專(zhuān)利名稱(chēng)：治療混合感染性疾病的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種復(fù)配型抗細(xì)菌、真菌、原蟲(chóng)混合感染的藥物組合物，其具有協(xié)同和增強(qiáng)的抗菌功效，更可有效治療厭氧菌、真菌、滴蟲(chóng)、阿米巴原蟲(chóng)、蘭伯氏賈茅蟲(chóng)、梅毒螺旋體、淋球菌感染等疾病。
背景技術(shù)：
滴蟲(chóng)性陰道炎、細(xì)菌性陰道炎、真菌性陰道炎、霉菌性陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、輸卵管膿腫、梅毒螺旋體、淋球菌性陰道炎及其混合感染性陰道炎是婦女常見(jiàn)疾病，其中混合感染性陰道炎最為常見(jiàn)，在衛(wèi)生條件差的地區(qū)患病率高達(dá)70％。而金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、白色念珠菌、陰道滴蟲(chóng)是陰道常見(jiàn)的病原體，由滴蟲(chóng)、阿米巴原蟲(chóng)、蘭伯氏賈茅蟲(chóng)和厭氧菌引起肝膿腫阿米巴病、痢疾和其它疾病，亦為常見(jiàn)疾病。另外，由厭氧菌、真菌引起的肺炎、肺膿腫、肝膿腫、肝性腦病、腹膜內(nèi)感染、細(xì)菌性敗血癥等均為臨床常見(jiàn)的感染性疾病。目前具有抗感染功效的藥物雖然很多，但常見(jiàn)的是單組分藥物，多數(shù)只能有針對(duì)性地對(duì)抗滴蟲(chóng)、細(xì)菌或者真菌感染，如聯(lián)苯芐唑?yàn)榭拐婢幬铮姿崧燃憾榭辜?xì)菌感染藥物，替硝唑?yàn)榭沟蜗x(chóng)、阿米巴原蟲(chóng)、蘭伯氏賈茅蟲(chóng)藥物，目前臨床治療使用的雙唑泰栓、噠康星栓等抗感染藥物也存在類(lèi)似的問(wèn)題。臨床證明，這些單藥對(duì)混合感染性疾病治療效果都較差。其它抗菌藥物如克霉唑、咪康唑、青霉素等，名為廣譜抗菌，但治療中對(duì)體內(nèi)深部、體外表淺混合感染性疾病治療效果均不理想。所以，針對(duì)體內(nèi)、體外多種菌混合感染的抗感染的藥物，目前在臨床應(yīng)用中顯示有效的較少。
除了復(fù)合型感染外，很多頑固性特殊性感染疾病，例如常見(jiàn)的滴蟲(chóng)、阿米巴原蟲(chóng)、蘭伯氏賈茅蟲(chóng)引起的陰道炎、肝膿腫和組織內(nèi)阿米巴病、子宮內(nèi)膜炎，臨床常見(jiàn)的問(wèn)題是治療不徹底，易復(fù)發(fā)。一般醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為滴蟲(chóng)性陰道炎感染初期是由滴蟲(chóng)引起，實(shí)際上由于會(huì)陰部環(huán)境潮濕、通透性差，以及衛(wèi)生狀況不好等原因，疾病發(fā)展至后期還混合有細(xì)菌真菌感染，因此陰道炎初期為單一菌感染，而后期多伴有多種菌的混合感染，這也是陰道炎的病程綿長(zhǎng)，治療不能徹底，并且極易反復(fù)發(fā)作的主要原因。而梅毒旋體感染、淋球菌感染等病癥都還沒(méi)有被人類(lèi)徹底征服，原因是梅毒螺旋體人工培養(yǎng)問(wèn)題迄今尚未解決，因此還沒(méi)有一種特效藥能對(duì)抗梅毒螺體感染，臨床大多采用青霉素治療，療效不很理想，治療不徹底，病癥容易復(fù)發(fā)，而使用現(xiàn)有的抗真菌藥物對(duì)其進(jìn)行治療，也療效甚微。
醫(yī)學(xué)界對(duì)上述病癥病人所能做的只是盡最大程度緩解癥狀，采用的醫(yī)療手段也是針對(duì)病癥以抗真菌、抗細(xì)菌或者抗滴蟲(chóng)治療為主?？梢哉f(shuō)，很多在發(fā)病初期是單一菌感染的疾病，由于治療手段的不得力，隨著病程的延長(zhǎng)或反復(fù)發(fā)作，最終都可能轉(zhuǎn)變?yōu)槎喾N病菌混合感染性疾病。
另一方面，除滴蟲(chóng)、阿米巴原蟲(chóng)、蘭伯氏賈茅蟲(chóng)、梅毒螺旋體、淋球菌感染的醫(yī)學(xué)定位針對(duì)性較強(qiáng)外，很多感染都屬于多種菌的混合感染。近年來(lái)，該病癥在較發(fā)達(dá)的廣東、福建等沿海地區(qū)，在氣溫較高、濕度較大的南方地區(qū)、在衛(wèi)生條件較差的邊遠(yuǎn)地區(qū)更為常見(jiàn)，多年來(lái)國(guó)內(nèi)外業(yè)界研究了許多抗真菌、抗細(xì)菌、抗原蟲(chóng)的藥物，亦有少量抗細(xì)菌真菌混合感染的藥物，但因其對(duì)由多種菌，特別是對(duì)厭氧菌及原蟲(chóng)、真菌、細(xì)菌混合感染療效差、藥物毒性、合成工藝?yán)щy等多方面原因，臨床使用受到極大限制。
因此，就目前診療階段的醫(yī)學(xué)技術(shù)而言，臨床治療中所面臨的問(wèn)題是，專(zhuān)一性的抗感染藥對(duì)于滴蟲(chóng)、阿米巴原蟲(chóng)、蘭伯氏賈茅蟲(chóng)、梅毒螺旋體、淋球菌、細(xì)菌、真菌等頑固性感染的根治難盡人意，感染局部長(zhǎng)期不能愈合和反復(fù)發(fā)作均會(huì)導(dǎo)致多種病原體混合感染，而針對(duì)二種或二種以上病菌混合感染導(dǎo)致的頑固疾病，基本上還沒(méi)有特效藥。
如何找到有效的醫(yī)療手段徹底根治并且解決其治療后的復(fù)發(fā)問(wèn)題，應(yīng)該說(shuō)現(xiàn)在已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)界當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容
基于目前對(duì)于感染性疾病的治療現(xiàn)狀，本發(fā)明人對(duì)抗菌藥進(jìn)行了廣泛的摸索和篩選，將抗原蟲(chóng)、抗細(xì)菌、抗真菌等藥進(jìn)行有效復(fù)配，在治療滴蟲(chóng)、阿米巴原蟲(chóng)、蘭伯氏賈茅蟲(chóng)、梅毒螺旋體、淋球菌、細(xì)菌、真菌等混合感染引起的陰道炎、肝膿腫等組織內(nèi)米巴病和急、慢性阿米巴痢疾等頑固疾病中取得了意想不到的效果。
所以，本發(fā)明首先提供了一種復(fù)配型的抗感染藥物組合物，可作為抗滴蟲(chóng)、阿米巴原蟲(chóng)、蘭伯氏賈茅蟲(chóng)、梅毒螺旋體、淋球菌、細(xì)菌、真菌等混合感染引起的陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、肝膿腫等組織內(nèi)米巴病和急、慢性阿米巴痢疾等頑固疾病的藥物，適應(yīng)范圍更廣泛和藥效更好，可用于治療由于多種病菌混合感染性陰道炎、肝膿腫等組織內(nèi)阿米巴病和急、慢性阿米巴痢疾。
本發(fā)明所述及的″混合感染性疾病″是指在臨床表現(xiàn)嚴(yán)重的器官內(nèi)或組織內(nèi)嚴(yán)重感染，例如陰道感染，經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)揭示其感染菌至少在兩種或兩種以上，使用現(xiàn)有的廣譜抗菌藥及針對(duì)性的抗真菌、抗細(xì)菌或抗原蟲(chóng)藥物基本無(wú)效或效果不明顯。
本發(fā)明的抗感染藥物組合物中的主藥成分來(lái)自目前已知的抗滴蟲(chóng)、阿米巴原蟲(chóng)、蘭伯氏賈茅蟲(chóng)組分、抗真菌組分和抗細(xì)菌組分復(fù)合而成，其至少含有替硝唑、聯(lián)苯芐唑和醋酸氯己定。該組合物中替硝唑、聯(lián)苯芐唑和醋酸氯己定之間的質(zhì)量比可以為1-10∶10-1∶1-10，優(yōu)選質(zhì)量比約為1-2∶4-1∶1-2，尤其優(yōu)選為大約1∶4-1∶1，最佳的配比約為1∶2-1∶1。
本發(fā)明的藥物組合物通過(guò)所述抗原蟲(chóng)組分、抗真菌組分和抗細(xì)菌組分的協(xié)同作用，可提高抗菌治療效果，從而解決了傳統(tǒng)抗菌藥治療范圍狹窄、治療不徹底和易復(fù)發(fā)以及對(duì)混合感染無(wú)顯著效果等缺點(diǎn)，有望成為新型的高效抗菌藥物。
本組合物中除含有上述作為主藥的抗菌組分外，還可包括選自阿莫西林、金霉素、益康唑、甲硝唑、咪康唑、克霉唑和過(guò)氧乙酸中一種或一種以上的抗菌組分，制成抗菌藥物時(shí)還包括藥學(xué)可接受的輔料。
在制備所述抗菌藥物制劑時(shí)，作為主藥的三種抗菌成分之間除滿(mǎn)足上述的復(fù)配比例關(guān)系外，在藥物制劑中的含量可分別控制在0.1-10％(重量)。或者說(shuō)，每100重量份的藥物制劑中，可包含替硝唑0.1-10份，聯(lián)苯芐唑0.1-10份，醋酸氯己定0.1-10份，其余為藥物輔料；或者，每100重量份的藥物制劑中，可包含替硝唑0.1-10份，聯(lián)苯芐唑0.1-10份，醋酸氯己定0.1-10份，上述選擇性包括的其余抗菌組分分別為0.1-10份，余量為藥物輔料。各藥物組分的含量?jī)?yōu)選可為0.2-2份/100重量份，尤其可為0.2-1份/100重量份。
優(yōu)選地，在藥物制劑中，作為主藥的三種抗菌成分的總濃度在0.1-10％，更優(yōu)選為0.5-5％。
本發(fā)明的藥物制劑可以包括外用劑，例如陰道栓劑、陰道片劑、乳膏劑、溶液劑、噴霧劑、搽劑、霜?jiǎng)?、軟膏劑、氣霧劑、凝膠劑、膜劑、膠漿劑、含漱劑等；注射劑；口服劑，例如口服片劑、膠囊劑等劑型。與其他藥物一樣，本發(fā)明使用的藥物輔料是指藥劑學(xué)中可接受的各種輔料，也包括水，其應(yīng)滿(mǎn)足制備各種制劑要求。例如，使用明膠、脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯硬脂等制成陰道栓劑；或使用白色石蠟等藥物輔料經(jīng)水包油或油包水的乳化工藝，使油相和水相混合充分，得到藥物均勻、細(xì)膩，具有一定粘稠性的乳膏劑；或采用環(huán)糊精包含物等水溶液制成注射劑(或直接用注射水制成注射劑)；或采用藥液溶液與適宜的拋射劑制成氣霧劑等。按處方組成及通常的方法又可得到搽劑、溶液劑、霜?jiǎng)┑葎┬?。上述輔劑均屬常用的藥物輔料，本發(fā)明對(duì)其沒(méi)有特殊要求。對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，選擇性地復(fù)配這些抗菌組份，可以組合得到針對(duì)各種感染性疾病的系列藥物組合物。
在臨床治療中，根據(jù)具體病癥，可直接將陰道栓或陰道片藥物置入陰道，一天一次；外用乳膏藥直接涂于患處一天數(shù)次用藥；注射劑和口服片劑，一天1-2次給藥，直到病癥消除。本發(fā)明的組合物可以單獨(dú)施用或與其它抗菌藥物并用。
本發(fā)明組合物包含的各種抗菌組分可直接選用已經(jīng)工業(yè)化生產(chǎn)的原料藥，通過(guò)各組分的協(xié)同作用，更可最大限度發(fā)揮各抗菌藥的特有療效。作為一種復(fù)方藥，臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的抗菌組合物對(duì)于各種感染源的抗菌效果明顯優(yōu)于目前常用的抗菌藥物的單藥組分治療效果。
所以，本發(fā)明的目的還在于提供利用該藥物組合物制成的外用藥物劑型，包括陰道栓劑、陰道片劑、注射劑、口服片劑、膠囊劑、乳膏劑、溶液劑、噴霧劑、搽劑、霜?jiǎng)?、軟膏劑、氣霧劑等。用于治療由原蟲(chóng)、真菌和細(xì)菌引起的陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、輸卵管膿腫、肺炎、肺膿腫、肝膿腫、組織內(nèi)米巴病、急、慢性阿米巴痢疾、梅毒螺旋體感染、灰指甲、腳氣等頑固疾病，解決了傳統(tǒng)抗菌藥治療范圍狹窄、治療不徹底和易復(fù)發(fā)等難題，提高了治療混合感染的療效，填補(bǔ)了這類(lèi)疾病治療中無(wú)有效藥物的空白。
本發(fā)明還提供了上述藥物組合物的注射液、片劑、膠囊、外用制劑的制備方法，包括用環(huán)糊精包含物等水溶液制成注射劑；用明膠、脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯硬脂等基質(zhì)加熱熔化，藥物成分乳化或混懸于基質(zhì)中、入模和脫模制成栓劑；用白色石蠟等藥物輔料經(jīng)水包油或油包水的乳化工藝，使油相和水相混合充分，得到藥物均勻、細(xì)膩，具有一定粘稠性的乳膏劑；用藥液溶液與適宜的拋射劑制成氣霧劑等。
例如，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物用環(huán)糊精包含物等水溶液制成注射劑，該制劑為透明無(wú)色液體，其中主藥含量一般在0.1-10％，pH5-6。用明膠、脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯硬脂等基質(zhì)加熱熔化，藥物成分乳化或混懸于基質(zhì)中、入模和脫模制成的栓劑，為棕黃色鴨嘴形栓，略帶薄荷醇?xì)馕?，其中主藥含量一般?.1-10％，pH5-6；用白色石蠟等藥物輔料經(jīng)水包油或油包水的乳化工藝，得到藥物均勻、細(xì)膩，具有一定粘稠性的乳膏劑，為乳白色乳膏，其中主藥含量一般在0.1-10％，pH5-6。以上制劑，對(duì)光和熱都很穩(wěn)定，藥物穩(wěn)定性研究證明，產(chǎn)品在室溫下可保存兩年。注射劑可直接施用于靜脈注射，栓劑可直接置入陰道，外用制劑可直接施于皮膚。
上述方法均為注射用藥、口服給藥、陰道用藥和外用藥劑制備的常規(guī)操作，根據(jù)具體藥物配伍和所選輔料不同，所需的設(shè)備和工藝流程較常規(guī)操作也可有所差別，所述這些均屬本領(lǐng)域公知技術(shù)，不再贅述。
藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)1、不同配比的聯(lián)苯芐唑醋酸氯己定體外抗菌活性試驗(yàn)1.1試驗(yàn)材料1.1.1試驗(yàn)藥物受試藥物聯(lián)苯芐唑(代號(hào)A)原料藥批號(hào)200310002，購(gòu)自上海三維制藥有限公司。
醋酸氯己定(代號(hào)B)原料藥 批號(hào)040608，錦州九泰藥業(yè)有限責(zé)任公司。
替硝唑(代號(hào)C)原料藥 批號(hào)20040501，杭州康恩貝生物醫(yī)藥公司。
1.1.2陽(yáng)性對(duì)照藥a.聯(lián)苯芐唑原料藥，批號(hào)200310002，購(gòu)自上海三維制藥有限公司。
b.醋酸氯己定原料藥，批號(hào)040608，購(gòu)自錦州九泰藥業(yè)有限責(zé)任公司。
c.硝酸咪康唑原料藥，批號(hào)20040906，含量98.5％，徐州恩華藥業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司。
d.聯(lián)苯芐唑/水楊酸1∶1。
聯(lián)苯芐唑藥物來(lái)源同上。
水楊酸原料藥 批號(hào)910828，購(gòu)于北京市化學(xué)試劑二廠。
1.1.3原液配制以上試驗(yàn)樣品用無(wú)水乙醇配制1％濃度，試驗(yàn)前用RPMI1640培養(yǎng)液稀釋至50μg/ml的濃度，以后各管倍比稀釋?zhuān)瑵舛?μg/ml)。
1.1.4受試菌株試驗(yàn)所用菌株共108株(其中真菌64株，細(xì)菌44株)，見(jiàn)表1-2。
分別為北京(北京大學(xué)真菌和真菌病研究中心，北京眾策益耀醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)、南京(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所真菌科)、西安(第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院檢驗(yàn)科細(xì)菌室)、天津(天津金章科技發(fā)展有限公司)醫(yī)療院校保存的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床分離致病菌。其中，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株81株(真菌67株，細(xì)菌14株)每株菌株在試驗(yàn)前均經(jīng)瓊脂平板作單菌落分純，真菌26℃、細(xì)菌35℃隔夜新鮮培養(yǎng)的菌體適當(dāng)稀釋用于試驗(yàn)。
1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果替硝唑/聯(lián)苯芐唑/醋酸氯己定復(fù)方制劑對(duì)64株測(cè)試真菌最低抑菌濃度見(jiàn)表1-2。
表1、替硝唑/聯(lián)苯芐唑/醋酸氯己定復(fù)方制劑(質(zhì)量比)對(duì)64株測(cè)試真菌最低抑菌濃度(g/ml)


MIC50和MIC90欄的括號(hào)中數(shù)字表示與同批試驗(yàn)單藥A、B、C或A/B、A/C、B/C組中最低的MIC50和MIC90比較的增效倍數(shù)。
表2、替硝唑/聯(lián)苯芐唑/酸氯己定復(fù)方制劑(質(zhì)量比)對(duì)64株測(cè)試真菌最低抑菌濃度(g/ml)(續(xù)表1)

MIC50和MIC90欄的括號(hào)中數(shù)字表示與同批試驗(yàn)單藥A、B、C或A/B、A/C、B/C組中最低的MIC50和MIC90比較的增效倍數(shù)。
替硝唑/聯(lián)苯芐唑/醋酸氯己定復(fù)方制劑對(duì)44株測(cè)試細(xì)菌的最低抑菌濃度見(jiàn)表3-表4。
表3、聯(lián)苯芐唑與酸氯己定復(fù)方制劑(質(zhì)量比)對(duì)44株測(cè)試細(xì)菌最低抑菌濃度(g/m1)

MIC50和MIC90欄的括號(hào)中數(shù)字表示與同批試驗(yàn)單藥A、B、C或A/B、A/C、B/C組中最低的MIC50和MIC90比較的增效倍數(shù)。
表4、聯(lián)苯芐唑與酸氯已定復(fù)方制劑(質(zhì)量比)對(duì)44株測(cè)試細(xì)菌最低抑菌濃度(g/ml)(續(xù)表3)

從表1-表4可見(jiàn)A/B/C(1∶1∶1、2∶1∶1、4∶1∶1、8∶1∶1)配比體外抗真菌、細(xì)菌活性與A、B、C單藥組和A/B、A/C、B/C(1∶1)配比的雙組分藥比較均有不同程度的提高。其中A/B/C的1∶1∶1、2∶1∶1配比的MIC50和MIC90是同批試驗(yàn)單藥A、B、C或A/B、A/C、B/C配比中最低值的2～8倍，提示A/B/C配比抗菌效果優(yōu)于A、B、C單藥組或A/B、A/C、B/C配比。
小結(jié)A/B/C(1∶1∶1、2∶1∶1)配比抗菌效果明顯優(yōu)于A、B、C單藥和A/B、A/C、B/C(1∶1)配比的雙組分藥，可使其MIC50、MIC90值降低2～8倍。并顯示出較好的量效關(guān)系；A/B/C(4∶1∶1)配比次之，A/B/C(8∶1∶1)配比較弱，但抗菌效果較所述單藥和雙組分藥均有提高。
2、對(duì)大鼠陰道混合感染的治療2.1材料與方法2.1.1動(dòng)物大鼠，購(gòu)于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；動(dòng)物年齡∶60-70天；體重400-440g；性別和數(shù)量250只，雌性，其中120只用于觀察給藥后病原體培養(yǎng)和鏡檢轉(zhuǎn)陰率試驗(yàn)，另外130只用于病理組織學(xué)觀察試驗(yàn)。
2.1.2藥物替硝唑、聯(lián)苯芐唑和醋酸氯己定原料藥的復(fù)合配劑，質(zhì)量比例為1∶1∶1。替硝唑由杭州康恩貝生物醫(yī)藥公司生產(chǎn)，聯(lián)苯芐唑由上海三維制藥廠生產(chǎn)，醋酸氯己定由錦州九泰藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，并添加明膠、脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯硬脂等制成陰道栓(代號(hào)膚博登表示)。
膚博登組聯(lián)苯芐唑(A)/醋酸氯己定(B)/替硝唑(C)(質(zhì)量配比1∶1∶1，藥物濃度0.25-1％)；1％-高劑量組，0.5％-中劑量組，0.25％-低劑量組；對(duì)照組包括A、B、C組分的單方藥組，兩種藥物組A/B、A/C、B/C、(配比1∶1)組和雙唑泰栓、噠康星栓陽(yáng)性藥組，藥物濃度均為1％。
空白對(duì)照組則采用生理鹽水和賦形劑。
藥物劑型栓劑。
2.1.3分組與給藥細(xì)菌感染成功的大鼠，根據(jù)動(dòng)物的體重、性別及毛色，均勻隨機(jī)分組。動(dòng)物分組、每組動(dòng)物數(shù)及給藥途徑見(jiàn)表5。
陰道給藥(精密稱(chēng)取以上各組栓劑0.5克)。
表5、混合菌感染后動(dòng)物分組、動(dòng)物數(shù)、體重及給藥途徑

2.2方法真菌、細(xì)菌懸液制備試驗(yàn)用白念珠菌(ATCC90028)，菌種來(lái)源于第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院檢驗(yàn)科細(xì)菌室。將白念珠菌接種至含培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)，28℃培養(yǎng)14天，以生理鹽水洗下菌絲體，經(jīng)研磨、過(guò)濾制成菌液，用活菌計(jì)數(shù)法計(jì)算懸液中孢子濃度，并用培養(yǎng)孢子數(shù)稀釋至104cfu/ml，4℃保存?zhèn)溆谩?br> 金黃色葡萄球菌，購(gòu)于第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院檢驗(yàn)科細(xì)菌室。菌種置于2ml培養(yǎng)液中，35℃培養(yǎng)24h。用活菌計(jì)數(shù)法計(jì)算懸液中細(xì)菌濃度，并用培養(yǎng)液將細(xì)菌數(shù)稀釋至106cfu/ml，4℃保存?zhèn)溆谩?br> 陰道滴蟲(chóng)，來(lái)源于第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院檢驗(yàn)科細(xì)菌室。
大鼠陰道感染真菌、細(xì)菌和陰道滴蟲(chóng)方法將大鼠雙卵巢和子宮角在無(wú)菌條件下切除后，在感染前3天，每只豚鼠皮下注入苯甲酸雌二醇5mg(5ml)，繼后(注入苯甲酸雌二醇后)第4天進(jìn)行感染。用棉球?qū)⒅苽涞陌啄钪榫?、金黃色葡萄球菌和陰道滴蟲(chóng)懸液0.4ml涂敷陰道，每天1次，連續(xù)2天。感染3-5天后取大鼠陰道分泌物病原體檢查為慢性，且肉眼和病理組織學(xué)檢查上粘膜均發(fā)生充血、水腫、出血或浸潤(rùn)者為感染成功。將感染的大鼠隨機(jī)分組治療。
臨床癥狀在陰道感染真菌后，每日觀察陰道發(fā)紅、水腫情況。
觀察指標(biāo)培養(yǎng)于感染后3、7、14及21天分別取分泌物進(jìn)行真菌培養(yǎng)(28℃)，培養(yǎng)3、7和14天觀察結(jié)果。
鏡檢于感染后3、7、14及21天分別取分泌物進(jìn)行真菌和細(xì)菌鏡檢，在動(dòng)物陰道用消毒棉簽定位取分泌物放進(jìn)1ml生理鹽水中洗，混勻，取1滴液體滴在載玻片上置4倍顯微鏡下觀察感染菌量。
病理組織學(xué)檢查陰道粘膜均發(fā)生充血、水腫、出血或浸潤(rùn)。
2.3結(jié)果2.3.1膚博登治療后動(dòng)物病原體培養(yǎng)及鏡檢的轉(zhuǎn)陰率于感染后7天(治療前)及治療后3、7和14天，取動(dòng)物分泌物進(jìn)行病原體培養(yǎng)及鏡檢，按病原體培養(yǎng)和鏡檢陽(yáng)性動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組、單藥組、兩藥伍用組、陽(yáng)性藥雙唑泰栓和噠康星栓組比較，結(jié)果見(jiàn)表6-7。
表6、聯(lián)苯芐唑/醋酸氯己定/替硝唑(1∶1∶1)治療豚鼠陰道感染不同時(shí)間病原體培養(yǎng)陽(yáng)性例數(shù)(只)

與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，與單藥或兩個(gè)藥混合治療組比較△P＜0.05。
培養(yǎng)結(jié)果的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)有一種或一種以上病原體生長(zhǎng)示為陽(yáng)性，無(wú)菌生長(zhǎng)為陰性。
從表6病原體培養(yǎng)結(jié)果可見(jiàn)，A/B/C(1∶1∶1)藥物濃度0.25-1％對(duì)大鼠陰道滴蟲(chóng)、真菌和細(xì)菌混合感染均有一定治療作用，其病原體培養(yǎng)陽(yáng)性動(dòng)物數(shù)隨給藥劑量增加減少，顯示出良好的量效關(guān)系。除治療第3天低劑量組外，高、中劑量組治療3、7、14天，及高、中、低劑量組治療7、14天后病原體培養(yǎng)陽(yáng)性動(dòng)物數(shù)均明顯低于同期對(duì)照組、單藥、兩個(gè)藥伍用組，差別顯著(P＜0.05-0.01)，其效果亦優(yōu)于雙唑泰栓和噠康星栓組；A/B，A/C，B/C伍用對(duì)豚鼠陰道滴蟲(chóng)、真菌和細(xì)菌混合感染亦有一定治療作用，其中A/B和B/C組治療第14天，病原體培養(yǎng)陽(yáng)性動(dòng)物數(shù)明顯低于單藥組和對(duì)照組(P＜0.05)。雙唑泰栓和噠康星栓亦顯示出一定治療效果，治療第7、14天與同期對(duì)照組比較差別顯著(P＜0.05)。
表7、聯(lián)苯芐唑/醋酸氯己定/替硝唑(1∶1∶1)治療豚鼠陰道感染不同時(shí)間病原體鏡檢陽(yáng)性例數(shù)(只)

與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，與單藥或兩個(gè)藥混合治療組比較△P＜0.05。
培養(yǎng)結(jié)果檢出一種或一種以上病原體為陽(yáng)性，未檢出病原體為陰性。
從表7鏡檢結(jié)果顯示，A/B/C(1∶1∶1)藥物濃度0.25-1％對(duì)豚鼠陰道滴蟲(chóng)、真菌和細(xì)菌混合感染治療作用與病原體培養(yǎng)結(jié)果相似，其病原體檢出率隨給藥劑量增加而降低，顯示出良好的量效關(guān)系。其結(jié)果進(jìn)一步支持A/B/C配比治療效果。
2.3.2膚博登治療后動(dòng)物病理組織學(xué)的分值本試驗(yàn)分組，同上試驗(yàn)1，另設(shè)空白對(duì)照組(不感染不治療)每組動(dòng)物10只。膚博登高、中、低劑量組陰道連續(xù)給藥第6天，然后麻醉處死，取陰道組織進(jìn)行病理組織學(xué)觀察，按照組織學(xué)的分值與基質(zhì)對(duì)照組、單藥組、兩種藥物伍用對(duì)照、陽(yáng)性藥雙唑泰栓和噠康星栓組比較，算出陰道混合感染炎癥的治愈程度(％)。檢測(cè)和計(jì)算方法參見(jiàn)羅東等發(fā)表于《解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)》，19卷，第5期的文章“噠康星栓與雙唑泰栓對(duì)大鼠陰道炎的藥效學(xué)比較”。
檢測(cè)及統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表8。
表8、聯(lián)苯芐唑/醋酸氯己定/替硝唑(1∶1∶1)治療豚鼠陰道感染標(biāo)本病理組織學(xué)檢查的分值及治愈程度(％)

與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，與單藥或兩個(gè)藥合混合治療組比較△P＜0.05，與雙唑泰栓和噠康星栓比較，▲P＜0.05。
從表8可見(jiàn)，A/B/C(1∶1∶1)配比高、中、低劑量的治療程度分別為94.7％、71.2％和38.6％，均高于對(duì)照組，其中，高、中劑量組與單藥組和兩個(gè)藥伍用組比較差別顯著(P＜0.05)。雙唑泰栓和噠康星栓組的治療程度分別為56.8％和65.2％，亦顯示出較好的治療效果。
從以上結(jié)果可看出，膚博登栓、雙唑泰栓和噠康星栓對(duì)大鼠混合陰道炎均有較好的治療效果，膚博登栓亦顯示出較好的量效關(guān)系，其治療效果優(yōu)于雙唑泰栓和噠康星栓。
3、膚博登A/B/C(1∶1∶1)配比對(duì)梅毒螺體殺滅作用3.1試驗(yàn)材料3.1.1受試藥物膚博登(聯(lián)苯芐唑/醋酸氯己定/替硝唑1∶1∶1配比)。1％濃度，用原料藥配制。
3.1.2檢測(cè)單位軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物檢驗(yàn)中心。
3.1.3動(dòng)物兔，購(gòu)于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
性別和數(shù)量10只，雄性。
動(dòng)物年齡60-70天。
體重3.0-3.5kg。
3.2方法與結(jié)果3.2.1分組對(duì)照組和藥物治療組。對(duì)照組注射與生理鹽水作用后的活菌液(107條/1ml/只)，治療組注射與藥液作用4分鐘后的活菌液。治療組給活菌體積與對(duì)照組相同。
3.2.2梅毒螺旋體梅毒螺旋體Nicliols株。
菌液制備及接種復(fù)蘇梅毒螺旋體，鏡檢活動(dòng)度為陽(yáng)性，注射家兔2只，2周后發(fā)病，提取TP，濃度為107條/ml。0.5％聯(lián)苯芐唑/醋酸氯己定1∶1配比藥液用培養(yǎng)液稀釋至10μg/ml，與等量活菌液混合后，于暗視野顯微鏡下觀察其動(dòng)力。上述混合藥物作用4分鐘，接種至兔雙側(cè)睪丸(1ml/只)，共5只動(dòng)物，對(duì)照組5只動(dòng)物注射不加藥液的活菌液(1ml/只)。
3.2.3觀察指標(biāo)主要觀察發(fā)病動(dòng)物數(shù)及檢測(cè)其抗體產(chǎn)生情況，觀察期為1個(gè)月。
3.2.4試驗(yàn)結(jié)果在一個(gè)月的觀察期間內(nèi)，注射與藥液混合作用4分鐘的5只動(dòng)物均未發(fā)病(發(fā)病率為0/5)。而對(duì)照組5只動(dòng)物，全部發(fā)病(發(fā)病率為5/5)。
抗體檢測(cè)結(jié)果表明，藥物治療組5只動(dòng)物抗體檢測(cè)均為陰性，而對(duì)照組5只動(dòng)物抗體檢測(cè)均陽(yáng)性。
3.2.5小結(jié)代號(hào)為膚博登的A/B/C(1∶1∶1)配比于4分鐘內(nèi)可殺滅梅毒螺旋體強(qiáng)毒株。
4、膚博登A/B/C(1∶1∶1)配比對(duì)淋球菌殺滅作用4.1試驗(yàn)材料4.1.1受試藥物膚博登(聯(lián)苯芐唑/醋酸氯己定/替硝唑1∶1∶1配比)。
4.1.2檢測(cè)單位軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物檢驗(yàn)中心。
4.1.3淋球菌來(lái)源于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物檢測(cè)中心。
4.2方法與結(jié)果4.2.1方法受試藥膚博登10mg溶于10ml二甲基亞砜中，45℃加熱溶解。將淋球菌斜面培養(yǎng)物制備成標(biāo)準(zhǔn)比濁管濃度。取受試藥液0.9ml，加菌液0.1ml，充分混勻，作用4分鐘，接種至平板，于CO2孵育箱培養(yǎng)24小時(shí)。設(shè)一標(biāo)準(zhǔn)菌株作對(duì)照，用無(wú)菌生理鹽水代替藥液。
4.2.2藥效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)菌株菌落生長(zhǎng)典型，涂片熒光染色可見(jiàn)蘋(píng)果綠色雙球菌。
4.2.3試驗(yàn)結(jié)果代號(hào)為膚博登對(duì)淋球菌作用4分鐘后無(wú)淋球菌生長(zhǎng)。
4.2.4小結(jié)膚博登于4分鐘可殺滅淋球菌。
5、膚博登對(duì)312例混合性陰道炎的治療作用5.1實(shí)驗(yàn)材料5.1.1病例選擇經(jīng)鏡檢確診為陰道滴蟲(chóng)、霉菌、細(xì)菌混合感染者。
5.1.2臨床試用病例分組經(jīng)鏡檢(取陰道分泌物涂片用革蘭氏染色法及懸滴法)明確病原菌的陰道炎病人，于每周1、3、5來(lái)診者為用藥組，共210例，用膚博登栓治療。于每周2、4、6來(lái)診者為對(duì)照組，共102例，對(duì)照組一律按陰道炎種類(lèi)，分別用聯(lián)苯芐唑栓、醋酸氯己定栓、替硝唑栓、聯(lián)苯芐唑栓/醋酸氯己定栓、聯(lián)苯芐唑/替硝唑栓、醋酸氯己定/替硝唑栓、雙唑泰栓、噠康星栓藥物，以上藥物濃度均1％。
5.2方法與結(jié)果5.2.1用藥方法及療程將栓劑置入陰道，一天一次，療程7天。停藥后每一次月經(jīng)干凈后，3-5天定為復(fù)查日。
5.2.2療效判定痊愈①自覺(jué)癥狀消失；②白帶恢復(fù)正常；③陰道粘膜充血消失；④病原體消失；⑤陰道清潔度1度。顯效①自覺(jué)癥狀消失；②白帶恢復(fù)正常；③陰道粘膜充血減輕(按充血面積計(jì)算縮小1/2)；④病原體消失；⑤陰道清潔度1度。有效①自覺(jué)癥狀好轉(zhuǎn)；②白帶由多量變?yōu)橹械攘浚虎坳幍勒衬こ溲獪p輕(按充血面積計(jì)算縮小1/3)；④病原體消失；⑤陰道清潔度1度。無(wú)效①自覺(jué)癥狀與治療前相同；②病原體未見(jiàn)消失。
5.2.3膚博登栓治療陰道炎療效觀察膚博登栓治療210例陰道炎的效果見(jiàn)表9。
表9、膚博登栓對(duì)210例陰道炎患者治療效果(例)

括號(hào)中數(shù)字為相當(dāng)于觀察病例總數(shù)的百分?jǐn)?shù)。
由表9可見(jiàn)，膚博登組痊愈率和顯效率均明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，無(wú)效率低于對(duì)照組。提示膚博登治療陰道炎效果優(yōu)于單藥對(duì)照組(聯(lián)苯芐唑栓、醋酸氯己定栓、替硝唑栓、聯(lián)苯芐唑栓/醋酸氯己定栓、聯(lián)苯芐唑/替硝唑栓、醋酸氯己定/替硝唑栓、雙唑泰栓、噠康星栓)。因此膚博登栓是治療單一或混合感染性陰道炎的高效藥物。
結(jié)論本發(fā)明組合物的組方原則是采用一種或多種治療原蟲(chóng)與一種或多種治療真菌和細(xì)菌感染的藥物伍用，藥效學(xué)研究發(fā)現(xiàn)對(duì)原蟲(chóng)真菌細(xì)菌混合感染患者產(chǎn)生非常良好的治療效果。同時(shí)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明組合物能殺滅梅毒螺旋體和淋球菌，對(duì)混合性感染陰道炎治療效果明顯優(yōu)于對(duì)照組。其作用機(jī)理研究表明，本發(fā)明對(duì)原蟲(chóng)、真菌、細(xì)菌、梅毒螺旋體和淋球菌有較強(qiáng)的殺滅作用。
總之，本發(fā)明組合物作為抗原蟲(chóng)、真菌、細(xì)菌混合感染性陰道炎、抗梅毒螺旋體和淋球菌感染性疾病的藥物有如下特點(diǎn)①抗梅毒螺旋體、淋球菌感染，填補(bǔ)臨床治療中對(duì)以?xún)煞N感染引起的疾病缺少有效藥物的空白。②首次發(fā)現(xiàn)該組合對(duì)原蟲(chóng)、真菌、細(xì)菌混合感染引起的混合性陰道炎、肺炎、肺膿腫、肝膿腫、陰道內(nèi)膜炎輸卵管膿腫同時(shí)具有良好治療效果，并且經(jīng)多次治療后可以達(dá)到徹底治療目的。③毒副作用小，使用方便，可以長(zhǎng)期使用。
本發(fā)明的組合物與傳統(tǒng)抗菌藥比較，克服了治療范圍狹窄、治療徹底和易復(fù)發(fā)等缺點(diǎn)，并且提高了抗菌和治療復(fù)合感染療效，同時(shí)本發(fā)明無(wú)使用人群的限制的優(yōu)勢(shì)又克服了對(duì)抗梅毒螺旋體強(qiáng)毒株和淋球菌方面青霉素不適用人群受限的缺陷，因此，本發(fā)明產(chǎn)品對(duì)人類(lèi)攻克以上疾病及對(duì)多種疾病治療必將產(chǎn)生積極的影響。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，但不作為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。實(shí)施例中所涉及的抗菌組分均來(lái)自商購(gòu)的藥用級(jí)原料藥。
實(shí)施例1替硝唑0.5份，聯(lián)苯芐唑1份，醋酸氯己定0.5份，聚乙二醇12份，吐溫-80 5份，無(wú)水乙醇10份，甘油30份，明膠6份，冰片1份，水加至100份。
膚博登栓的制備(1)甘油明膠基質(zhì)的制備取處方量甘油和明膠于燒杯中，加入等量蒸餾水浸泡，使明膠溶脹變軟，于80℃水浴加熱，使充分熔融制得明膠溶液。
(2)醋酸氯己定溶液的制備取處方量冰片和醋酸氯己定及替硝唑于燒杯中，加入100ml無(wú)水乙醇，攪拌，微熱，使其基本溶解。
(3)聯(lián)苯芐唑溶液的制備取處方量聯(lián)苯芐唑于燒杯，加入處方量聚乙二醇和吐溫，加熱，全部溶解。
(4)栓劑的制備取(2)中醋酸氯己定溶液加至約80℃的(3)中聯(lián)苯芐唑溶液中，攪拌，全溶，然后緩慢加至80℃的(1)中甘油明膠基質(zhì)中，80℃水浴加熱，不斷攪拌，使其均勻，趁熱灌入已涂有液體石蠟的鴨嘴型栓模中，冷卻，削去模口溢出部分，脫模，得膚博登栓栓，每粒栓劑約為4g。
實(shí)施例2替硝唑2.5份，聯(lián)苯芐唑5份，醋酸氯己定2.5份，注射用水加至1000份。
將藥物和注射用水均勻，2ml瓶灌裝。供注射用。
實(shí)施例3替硝唑1份，克霉唑1份，聯(lián)苯芐唑1份，醋酸氯己定1份，聚乙二醇12份，吐溫-80 5份，無(wú)水乙醇10份，甘油30份，明膠6份，水加至100份。
膚博登栓的制備(1)甘油明膠基質(zhì)的制備取處方量甘油和明膠于燒杯中，加入等量蒸餾水浸泡，使明膠溶脹變軟，于80℃水浴加熱，使充分熔融制得明膠溶液。
(2)醋酸氯己定溶液的制備取處方量冰片和醋酸氯己定及替硝唑于燒杯中，加入100ml無(wú)水乙醇，攪拌，微熱，使其基本溶解。
(3)聯(lián)苯芐唑溶液的制備取處方量聯(lián)苯芐唑于燒杯，加入處方量聚乙二醇和吐溫，加熱，全部溶解。
(4)栓劑的制備取(2)中醋酸氯己定溶液加至約80℃的(3)中聯(lián)苯芐唑溶液中，攪拌，全溶，然后緩慢加至80℃的(1)中甘油明膠基質(zhì)中，80℃水浴加熱，不斷攪拌，使其均勻，趁熱灌入已涂有液體石蠟的鴨嘴型栓模中，冷卻，削去?？谝绯霾糠?，脫模，得膚博登栓栓，每粒栓劑約為4g。
以上描述了本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式，然其并非用以限定本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)在此公開(kāi)的實(shí)施方案可進(jìn)行并不偏離本發(fā)明范疇和精神的改進(jìn)和變化。
權(quán)利要求
1.一種抗感染藥物組合物，其中至少包括替硝唑、聯(lián)苯芐唑和醋酸氯己定。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，替硝唑、聯(lián)苯芐唑和醋酸氯己定的質(zhì)量比為1-10∶10-1∶1-10。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中，替硝唑、聯(lián)苯芐唑和醋酸氯己定的質(zhì)量比為1-2∶4-1∶1-2。
4.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其可為注射劑、口服劑或外用劑。
5.權(quán)利要求4所述藥物組合物，其中，所述外用藥物劑包括陰道栓劑、陰道片劑、乳膏劑、溶液劑、噴霧劑、搽劑、霜?jiǎng)④浉鄤?、氣霧劑、凝膠劑、膜劑、膠漿劑或含漱劑；口服劑包括片劑或膠囊劑。
6.權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中，每100重量份的藥物制劑中，可包含替硝唑0.1-10份，聯(lián)苯芐唑0.1-10份，醋酸氯己定0.1-10份，其余為藥物輔料。
7.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于該組合物還可包括阿莫西林、金霉素、益康唑、甲硝唑、咪康唑、克霉唑和過(guò)氧乙酸中一種或一種以上的藥物組分。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中，每100重量份的藥物制劑中，包含替硝唑0.1-10份、聯(lián)苯芐唑0.1-10份、醋酸氯己定0.1-10份，其余各組分藥物分別為0.1-10份，其余為藥物輔料。
9.如權(quán)利要求1所述的抗感染藥物組合物在制備治療混合感染性疾病的藥物中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其中，所述混合感染性疾病包括梅毒螺旋體、淋球菌、滴蟲(chóng)、阿米巴原蟲(chóng)、蘭伯氏賈茅蟲(chóng)、細(xì)菌和真菌中至少一種病菌感染引起的陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、肝膿腫、內(nèi)米巴病、阿米巴痢疾、肺炎、肺膿腫。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種復(fù)配型抗感染藥物組合物，其至少含有替硝唑、聯(lián)苯芐唑和醋酸氯己定作為主藥成分，且優(yōu)選替硝唑、聯(lián)苯芐唑和醋酸氯己定的質(zhì)量比為1－10∶10－1∶1－10，可有效治療混合感染性疾病，尤其可有效治療由于多種病菌混合感染性陰道炎、肝膿腫等等組織內(nèi)阿米巴病和急、慢性阿米巴痢疾。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1739507SQ200510103179
公開(kāi)日2006年3月1日 申請(qǐng)日期2005年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月20日
發(fā)明者鄭濤, 鄭思新 申請(qǐng)人:鄭濤