專利名稱：貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒凍干疫苗的凍干保護(hù)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒凍干疫苗的凍干保護(hù)劑，具體的說(shuō)是采用一定比例的牛血白蛋白、甘露醇、蔗糖、右旋糖苷、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、維生素C，兩性霉素作為凍干保護(hù)劑，使貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒凍干疫苗的保質(zhì)期達(dá)到2年。
背景技術(shù)：
貓泛白細(xì)胞減少癥是貓細(xì)小病毒引起的貓的一種急性、致死性傳染病，其特征是高熱、嘔吐、出血性腹瀉和造血系統(tǒng)抑制性白細(xì)胞減少，是貓的常見病的一種，其危害性很大。貓泛白細(xì)胞減少癥病毒(Feline Panleukopenia Virus，F(xiàn)PV)又稱貓細(xì)小病毒、貓瘟病毒、貓傳染性腸炎病毒。在自然條件下，該病毒感染貓、虎、豹、熊、熊貓、鼠、鼬等動(dòng)物，其中以幼貓最易感。目前尚無(wú)特效的治療藥物，主要靠進(jìn)口疫苗進(jìn)行預(yù)防，價(jià)格比較昂貴，疫苗供應(yīng)國(guó)產(chǎn)化迫在眉睫，在開發(fā)弱毒疫苗的過(guò)程中，本發(fā)明選擇適宜的凍干保護(hù)劑，使疫苗的保質(zhì)期延長(zhǎng)至2年，且在2-8°C儲(chǔ)存和運(yùn)輸。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒凍干疫苗的凍干保護(hù)劑配方，其特征在于凍干保護(hù)劑的主要組分重量百分比如下:牛血白蛋白0.3%、甘露醇3%、蔗糖2%、右旋糖苷1%，磷酸氫二鉀 0.13%、磷酸二氫鉀0.045%,維生素C0.5%，兩性霉素0.0625%,水為余數(shù)。生產(chǎn)步驟如下:
1、從貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒株標(biāo)準(zhǔn)株分別分離的弱毒株(FPV1)，經(jīng)系統(tǒng)鑒定，并在F81貓腎細(xì)胞上培養(yǎng)，篩選擴(kuò)充為種毒。FPVl在-80°C保存，TCID5tl不低于10_5，HA價(jià)彡512，對(duì)敏感斷乳小貓經(jīng)口服或腹腔接種，呈一過(guò)型無(wú)癥狀體征(血液白細(xì)胞減少到8000ml以下)，但不死亡，種毒無(wú)菌。2、細(xì)胞培養(yǎng):F81按常規(guī)從_196°C的液氮罐內(nèi)取出復(fù)蘇，生長(zhǎng)液內(nèi)含1%L_谷氨酰胺、10%犢牛血清的MEM、維持液內(nèi)含5%犢牛血清，并補(bǔ)加1%丙酮酸鈉溶液，初復(fù)蘇的F81采用小方瓶和克氏瓶靜置培養(yǎng)，取10000ml血漿立瓶用作轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。3、擴(kuò)增毒液:將制備好的細(xì)胞液分裝于立瓶置于血漿立瓶中采用同步接毒(轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)時(shí)轉(zhuǎn)速為8次/h)，小牛血清< 2%，以維持液繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)3-4d，當(dāng)出現(xiàn)75%細(xì)胞病變時(shí)振蕩后取毒液收獲。收獲的細(xì)胞毒液凍融三次，HA價(jià)應(yīng)3 1:128，于-301:保存。4、凍干前準(zhǔn)備:將0.3%牛血白蛋白、3%甘露醇、2%蔗糖、1%右旋糖苷、0.13%磷酸氫二鉀、0.045%磷酸二氫鉀、0.5%維生素C、0.0625%兩性霉素按量加入93%三蒸水中混合搖勻，以孔徑0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌；加入等量病毒液，分裝，每瓶分裝Iml (每毫升含100最小免疫量)，轉(zhuǎn)入冷凍干燥程序。5、疫苗凍干:將分裝好的西林瓶于-35 _40°C預(yù)冷凍3— 4 h再于擱板溫度-30 -32°C，真空度10 Pa下，干燥8— 9 h。待制品完全成型后，使擱板溫度逐漸升至32°C，真空度10 Pa下再干燥2 3 h，干燥結(jié)束得到乳白色海綿狀疏松團(tuán)塊，易于脫壁。
其優(yōu)點(diǎn)在于:通過(guò)選擇適宜的凍干保護(hù)劑，疫苗的性狀、含水量、溶解性、效價(jià)均符合《中華人民共和國(guó)獸藥典》第三部要求，且疫苗的保質(zhì)期為2年。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明旨在提供一種貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒凍干疫苗的凍干保護(hù)劑配方，其特征在于凍干保護(hù)劑的主要組分重量百分比如下:牛血白蛋白0.3%、甘露醇3%、蔗糖2%、右旋糖苷1%、磷酸氫二鉀0.13%、磷酸二氫鉀0.045%、維生素C 0.5%、兩性霉素0.0625%、水為余數(shù)。生產(chǎn)步驟如下:
1、從貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒株標(biāo)準(zhǔn)株分別分離的弱毒株(FPV1)，經(jīng)系統(tǒng)鑒定，并在F81貓腎細(xì)胞上培養(yǎng)，篩選擴(kuò)充為種毒。FPVl在-80°C保存，TCID5tl不低于10_5，HA價(jià)彡512，對(duì)敏感斷乳小貓經(jīng)口服或腹腔接種，呈一過(guò)型無(wú)癥狀體征(血液白細(xì)胞減少到8000ml以下)，但不死亡，種毒無(wú)菌。2、細(xì)胞培養(yǎng):F81按常規(guī)從_196°C的液氮罐內(nèi)取出復(fù)蘇，生長(zhǎng)液內(nèi)含1% L-谷氨酰胺、10%犢牛血清的MEM、維持液內(nèi)含5%犢牛血清，并補(bǔ)加1%丙酮酸鈉溶液，初復(fù)蘇的F81采用小方瓶和克氏瓶靜置培養(yǎng)，取10000ml血漿立瓶用作轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。3、擴(kuò)增毒液:將制備好的細(xì)胞液分裝于立瓶置于血漿立瓶中采用同步接毒(轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)時(shí)轉(zhuǎn)速為8次/h)，小牛血清< 2%，以維持液繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)3-4d，當(dāng)出現(xiàn)75%細(xì)胞病變時(shí)振蕩后取毒液收獲；收獲的細(xì)胞毒液凍融三次，HA價(jià)應(yīng)> 1:128，于-301:保存。4、凍干前準(zhǔn)備:將0.3%牛血白蛋白、3%甘露醇、2%蔗糖、1%右旋糖苷、0.13%磷酸氫二鉀、0.045%磷酸二氫鉀、0.5%維生素C、0.0625%兩性霉素按量加入93%三蒸水中混合搖勻，以孔徑0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌；加入等量病毒液，分裝，每瓶分裝Iml (每毫升含100最小免疫量)，轉(zhuǎn)入冷凍干燥程序。

5、疫苗凍干:將分裝好的西林瓶于-35 -40°C預(yù)冷凍3— 4 h再于擱板溫度-30 -32°C，真空度10 Pa下，干燥8— 9 h ;待制品完全成型后，使擱板溫度逐漸升至32°C，真空度10 Pa下再干燥2 3 h，干燥結(jié)束得到乳白色海綿狀疏松團(tuán)塊，易于脫壁。實(shí)施例一
貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒凍干疫苗的凍干保護(hù)劑:將0.6g牛血白蛋白、6g甘露醇、4g蔗糖、2g右旋糖苷、0.26g磷酸氫二鉀、0.09g磷酸二氫鉀、Ig維生素C、0.125g兩性霉素按量加入186ml三蒸水中混合搖勻，以孔徑0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌；加入等量病毒液，分裝，每瓶分裝Iml (每毫升含100最小免疫量)，轉(zhuǎn)入冷凍干燥程序。疫苗凍干:將分裝好的西林瓶于-35 -40°C預(yù)冷凍3— 4 h再于擱板溫度-30 -32°C，真空度10 Pa下，干燥8— 9 h。待制品完全成型后，使擱板溫度逐漸升至32°C，真空度10 Pa下再干燥2 3 h，干燥結(jié)束得到乳白色海綿狀疏松團(tuán)塊，易于脫壁。實(shí)施例二
貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒凍干疫苗的凍干保護(hù)劑:將0.3g牛血白蛋白、3g甘露醇、2g蔗糖、Ig右旋糖苷、0.13g磷酸氫二鉀、0.045g磷酸二氫鉀、0.5g維生素C、0.0625g兩性霉素按量加入93ml三蒸水中混合搖勻，以孔徑0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌；加入等量病毒液，分裝，每瓶分裝Iml (每毫升含100最小免疫量)，轉(zhuǎn)入冷凍干燥程序。疫苗凍干:將分裝好的西林瓶于-35 -40°C預(yù)冷凍3— 4 h再于擱板溫度-30 -32°C，真空度10 Pa下，干燥8— 9 h。待制品完全成型后，使擱板溫度逐漸升至32°C，真空度10 Pa下再干燥2 3 h，干燥結(jié)束得到乳白色海綿狀疏松團(tuán)塊，易于脫壁。實(shí)施例三
貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒凍干疫苗的凍干保護(hù)劑:將6g牛血白蛋白、60g甘露醇、40g蔗糖、20g右旋糖苷、2.6g磷酸氫二鉀、0.9g磷酸二氫鉀、IOg維生素C及1.25g兩性霉素按量加入1860ml三蒸水中混合搖勻，以孔徑0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌；加入等量病毒液，分裝，每瓶分裝Iml (每毫升含100最小免疫量)，轉(zhuǎn)入冷凍干燥程序。疫苗凍干:將分裝好的西林瓶于-35 -40°C預(yù)冷凍3— 4 h再于擱板溫度-30 -32°C，真空度10 Pa下，干燥8— 9 h ;待制品完全成型后，使擱板溫度逐漸升至32°C，真空度1 0 Pa下再干燥2 3 h，干燥結(jié)束得到乳白色海綿狀疏松團(tuán)塊，易于脫壁。
權(quán)利要求
1.一種貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒凍干疫苗的凍干保護(hù)劑，其特征在于，凍干保護(hù)劑的主要組分重量百分比如下:牛血白蛋白0.3%、甘露醇3%、蔗糖2%、右旋糖苷1%，磷酸氫二鉀0.13%、磷酸二氫 鉀0.045%，維生素C0.5%，兩性霉素0.0625%，水為余數(shù)。
全文摘要
一種貓泛白細(xì)胞減少癥弱毒凍干疫苗的凍干保護(hù)劑配方，凍干保護(hù)劑的主要組分和含量如下牛血白蛋白0.3%、甘露醇3%、蔗糖2%、右旋糖苷1%、磷酸氫二鉀0.13%、磷酸二氫鉀0.045%、維生素C0.5%、兩性霉素0.0625%、水為余數(shù)。其優(yōu)點(diǎn)在于通過(guò)選擇適宜的凍干保護(hù)劑，疫苗的性狀、含水量、溶解性、效價(jià)均符合《中華人民共和國(guó)獸藥典》第三部要求，且疫苗的保質(zhì)期為2年。
文檔編號(hào)A61K47/02GK103169964SQ201310101310
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2013年3月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月27日
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