGCCATCGGAAATGCTTAGCGAAGATATTTCTCCTGAAAACCGTCAGGCAATTGTTGTTTTATCAGGTCCGAGTCATGCTGAAGATGTGGCGATTAAAGATATGACAGCTGTAACCGCAGCTTGTGAGGACCTGGCCAGTGCTAAAAAGGCGCAGAAGTTATTTAGTAATTCTTATTTCCGTGTGTACACTAATGACGATGTAATTGGTGCCGAATTTGGCGCAGCCTTAAAGAACATTATTGCAATTGGTGCTGGAGCTATTCAGGGACTTGGTTATCATGATAATGCTCGGGCAGCGTTAATTACTCGTGGACTTGCAGAAATTCGCCGATTGGGAGTTGCTTTTGGTGCCAACCCGATGACTTTTATTGGTCTTTCTGGGGTTGGTGACCTTGTTGTTACTGCTACCAGTAAAAATTCTCGAAATTGGCGTGCTGGCTATCAATTGGGGCAAGGAAAAAAGCTTCAAGATGTAATTGATAATATGGGAATGGTTATCGAAGGTGTCTATACTACCAAAGCCGCTTATGAATTAAGTCGTAAACGACAAGTACAGATGCCAATTACCGAAGCTCTTTACCGTGTTTTGTATGAAGGCGAAGATATTAAAACTGCAATTTCTCAATTAATGGACCGAGATCTTACTTCAGAAAACGAATAA本發(fā)明乳酸菌優(yōu)選具有由下述式(29) (31)任一個(gè)所示的氨基酸序列(對應(yīng)于序列表的序列號43、45、47)或該氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的磷酸丙糖異構(gòu)酶(trios印hosphate isomerase)。該磷酸丙糖異構(gòu)酶為圖 1中所示的trios印hosphate isomerase (15)，可以高效地代謝由本發(fā)明脂肪酶的作用而產(chǎn)生的甘油。這里所說的1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列是指與這些原本的序列等價(jià)的序列，依然保持磷酸丙糖異構(gòu)酶活性的序列。作為這種氨基酸序列可以舉出顯示80%以上同源性的序 列。
(29) MRKPFIAANWKMHKNVQESVEFVDAIKGKL
PDPQEVEVGIAAQAFALPSMVQAADDSGLK
IIAQNAAAEYSGAFTGEISLRGLADAGVSY
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(30) MRKPFIIANWKMNKNVHESVAFVKAIKEKL
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(31)MRVPIIAGNWKMHKDVQEAVSFIEKVKNQL
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ETFLQLVHH
另外，還可以通過基因工程學(xué)的方法將編碼該磷酸丙糖異構(gòu)酶0 -(31)
述核苷酸序列G5) (47)(對應(yīng)于序列表的序列號44、46、48)整合到其它乳酸菌等，由此獲得甘油分解性高的乳酸菌。另外，本發(fā)明還包括與下述0 G7)任一個(gè)所示的核苷酸序列的同源性為80%以上、且在嚴(yán)格條件下與編碼具有磷酸丙糖異構(gòu)酶活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列和下述0 G7)任一個(gè)所示的核苷酸序列雜交、且編碼具有磷酸丙糖異構(gòu)酶活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列。(45)ATGCGCAAACCCTTTATTGCTGCTAATTGGAAGATGCATAAGAATGTCCAAGAATCGGTTGAATTTGTGGATGCAATTAAAGGAAAGCTACCAGATCCGCAAGAAGTTGAAGTCGGAATTGCAGCCCAAGCTTTTGCATTACCCAGTATGGTTCAAGCCGCTGATGATTCAGGATTAAAGATAATCGCGCAAAACGCGGCGGCTGAATATTCGGGAGCTTTCACTGGTGAAATTAGCTTACGAGGTTTAGCTGACGCCGGTGTTTCATATGTAATGTTAGGACATATTGAACGGCGCCATTTATTCCACGAGGATAATGAGTTGGTTAATCGGAAAGTGTTGGCAGCCCTTCAAATGGGA
GTTACCCCGATAATTTGTACGGATGAAACGATGGTCCAGAAAGAAGTTAATGGTGAAATTCACTACGTTTTCCAGCAATTGATGAGCGTATTGAGGGGCGTTTCTCTTGATCAAATTAAAAATGTAGTTGTTTCCTATGAACCAAGTTGGGCAGTTGGATATGGTCAGCATGCTAATCCAGTTCTTGCTGAAGAAGGATGCCGTCAAATTCGGCGAACGATTGCTGATAACTACACTTATGAGATTGCTGATAAGATCAGGATTCTTTATGGGGGCAGTGTCAATCCAGATAATATCGGAATGATTATGAACAAGCCAGATGTAGATGGGGTATTAATCGGTCGGGCAAGTTTAGATGTTGATAATTTTTTGCGAATGGTCAATTATTTAAAAAATGATCAAGAAAAATAA(46)ATGCGCAAACCGTTTATTATTGCGAACTGGAAAATGAATAAAAACGTTCATGAATCTGTT GCGTTTGTTAAAGCAATTAAAGAAAAGCTCCCGGCAGATAAAGAAATTGGGATCGCCGCGCAAGCAGTTTCGCTATATAACATGAAAAAAGTGGCGAGCTCTTCCAACTTACAAATTATTGCTCAAAATGCATCTGCTGAGTTAGAGGGACCATATACTGGAGAAATTAGCATGCGAAGTTTAGCAGATGCGGGCGTGACATACGTGATGCTAGGCCATTTAGAGCGCCGACGCCTTTTTAACGAGAGTAATGATTCAATTAATCAAAAAGTTTTAGCAGCCCTCAATGCTGGTATTATTCCAATCATTTGTACGGATGAAGAGATGGTCCAAACAGAAGTTAACGGACAAATTCATTATGTATTTCGCCAACTAAAAAGCGTCCTTAAAGGGGTACCAGCTAATAAACTATCACAGATTGTTATTTCGTATGAACCAAGTTGGGCCGTTGGGAGCACGCATCAAGCAAATCCAGACATTGCGGAAGAGGGATGTCAGGCAATTCGTCAAAGCCTGGTTGAAATGTATGGTAATGAGATTGGCGAGCAAGTCCGAATACTCTATGGTGGCAGCGTTAATCCCGAGAACATTGGTCAAATTATGAGTAAACCAAATGTTGATGGGGCGCTAATCGGTCGCGCAAGTCTCGAGATTGAAAGTTTCTTACAAATGATTAATTATATCGAATTAGCGAGCAAGCAGAAGTTACAGGTAATTTAG(47)ATGAGAGTACCGATTATTGCTGGTAATTGGAAAATGCATAAGGATGTACAAGAAGCTGTCTCTTTTATCGAAAAAGTAAAAAATCAGCTTCCGCCTGCCGACCAACTTGAAACAGCAATTGCTGCTCCTACTCTTTGTTTAGTACCAATGGTTAAAGCAGCTGAAGAATCCCCGTTAAAAATAATGGCAGAAAACTGCTACTATAAGAATGAGGGAGCTTATACTGGTGAAACAAGTCCATATGCTTTATACCAAGCAGGAATCCATCATGTGATTTTAGGCCATTCTGAACGCCGAACTTACTTTAATGAAACTGATGAATTAATTAATAAAAAAGTGAAGGCAGCATTAGTAAATGGGTTATGTCCGATTGTTTGTTGTGATGATACTATGCGTCGACGAGTTGCTGGAAAGAAAGTTCATTGGGTGGTGAGCCGAATTCTCGCTGACCTTCATGGATTGACCAATGACGAAATTTGTCATGTTACGGTTGCTTATGAACCAAGTTGGGCGATTGGAACAGGCGAGAGTGCTGATCCAGAACAAGCGGCGGAAGGTTGTTACCTTATTCGGCAAACGATTAGTGATATGTATGGCGATGAAGTTGCAAATAACGTTCGAATTCTCTATGGCGGAAGTGTGACAACTTCTAATATCAATGCACTAATGGCAAAAAATGATATTGATGGTGTTTTAGTCGGAGCGGCGAGCTTAAATCCAGAAACATTTTTACAATTAGTTCACCATTAG以上說明的本發(fā)明乳酸菌可以根據(jù)常規(guī)方法對屬于羅伊氏乳桿菌的微生物進(jìn)行基因分析而獲得。例如，通過對多個(gè)屬于羅伊氏乳桿菌的微生物，研究是否存在與編碼脂肪酶⑴ ⑶的下述基因(13) (15)(分別對應(yīng)于序列表的序列號2、4、6)同源性高的核苷酸序列，從而可以獲得目標(biāo)的本發(fā)明乳酸菌。(13)ATGGTGAAATTGATGACAATACACGAATTAGCAAATAACCCAACGTTAAGCGGCCAAGTACGCTTGATTGAAAATATTGTTTATGGTGCGATGGATGGTGAGGCATTACATATGTCGATC
TTAGCACCGTGGACGCAACGTTTCCCGAAACAATATCAAACTGAACCTCGACCATTGATTGTCTTTGTTCAAGGAAGCTCGTGGCGAACACCAAAAATGGGAGAAGAAATTCCACAACTGGTTCAATTTGTTCGGGCCGGTTATATTGTAGCGACTGTTCAACACCGTAGTTCAATTGATAGCCACCCATTTCCTGCCTTTTTGCAAGATGTTAAGACTGCCATTCGTTTCTTACGGGCCAATGCGCAAAAATATGCAATTGATCCGCAACAGGTTGCAATTTGGGGGACTTCCTCTGGAGCCAATGCGGCAATGCTAGTCGGCTTAACGGGTGATGATCCGCGCTATAAAGTTGACCTTTATCAAGACGAATCGGATGCAGTAGATGCTGTGGTTAGTTGTTTTGCCCCAATGGACGTGGAGAAGACGTTTGAGTATGATGCTAATGTTCCAGGAAATAAGTTACTGCAATATTGCTTATTAGGGCCTGATGTATCAAAGTGGCCAGAAATTGAAAAGCAAATGAGTCCCTTATATCAAGTCAAAGATGGGCAAAACTACCCACCATTCTTATTGTTCCACGGAGATGCTGATAAAGTTGTTCCATATGAACAGATGGAAAAAATGTATATGCGGTTGAAGGATAATGGAAATTCTGTTGAAGCGTACCGGGTTAAGGGTGCGAACCATGAACGAGATTTCTGGAGTCCAACAATTTATAATATTGTGCAGAAGTTTCTTGGCGATCAATTTAAATAA (14)TTGATTTATGTTTTAAAAGATTTATGTAATACTATTGCTGAAGTCTATGGCAAAAGTATTTTAAAAGGAGTTTTTATCATGAAACATACGCTTAAAGTTGATCAAGTACGTGACGGTTTATGGCTAGATTCAGATATTACGTATACGCAAGTTCCTGGATGGCTTGGTAATACAACGCGAGATTTGAAGCTTTCAGTCATTCGACATTTTCAAACTAATGATGATACACGTTATCCAGTAATTTTTTGGTTTGCTGGTGGCGGCTGGATGGATACTGACCACAATGTTCATCTGCCGAATTTGGTTGATTTTGCTCGGCATGGTTACATTGTTGTCGGCGTCGAATATCGTGATAGCAACAAAGTTCAGTTTCCTGGGCAATTAGAAGATGCTAAGGCTGCTATTCGTTATATGAGAGCTAATGCCAAGCGCTTCCAAGCTGATCCTAATCGGTTTATTGTGATGGGAGAATCGGCCGGTGGACATATGGCAAGTATGCTAGGTGTTACTAACGGCCTTAACCAATTTGACAAAGGTGCTAATTTAGATTACTCCAGTGATGTTCAAGTAGCAGTTCCTTTTTATGGTGTGGTTGATCCCTTAACCGCTAAAACAGGAAGTGCATCAAACGATTTTGATTTTGTTTACCGTAACTTGCTTGGTGCTGAGCCTGAAAACGCTCCTGAGCTTGATTCTGCCGCAAATCCCCTCACCTATGTAAATTCTAATTCTACGCCCTTTCTTATCTTTCATGGGACAGAAGATGTCGTTGTTCCAATTAAAGATAGTGAAAAGCTTTATGATGCATTAGTTGAAAACAACGTTCCTGCTGAATTATACGAAATCGAAGGCGCAAGTCACATGGATGTGAAATTCCTTCAACCACAGGTATTTAAGATTGTGATGGACTTTTTAGATAAGTATTTAACTCGGTCATAG(15)ATGGAAATTAAAAGTGTTAACTTAGATCAACCATATTCGTCTCTAGATATTTATCATAGTAATACTGATAAAGCTTTGCCCGGTCTTGTTATTTTACCAGGAGGCAGTTATAACCAGATCATGGAGCGAGATTCTGAACGGGTGGCATTAACGTTTGCAACCCATGCATGGCAAACATTTGTTGTACGATATCCGGTAGTTGAGCATAAGAATTATGAAGAAGCCAAAATAGCGGTTCACCAAGCATTTGAATATATCGTCAACCATGCAGCTGAATTAGATGTTGACGCTGATCGGTTGGGGATTATTGGCTTTTCTGCAGGAGGCCAAATTGCCGCTGCATATAGTAATGAAAAACTAACACACGCTAGATTCGCCGCATTAGGATATCCTGTTATTCAACCCTTGATTGATGAACGTATGGGGGTTACAACAGAGAATGTAGCGAAATTAGTAAATCCGCAAACACCACCAACCTTTATGTGGGGATCGGCAAAAGATGAACTGACTCCCTTTGTTGATCACCTTCAAGTATATGCAGATGCGTTAATTAAGAATGATATTCCATATGAATTACATGAGTTTGGCACTGGGGGACAT
GGAATCGCGTTAGCTAACGAATATACTGGTATTGTTAATAATGATCGGGTAGATAATCATATGGGAAAGTGGTTCCCGCTATTTCTTGAGTGGTTAACTGAACTGAATTTAATTTAG本發(fā)明中，所謂的“嚴(yán)格條件”可以列舉如下條件例如在含有6 X SSC (1 X SSC的組成0. 15M NaCl、0. 015M 的檸檬酸鈉、pH7. 0) ,0. 5% SDS、5XDenhardt、100 μ g/mL 的熱變性鮭魚精子DNA的溶液中，與探針一起在50 65°C的溫度下保存一晚使其雜交。進(jìn)而，具有運(yùn)載蛋白基因(4)的本發(fā)明乳酸菌，具有編碼甘油分解酶亞基的基因 (9) (11)、編碼甘油分解酶的基因(32) (38)、編碼醛脫氫酶的基因(39) (41)、編碼甘油酸激酶的基因(42)、編碼甘油激酶的基因(43)、編碼甘油-3-磷酸脫氫酶的基因(44)、 編碼磷酸丙糖異構(gòu)酶的基因(45) (47)或編碼腸道黏附性蛋白質(zhì)的基因(12)的本發(fā)明乳酸菌，也可以與上述同樣地獲得。作為上述本發(fā)明乳酸菌的代表性菌，可以舉出羅伊氏乳桿菌JCM1112T，其為理化學(xué)研究所的標(biāo)準(zhǔn)株。本發(fā)明的抗肥胖劑可以通過將上述本發(fā)明乳酸菌制成可以口服且以活的狀態(tài)到達(dá)腸道的活菌劑而調(diào)制。對于其劑型并無特別限定，例如可以為粉末劑、顆粒、片劑、膠囊劑等固體，凝膠、糊劑等半固體狀，懸浮液，糖漿等液體狀。這些各劑型可以通過制藥領(lǐng)域中公知的方法制得。配合在上述抗肥胖劑中的本發(fā)明乳酸菌可以應(yīng)用公知的乳酸菌培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)。作為該培養(yǎng)方法，可以根據(jù)常規(guī)方法將本發(fā)明乳酸菌進(jìn)行液體培養(yǎng)，直接利用所得的培養(yǎng)物，或者通過離心分離等方法從該培養(yǎng)物中收集菌體后使用，還可以將培養(yǎng)物冷凍干燥制成粉末狀后使用。作為固體狀的本發(fā)明抗肥胖劑的通常的制造方法，可以舉出將本發(fā)明乳酸菌與水、淀粉、微晶纖維素、面粉、砂糖等載體一起配合，制成所需形態(tài)的方法。上述載體也是公知的，可以根據(jù)使用形態(tài)進(jìn)行適當(dāng)選擇后使用。更具體地說，可以將通過常規(guī)方法培養(yǎng)獲得的本發(fā)明乳酸菌的菌體制成冷凍干燥粉末，將其與砂糖混合，從而調(diào)制粉末劑。另外，還可以將本發(fā)明乳酸菌的菌體與適當(dāng)?shù)钠瑒┯幂d體混合，根據(jù)常規(guī)方法進(jìn)行壓片，獲得片劑。而且，還可以將本發(fā)明乳酸菌的濕菌體懸浮在糖漿中制成糖漿劑。調(diào)制本發(fā)明的抗肥胖劑時(shí)， 還可以根據(jù)需要含有其它成分，例如其它微生物或有效成分、或者甜味料、香料、著色劑等。如此獲得的抗肥胖劑的給予量可以考慮對象的身體狀況、例如健康狀態(tài)、體重、年齡、病史、所使用的其它成分等適當(dāng)?shù)貨Q定，一般來說，作為本發(fā)明乳酸菌的菌數(shù)，一個(gè)成人大致為IO8 IO9CFU/天左右。使用本發(fā)明乳酸菌調(diào)制抗肥胖飲食品時(shí)，可以利用目前公知的乳酸菌的培養(yǎng)方法制成可以口服攝取的發(fā)酵食品。具體地說，可以制成酸奶等發(fā)酵乳、乳酸菌飲料、發(fā)酵香腸等食品，這些食品的制造可以通過使部分或全部所用乳酸菌采用本發(fā)明乳酸菌來進(jìn)行。另夕卜，還可以形成較多地含有本發(fā)明乳酸菌的形態(tài)，制成健康食品和功能性食品。在調(diào)制該抗肥胖食品時(shí)，當(dāng)然并非僅含有本發(fā)明乳酸菌，還可以含有其它的乳酸菌，另外，還可以添加食品添加劑或調(diào)味品等。本發(fā)明乳酸菌如后述實(shí)施例所示，具有顯著的體重增加抑制效果(瘦身效果)，認(rèn)為其理由如下所示。S卩，如圖1所示，本發(fā)明乳酸菌通過3個(gè)脂肪酶(脂肪酶(1) (3))的作用，將消化道內(nèi)的脂肪成分分解為甘油和脂肪酸。然后，所分解的甘油被本發(fā)明乳酸菌所具有的運(yùn)載蛋白(PduF;(4)的核苷酸編碼)攝入到菌體內(nèi)，進(jìn)而被菌體內(nèi)的甘油分解酶基因 (PduCDE ；由亞基(5) (7)構(gòu)成)代謝，產(chǎn)生羅伊氏素或轉(zhuǎn)變?yōu)楸揪陨淼哪芰吭础Ａ硪环矫?，脂肪酸作為本菌的菌體成分被利用，而不會(huì)被吸收入生物體內(nèi)。而且， (8)的肽具有本發(fā)明乳酸菌固定在人或哺乳動(dòng)物腸道的功能，使本發(fā)明乳酸菌可以穩(wěn)定地在腸道內(nèi)存在一定期間。如上所述，本發(fā)明乳酸菌由于穩(wěn)定地存在于腸道內(nèi)、積極地分解脂肪、且利用或進(jìn)一步分解其代謝物，因此可以抑制脂質(zhì)從腸道被吸收入體內(nèi)、即便攝取通常的飲食也可以預(yù)防肥胖、維持及提高瘦身效果。另外，本發(fā)明的一個(gè)方式包括本發(fā)明乳酸菌用于預(yù)防或治療肥胖癥的應(yīng)用，還包括本發(fā)明乳酸菌用于制造抗肥胖劑的應(yīng)用。進(jìn)而，本發(fā)明的又一個(gè)方式包括以向肥胖癥患者給予本發(fā)明乳酸菌為特征的肥胖癥治療方法，還包括以給予本發(fā)明抗肥胖劑為特征的肥胖癥治療方法。實(shí)施例以下舉出實(shí)施例，更加詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1羅伊氏乳桿菌JCMl 112T的抗肥胖效果試驗(yàn)通過下述材料和方法研究羅伊氏乳桿菌JCM1112T的抗肥胖效果。使用材料和試驗(yàn)方法(1)使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用體重約180 200g的SPF級Wistar系大鼠(8周齡-雄；日本SLC株式會(huì)社)，從放入實(shí)驗(yàn)室開始設(shè)置7天的馴化期，開始實(shí)驗(yàn)。飼養(yǎng)環(huán)境設(shè)定為溫度22士 1°C、濕度 55士5%、照明時(shí)間12小時(shí)(8點(diǎn) 20點(diǎn))，大鼠為1只/籠，利用給水瓶使其自由攝取滅菌蒸餾水、使用給餌器使其自由攝取大鼠用放射線滅菌固體樣品*(CE-2，CLEA Japan Inc.) 0 所使用的飼養(yǎng)器具均使用通過高壓蒸汽滅菌器滅菌的器具。 *飼養(yǎng)繁殖用(粗脂肪4.6%)(2)待測菌液的調(diào)制作為待測菌，使用羅伊氏乳桿菌JCM1112T(理化學(xué)研究所的標(biāo)準(zhǔn)菌、從該所購買) 和鼠李糖乳桿菌(L. rhamnosus)ATCC53103(GG株)。這些待測菌接種于MRS液體培養(yǎng)基 (Oxid)，在37°C下培養(yǎng)一晚，制成預(yù)培養(yǎng)液。將該預(yù)培養(yǎng)液添加到新鮮的MRS液體培養(yǎng)基中達(dá)到量，在37°C下培養(yǎng)18小時(shí)，將其作為待測菌液。(3)待測菌液的給予將上述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為各待測菌給予組和對照組(1組各5只)，對待測菌給予組，將上述待測菌液通過口服給予。待測菌的給予使用探針強(qiáng)制進(jìn)行。給予菌液在使用時(shí)調(diào)制， 給予菌量為每只大鼠109CFU。另外，對對照組給予相同容量的PBS。(4)體重測定和一般癥狀的觀察使用體重計(jì)每天測定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重。每天均觀察一般癥狀。對每個(gè)個(gè)體記錄癥狀，用表現(xiàn)個(gè)體數(shù)來表示觀察到顯著變化的癥狀項(xiàng)目。(5)結(jié)果
圖2示意出分別給予上述乳桿菌屬細(xì)菌的大鼠組和未給予的大鼠組的體重隨時(shí)間增加的狀況。由該圖可知，與未給予組相比，羅伊氏乳桿菌JCM1112T給予組顯著抑制了體重的增加，其程度大于鼠李糖乳桿菌ATCC53103給予組。另外，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的健康狀態(tài)良好是由良好的體重增加的進(jìn)展來顯示的同時(shí)，由各組大鼠的診察來確認(rèn)的。實(shí)施例2羅伊氏乳桿菌JCMl 112T的基因組解析使用下述藥品，通過以下方法從羅伊氏乳桿菌JCM1112T中獲取DNA，進(jìn)行基因組解析。DNA獲取方法(藥品)核裂解液(Wizard基因組DNA純化試劑盒；Promega公司生產(chǎn))生理鹽水50mM EDTA (ρΗ7· 0)50mg/ml溶菌酶溶液(在使用當(dāng)日，用TE緩沖液、0. 25MTris_HCl (pH8. 0)或IOmM Tris-HCl (pH8. 0)/10mMEDTA/0. 5% SDS溶解規(guī)定量的溶菌酶進(jìn)行調(diào)制)2mg/ml EDTA苯酚·氯仿·異戊醇05 24 1)混合液(以下簡稱為“PCI”)氯仿·異戊醇04 1)混合液(以下簡稱為“CIA”)99% 乙醇70% 乙醇TE緩沖液(方法)1.在靜置條件、37°C下培養(yǎng)羅伊氏乳桿菌JCM1112T M小時(shí)，在3500rpm下離心分離所得培養(yǎng)液(50ml) 15分鐘后，利用生理鹽水懸浮。2.在3500rpm下離心分離上述1所得的懸浮液15分鐘，舍去上清，利用5ml 50mM EDTA懸浮。3.在上述2所得的懸浮液中加入200 μ 1 50mg/ml溶菌酶溶液，在37°C下培養(yǎng)60 分鐘。(此時(shí)使用空氣培養(yǎng)箱時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間為2 3小時(shí))4.培養(yǎng)后，在3500rpm下離心分離15分鐘，舍去上清。5.在4所得的沉淀物中加入核裂解液5ml，在80°C下培養(yǎng)10分鐘。6.加入 1 μ 1 2mg/ml RNase A，在 37°C下培養(yǎng) 45 分鐘。7.加入IOml PCI并混合，在:3500rpm下離心分離15分鐘。8.將上清移至新的試管中，再加入IOml PCI并混合。9.共增加3次同樣的操作。(直至變得不能識別蛋白質(zhì)層)10.加入IOml CIA，緩緩混合后，在3500rpm下離心分離15分鐘。(除去苯酚)11.將上清移至新的試管中，進(jìn)行乙醇沉淀。12.將11所得的沉淀物溶解在Iml TE緩沖液中，獲得乳酸菌DNA。基因組解析方法
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對于如上獲得的DNA進(jìn)行結(jié)構(gòu)基因預(yù)測和解析。聯(lián)合使用 GENOMEGAMBLER (Sakiyama, T.，Takami，H.，Ogasawara, N.，Kuhara. S.，Kozuki，T.，Doga, K. ， Ohyama, A. ， Horikoshi， K. ， Anauromated system for genome analysis to support microbial whole-genome shotgun sequencing.，Biosci.Biotechnol. Bichem.，64 670-673. 2000.)、GLIMMER 2. O (Salzberg, SL，Delcher, AL，Kasif，S.，and White, 0.， Microbial gene identification usinginterpolated Markov models. , Nucleic. Acid. Res.，26 :544-548. 1998.)禾P BLAST program blastp (Altschul，SF. Gish，W.，Miller, W.， Myers, EW.，and Lipman，DJ.，Basic local alignment searchtool.，J. Mol. Biol.，215 403-410. 1990)的結(jié)果來進(jìn)行該結(jié)構(gòu)基因預(yù)測等。另夕卜，域結(jié)構(gòu)的解析使用INTERPR0 (Mulder，NJ.，Apweiler, R.，Attwood, TK. , Bairoch, A. , Barrel1, D. , Bateman, A. , Binns, D. , Biswas, Μ. , Bradley, P., Bork, P. , Bucher, P. , Copley, PR. , Courcelle, Ε. , Das, U. , Durbin, R. , Falquet, L. , Fleischmann, W. , Griffiths-Johns, S. , Haft, D. , Harte, N. , Hulo, N. , Kahn, D., Silventoinen, V. , Orchard, SE. , Pagni, Μ. , Peyruc, D,, Ponting, CP. , Selengut, JD., Servant, F. , Sigrist, CJ. , Vaughan, R. , andZdobnov, EM. , The InterPro Database, 2003brings increasedcoverage and new features. , Nucleic. Acids. Res. ,31 315-318. 2003，；http://ffffff. ebj. ac. uk/interpro)進(jìn)行；分子系統(tǒng)樹的制作中使用了 CLUSTALff(Thompson, JD. , Higgins, DG. , and Gibson, TJ. , CLUSTAL W improving the sensitivity of progressivemultiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice. , Nucleic. Acids. Res. ,22 :4673-4680. 1994. ；http://clustalw. Genome, ad. jp/)。進(jìn)而，所使用的DNA和氨基酸序列由National Center ofBiological Information(NCBI,http://www. ncibi. nlm. nih. gov)禾口 KEGG database(Ogata, H. , Goto, S. , Sato, K. , Fujibuchi, W. , Bono, H. , and Kanehisa, Μ. , KEGG :Kyoto Encuclopedia ofGenes and Genomes. , Nucleic, Acids. Res. , 27 :29-34. ,1999. ；http://WWW. genome, ad. jp/kegg/kegg2. html)獲得，乳桿菌屬細(xì)菌的序列草圖由 DOE JOINT GENOME INSTITUTE (JGI ；http://WWW. jgi. doe. gov/JGI_microbial/html/index. html)獲得。根據(jù)以上信息可知，(13) (15)所示的基因分別為編碼脂肪酶的基因、⑷所示的基因?yàn)榫幋a運(yùn)載蛋白的基因、(9)、(10)和(11)所示的基因?yàn)榫幋a甘油分解酶的基因、 (12)所示的基因?yàn)轲じ叫曰?。另外可知?32) (38)所示的基因?yàn)榫幋a甘油分解酶的基因、(39) 所示的基因?yàn)榫幋a醛脫氫酶的基因、基因G2)所示的基因?yàn)榫幋a甘油酸激酶的基因、G3)所示的基因?yàn)榫幋a甘油激酶的基因、G4)所示的基因?yàn)榫幋a甘油-3-磷酸脫氫酶的基因、G5) 07)所示基因?yàn)榫幋a磷酸丙糖異構(gòu)酶的基因。實(shí)施例3甘油分解基因的擴(kuò)增將實(shí)施例2中精制的DNA作為模板，將以下核苷酸序列作為引物，使用下述反應(yīng)液進(jìn)行PCR。PCR條件也示于下。(使用的引物)pduCDE (F)
CACCATGAAACGTCAAAAACGATTTpduCDE (R)AAAAGCTTAGTTATCGCCCTTTAGC(PCR 反應(yīng)液)模板 DNA 1 μ 1KOD-pIus 1 μ 110XK0D-plus 緩沖液5 μ 1dNTP(各 2mM) :5μ 1引物(20mm)各1μ 1MgS04(25mm) :2μ 1去離子水(D.W.) :;34μ 1(PCR 條件)(1)在94°C下保持3分鐘。(2)在94°C下保持15秒鐘。(3)在 56 0C (Tm)下保持 30 秒鐘。(4)在68 V下保持3分30秒鐘。(5)將⑵ (4)進(jìn)行30個(gè)循環(huán)。(6)在4 °C下保存實(shí)施例4羅伊氏乳桿菌來源的脂肪酶基因和黏附性基因的擴(kuò)增除了將引物換成下述引物之外，與實(shí)施例3同樣地進(jìn)行PCR，擴(kuò)增脂肪酶基因和黏附性基因。(使用的引物)脂肪酶(1)5， -ATGGTGAAATTGATGACAAT5， -TTATTTAAATTGATCGCCAA脂肪酶O)5' -TTGATTTATGTTTTAAAAGA5， -CTATGACCGAGTTAAATACT脂肪酶⑶5， ATGGAAATTAAAAGTGTTAA5， -CTAAATTAAATTCAGTTCAG黏附性基因5’ -ATGTTCGGTCACGATGGCCG5， -TCAAATTTCAGAAGGATCAT產(chǎn)業(yè)實(shí)用性由使用了作為本發(fā)明乳酸菌代表的羅伊氏乳桿菌JCM1112T的上述實(shí)施例的結(jié)果可知，通過該微生物的給予，可以抑制體重的增加，而不損害實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的健康、尤其是對營養(yǎng)攝取沒有限制。
因此，僅攝取利用了本發(fā)明乳酸菌的抗肥胖劑和抗肥胖飲食品，不需要特殊治療、 處置即可預(yù)防肥胖、獲得瘦身效果。通過利用公知的方法將編碼由本發(fā)明乳酸菌發(fā)現(xiàn)的甘油分解酶亞基的基因和編碼腸道黏附性蛋白質(zhì)的基因整合在其它乳酸菌中，可以獲得甘油分解性高的乳酸菌和在腸道內(nèi)的停留時(shí)間長的乳酸菌，可以有效地用于其它有用的乳酸菌改性中。
權(quán)利要求
1.屬于鼠李糖乳桿菌的微生物用于生產(chǎn)用于預(yù)防或治療肥胖癥的抗肥胖劑的用途，其中，所述抗肥胖劑以屬于鼠李糖乳桿菌的微生物為有效成分，所述屬于鼠李糖乳桿菌的微生物為鼠李糖乳桿菌ATCC53103。
2.屬于鼠李糖乳桿菌的微生物用于制備用于預(yù)防或治療肥胖癥的抗肥胖飲食品的用途，其中，所述抗肥胖飲食品以屬于鼠李糖乳桿菌的微生物為有效成分，所述屬于鼠李糖乳桿菌的微生物為鼠李糖乳桿菌ATCC53103。
全文摘要
本發(fā)明提供一種抗肥胖劑，其以屬于羅伊氏乳桿菌的微生物為有效成分，該微生物產(chǎn)生由序列表1、3、5所示的氨基酸序列或該氨基酸序列中1個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失、置換或增加的氨基酸序列所表示的脂肪酶。該抗肥胖劑可以在攝取正常飲食的情況下，防止成為肥胖很大原因的脂質(zhì)被吸收到體內(nèi)。
文檔編號A61K35/74GK102225078SQ20111015096
公開日2011年10月26日 申請日期2006年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月26日
發(fā)明者政岡俊夫, 森田英利, 鈴木武人 申請人:內(nèi)斯特克有限公司