專利名稱：吲哚－2，3－二酮在制備心腦血管疾病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及吲哚-2，3-二酮(MW147，indole-2，3-dine)的一種新用途，具體涉及吲哚-2，3-二酮在制備心腦血管疾病藥物中的應用。
背景技術：
心腦血管病是引起人類死亡的首要原因之一，是嚴重威脅人類健康和生命的常見病和多發(fā)病。其中，動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是心腦血管病的主要病理基礎，因而對于抗AS藥物的研究日益受到重視。近年來，隨著細胞、亞細胞、病理生理學、分子生物學、免疫化學、現(xiàn)代遺傳學等學科的飛速發(fā)展和相互滲透，對動脈粥樣硬化病因學的研究有了新的進展，提出了內皮損傷和脂質過氧化修飾等學說，為藥物的研究提供了新的可能目標，研究在深度及廣度上有較大進展。
目前國內外抗AS藥的研究主要從以下幾個途徑進行工作降低高血脂、調節(jié)脂質代謝；抑制脂質過氧化損傷，保護血管內皮細胞；抑制血小板功能，調節(jié)前列環(huán)素/血栓素A2(PGIA調整與平滑肌增生相關基因表達水平，抑制血管平滑肌(vascular smooth muscle cells，VSMCs)增殖；抑制AS斑塊的形成和促使斑塊消退等。由于AS的確切病因尚未完全闡明，目前已知導致AS發(fā)生和發(fā)展是多種因素的綜合結果。因此，藥物可通過多種不同的途徑產(chǎn)生抗AS作用。
由于目前仍有很多人對高血脂的危險認識不足，再加高血脂本身并沒有什么癥狀，因此，很多人是在無意中發(fā)現(xiàn)血脂高的。有調查稱，在高血脂人群中，知道自己患有高血脂的只有25％，了解高血脂危害的只有20％左右，而采取措施的則非常少。九十所代初，國際醫(yī)學界進行了大規(guī)模的調脂治療研究，結果令人振奮長期服用調脂藥物不僅降低血脂，同時也明顯減少冠心病、心肌梗塞、腦中風的發(fā)生率、致殘率和死亡率。簡言之，調脂治療最根本目的是預防、延緩冠心病、腦中風等疾病的發(fā)生。目前，全球醫(yī)生和患者對調脂治療極其重視，觀念發(fā)生根本性變化。因此有人稱調脂的年代已經(jīng)到來。
目前臨床應用的抗AS藥主要有降血脂藥、抗氧化藥、保護動脈內膜藥及抗血小板藥等?？v觀各種抗AS藥物的研究，多以陸生生物及化學藥物為主，而對海生生物的研究卻明顯不足。主要見于魚類及少數(shù)藻類，海洋魚類中富含的多烯脂肪酸具有抗AS活性，已被深入研究并利用，已有魚油制劑用于臨床。而未見將海洋活性物質MW147用于制備心腦血管疾病藥物的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的任務在于提供吲哚-2，3-二酮(MW147，indole-2，3-dine)的一種新用途，具體地說是提供一種吲哚-2，3-二酮在制備心腦血管疾病藥物中的應用。
其技術解決方案是吲哚-2，3-二酮在制備預防和/或治療心腦血管疾病藥物中的應用。
上述應用，其中所述心腦血管疾病可指動脈粥樣硬化癥。
上述應用，其中所述心腦血管疾病可指高脂血癥。
本發(fā)明吲哚-2，3-二酮(下稱MW147)在制備心腦血管藥物諸如抗動脈粥樣硬化藥物中的應用，其有益效果如下首先證明了MW147有防止AS的形成和促使AS消退作用，并證明其抗AS作用與其降血脂及抗氧化作用有關。已完成臨床前在大鼠的急性和慢性毒理和藥理學研究，對血液生化和心、肝、脾、肺、腎、生殖等二十種組織進行病理切片檢測，完成了長期口服給藥的安全性評價。MW147可作為長期大劑量口服用藥，對動物無明顯損害，未發(fā)現(xiàn)因蓄積而對機體產(chǎn)生的毒性反應，是一種安全可靠的抗As藥物。
具體實施例方式
選用天然MW147或人工合成MW147，對其進行純化。純化方法包括用超純水和無水乙醇按1∶5比例混合，加入人工合成的MW147，在磁性攪拌器中緩慢加熱至溶解，然后逐漸冷卻呈針形橘紅色結晶，加熱溫度為50-80℃，濾去上清液，按上述方法重復純化3次，以減少重金屬離子，其結晶純度達99％；將經(jīng)純化的MW147研磨成粉末過80目篩。按下述方法制成片劑或膠囊劑。
服用方法預防AS時可應用膠囊或片劑，每人每日300mg；治療AS時可用膠囊或片劑，每人每日600mg，可分3次飯后服用。
實施例1片劑的制備吲哚-2，3-二酮 100mg乳糖100mg淀粉295mg硬脂酸鎂5mg共 500mg各自稱量出上述各種成分，將吲哚-2，3-二酮結晶粉碎過80目篩的粉末、乳糖、淀粉混合，用濕式法制粒，干燥，整合后與硬脂酸鎂混合，壓片，制成每片重量500mg的片劑。
實施例2膠囊的制備吲哚-2，3-二酮 100mg淀粉395mg硬脂酸鎂5mg共 500mg各自稱量出上述各成份，與過80目篩的吲哚-2，3-二酮結晶粉末混合均勻，慎充膠囊，制成每個純重500mg的膠囊劑。
經(jīng)臨床試驗，結果如下1、MW147 20、60、120mg·kg-1劑量預防用藥能減輕高脂食餌性AS鵪鶉主動脈及冠狀動脈內AS病變的程度；同樣劑量的MW147治療用藥可促使AS消退。
2、MW147 20、60、120mg·kg-1預防用藥及治療用藥均可降低血清中TC、TG、LDL-C、apoB含量，升高HDL-C、apoA(P＜0.05、P＜0.01)水平，具有調節(jié)脂質代謝紊亂的作用。
3、MW147 20、60、120mg·kg-1可升高鵪鶉血清中總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、血清谷胱甘肽過氧化物(GSH-Px)活性、血清總抗氧化能力(T-AOC)，降低血清中MDA含量(P＜0.05、P＜0.01)，有一定抗氧化作用。
4、MW147的抗AS作用與其調節(jié)脂質代謝紊亂及減輕脂質過氧化損傷等作用有關。
5、MW147小鼠急性毒性LD50為1091±359mg·kg-1 ig；在Wistar大鼠6個月長期毒性試驗證明MW147對進食情況及行為活動等無影響，血液生化學等指標未見異常，在22種臟器和組織的病理組織學觀察也未見異常，說明MW147毒性低。
6、給大鼠喂服MW147持續(xù)3至6個月，未見心電圖異常，血總膽固醇和低密度脂蛋白含量下降(P＜0.01)，表明了對心血管系統(tǒng)有保護作用和用藥的安全性。
下面通過試驗例進一步闡述本發(fā)明MW147在制備心腦血管疾病藥物中應用的有益效果。
試驗例一MW147抗動脈粥樣硬化效學研究一實驗材料(一)動物朝鮮鵪鶉，體重92±10g，雄性，市售。
(二)藥品及試劑MW147(2，3-吲哚醌)，由青島大學藥物研發(fā)基地提供，粉劑，實驗時以1.25％西黃耆膠稀釋為所需濃度；洛伐他汀(Lovastatin，Lov)由魯南制藥股份有限公司提供，批號20030906，粉劑；膽固醇(cholesterol，CH)進口分裝，由上?；瘜W試劑公司提供；血清脂質測定試劑盒(膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白)南京建成生物工程有限公司；載脂蛋白A、B測定試劑盒上海明華體外診斷有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒、丙二醛(MDA)測定試劑盒；谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒，由南京建成生物工程研究所提供。
(三)儀器AGII自動生化分析儀(美國Landmark公司)；722紫外分光光度計(上海產(chǎn))；超凈工作臺濟南JHT；酶聯(lián)免疫檢測儀華東電子管廠。
二實驗方法(一)MW147對實驗性鵪鶉動脈粥樣硬化的影響1.預防用藥對AS形成的影響(1)高脂食餌性AS模型建立、分組及給藥取雄性鵪鶉120只，隨機分為6組，在室溫下(20~25℃)用基礎飼料(玉米面40％、面粉38％、豆面10％、麩皮6％、魚粉及骨粉各3％以及鹽、微量元素、維生素、沙子等)喂養(yǎng)，觀察一般情況，適應一周后開始給藥，每天一次。分組情況如下①空白對照組；②模型組；③陽性對照組Lov 79.5mg·kg-1；④-⑥MW147大、中、小劑量組MW147 120mg·kg-1、60mg·kg-1、20mg·kg-1。除空白組喂飼基礎飼料外，其余組均喂飼高脂飼料(含1％膽固醇、14％豬油、6％花生油，其它成分同基礎飼料)。各用藥組藥物通過灌胃給藥，連續(xù)用藥8周。
(2)血清脂質含量測定各組鵪鶉于實驗開始后第2、5、8周末時，禁食12h，稱體重，經(jīng)頸靜脈取血2ml，靜置后分離血清，測定血清脂質含量，包括血清總膽固醇(total cholesterol，TC)、血清甘油三酯(triglyceride，TG)、血清高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoproteincholesterol，HDL-C)、血清低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoproteincholesterol，LDL-C)、血清載脂蛋白A(Apolipoprotein A，apoA)、血清載脂蛋白B(Apolipoprotein B，apoB)。上述測定采用酶法或放射比濁法，按照試劑盒說明書操作。
(3)主動脈、肝臟及心肌中脂質含量測定于實驗8周末時將動物處死后取出主動脈、心臟、肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗后，吸干稱重、剪碎、勻漿，經(jīng)脂質提取液抽取，采用酶法測定主動脈、心肌、肝臟中總膽固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)的含量。
(4)病理形態(tài)學觀察于實驗結束時(8周末)，將動物處死后，分離出主動脈、心臟及肝臟，取自主動脈弓至髂動脈分叉處一段血管，在背側面縱向剪開后，肉眼觀察主動脈內膜粥樣斑塊的分布特點。取出肝臟，肉眼觀察肝臟表面顏色，稱重計算肝臟系數(shù)。取出心臟，將冠狀溝以下部分切下，制作標本。將主動脈、心肌、肝臟標本經(jīng)常規(guī)福爾馬林固定后，經(jīng)石蠟包埋、切片、HE及蘇丹IV染色，在光鏡下進行病理形態(tài)學觀察，比較各組動物主動脈，冠狀動脈的AS病變的程度及肝臟脂肪變程度，按文獻中關于病變定量分級的標準和方法進行分級，比較各組動物AS病變及肝臟脂肪變程度的差異。
2.治療用藥對AS的影響先建立AS模型，然后給藥，觀察MW147對AS的治療作用。取雄性鵪鶉120只，隨機分為6組正常對照組；模型組；陽性對照組(lov組)；MW147高、中、低劑量組(MW147 120，60，20g·kg-1)。除正常對照組喂基礎飼料外，其余五組均給予高脂飼料(同上)，連續(xù)喂養(yǎng)8周，建立高脂食餌性AS模型。
自實驗第9周起，改為基礎飼料，同時各用藥組開始給藥，將藥物與飼料混勻后服用，每日一次，連續(xù)用藥4周。于用藥后第2周、4周末，經(jīng)頸靜脈取血，用上法測定血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C。于實驗結束時(用藥4周末)將全部動物處死，取出心、肝及主動脈，肉眼及鏡檢進行形態(tài)學觀察，計算肝臟系數(shù)，并測定心臟、主動脈、肝臟中脂質(TC、TG)含量，方法同上。
(二)MW147抗氧化作用在上述預防用藥和治療給藥試驗結束時每組取鵪鶉8只，經(jīng)經(jīng)脈取血約2ml，經(jīng)離心(1500rpm，10min)分離血清。
1.血清總超氧化物歧化酶(T-SOD)測定采用黃嘌呤氧化酶法取血清10μl，按測定試劑盒說明，先后加入1、2、3、4號試劑，混勻，經(jīng)37℃恒溫40min，加入顯色劑后在722紫外分光光度計中選550nm處比色，測定其吸光度。另取2支對照管，以蒸餾水代替血清，加入同樣試劑，測其吸光度。根據(jù)各管吸光度計算血漿中T-SOD活力，公式如下 *根據(jù)酶的意義，每ml反應液中SOD抑制率達50％時所對應的SOD量為一個亞硝酸鹽單位(Nu)。
2.血清丙二醛(MDA)測定采用硫代巴比妥酸(TBA)法，按測定試劑盒要求，取血清100μl，先后加入1，2，3號試劑，置旋渦混勻器混勻，95℃水浴40min，離心(3500rpm，10min)。用蒸餾水調零，532nm處比色，測血清樣品的吸光度。另取樣品空白管2支(以50％冰乙酸1ml取代3號試劑)；標準管2支(以標準品10nmol/ml四乙氧基丙烷液100μl取代血清)；標準空白管2支(以無水乙醇100μl取代血清)，其余試劑同前，測其吸光度，按以下公式計算樣品中丙二醛含量。
3.血清谷胱甘肽過氧化物(GSH-Px)測定按照試劑盒說明先進行預試，取合適的稀釋比例進行正式試驗。然后操作步驟根據(jù)試劑盒說明操作，用蒸餾水調零，在722紫外分光光度計中選412nm處比色，測血清樣品的吸光度。按以下公式計算樣品中谷胱甘肽過氧化物的酶活力。
4.血清總抗氧化能力(T-AOC)的測定按照試劑盒說明的操作步驟進行操作。然后用蒸餾水調零，在722紫外分光光度計中選520nm處比色，測血清樣品的吸光度。按以下公式計算樣品中總抗氧化能力。
(三)統(tǒng)計學方法采用spss軟件進行處理，各樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析；組間均數(shù)比較采用q檢驗；兩樣本率的比較用u檢驗；病理數(shù)據(jù)用H檢驗。
三結果(一)MW147對鵪鶉AS的抑制作用1.預防用藥對AS的影響(1)血清脂質含量的測定從表1～5可見，模型組鵪鶉喂飼高脂飼料后，自第2周起，即可見血清TC、TG、LDL-C明顯升高(與空白組比較，P＜0.01)，并持續(xù)整個實驗期(8周)，表明動物已形成高脂血癥。
MW147用藥2周后，即顯示出降低TC的作用，三個劑量組的鵪鶉血清TC均低于模型組，大劑量組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，三個劑量組和Lov組的鵪鶉血清LDL-C與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)，大劑量組的血清HDL-C與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，其它血清脂質如血清TG與模型組無顯著性差異(P＜0.05)，見表1。
表1 MW147預防用藥對鵪鶉血脂的影響(用藥2周，n＝10 x±s)

ap＜0.05，bp＜0.01，compared with model group；cp＜0.01，compared with control group連續(xù)用藥5周后，MW147不僅降低TC(三個劑量組與模型組均有顯著性差異，P＜0.01)，而且使血清TG(三個劑量組與模型組均有顯著性差異，P＜0.01)、LDL-C水平有所降低(高及中劑量組與模型組比較，P＜0.01)。MW147高劑量組能升高HDL-C水平(P＜0.05)，而其他兩劑量組影響不大(P＜0.05)，見表2。
表2 MW147預防用藥對鵪鶉血脂的影響(用藥5周，n＝10 x±s)

ap＜0.05，bp＜0.01，compared with model group；cp＜0.01，compared with control group
當實驗結束時，即連續(xù)用藥第8周末時，三種劑量的MW147均可降低血清TC、TG、LDL-C、apo-B的升高(P＜0.05，P＜0.01)，升高HDL-C、apo-A(P＜0.05，P＜0.01)的水平，見表3。
表3 MW147預防用藥對鵪鶉血脂的影響(用藥8周，n＝10 x±s)

ap＜0.05，bp＜0.01，compared with model group；cp＜0.01，compared with control group(2)主動脈、肝臟及心肌中脂質含量從表4，5，6中知，模型組鵪鶉的主動脈、肝臟、心肌組織中TC、TG含量明顯高于空白組，而MW147大、中、小三劑量組及Lov組的TC、TG水平均比較低，與模型組差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)，但四組間無明顯差別(P＜0.05)。模型組鵪鶉的心肌組織中TC、TG含量明顯高于空白組，而MW147大、中、小劑量組及Lov組的TC水平均比較低，與模型組差異顯著(P＜0.01)，MW147大、中劑量組及Lov組的TG水平均比較低，與模型組差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)，小劑量組的TG水平與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)。模型組鵪鶉的心肌組織中TC、TG含量明顯高于空白組，而MW147大、中、小劑量組及Lov組的TC水平均比較低，與模型組差異顯著(P＜0.01)，MW147大劑量組及Lov組的TG水平均比較低，與模型組差異顯著(P＜0.05)，中、小劑量組的TG水平與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
表4 MW147預防用藥對主動脈壁中TC及TG含量的影響(n＝8 x±s)

aP＜0.05，bP＜0.01，compared with model groupcP＜0.01，dP＜0.05，compared with control group表5 MW147預防用藥對心肌中TC及TG含量的影響(n＝8 x±s)

aP＜0.05，bP＜0.01，compared with model group；cP＜0.01，compared with control group表6 MW147預防用藥對肝臟中TC及TG含量的影響(n＝8 x±s)


aP＜0.05，bP＜0.01，compared with model group；cP＜0.01，dP＜0.05，compared with control group(3)病理形態(tài)學檢查①主動脈AS病變檢測結果空白對照組動物主動脈內壁光滑，光鏡下見動脈壁結構完整，肌束層次清楚，其他各組動物的主動脈有不同程度的AS病變，以模型組最為嚴重，肉眼可見隆起于內膜表面的灰黃色斑塊，其長軸與主動脈縱軸平行，斑塊主要分布在主動脈弓、升主動脈靠近分支血管的開口處，經(jīng)蘇丹IV染色后病灶呈紅色改變，鏡下可見內皮細胞脫落，內膜增厚，多灶性內膜下泡沫細胞聚集，可形成脂質斑塊，內見梭形細胞、少量壞死、膽固醇針樣結晶及炎細胞浸潤，內膜下層中平滑肌細胞呈不同程度增殖，中膜平滑肌肌層分離斷裂，呈不規(guī)則縱向排列。病變多在二級以上，而MW147各組及Lov組AS病變多在1級以下，病變程度較輕，內膜厚度及內膜下層中泡沫細胞數(shù)目明顯減少，見表7。
表7 MW147預防用藥對鵪鶉主動脈、冠狀動脈AS病奎分級的影響

aP＜0.05 bP＜0.01，compared with model group；cP＜0.01，compared with control group
②冠狀動脈AS病變檢測結果空白對照組動物冠狀動脈結構正常，內皮完整，層次清楚。模型組冠狀動脈AS病變主要發(fā)生在心肌內的冠狀動脈中小分支，鏡下可見管壁增厚、內膜斑塊突出于管腔內，多數(shù)占管腔面積的1/3~1/2以上，使管腔狹窄，內皮下、肌層內可見散在泡沫細胞和平滑肌細胞，粉染蛋白沉積，心內膜下心肌脂變伴灶性壞死、黏液變，內彈力膜斷續(xù)或消失。各給藥組及Lov組病變程度明顯輕于模型組，內膜斑塊較小，泡沫細胞不明顯，心肌脂變不明顯，多數(shù)占管腔面積的1/4以下或僅見內膜有輕度脂質浸潤，病變多在1級以下，見表7。
③肝臟脂肪變檢測結果除空白對照組外，其余各組動物肝臟均有程度不等的脂肪變性，肉眼可見肝臟表面呈灰黃色。鏡檢可見肝細胞索腫脹、排列紊亂，并可見a.彌漫性肝細胞脂肪變性(空泡數(shù)量多且體積大，可見壓核現(xiàn)象)；b.肝血竇間可見均質粉染蛋白樣沉積；c.血管擴展充血、多灶性壞死、匯管區(qū)炎細胞浸潤。各用藥組及Lov組病變明顯輕于模型組，肝細胞索排列較正常，肝細胞脂肪變性較輕，肝血竇內粉染蛋白樣沉積較少或無。參照Ruwart有關脂肪變性程度(0～IV級)分級標準進行記分。0級肝細胞內無脂滴，記0分；I級含脂滴的肝細胞＜25％，記1分；II級含脂滴的肝細胞占25％～50％，記2分；III級含脂滴的肝細胞占50％～75％，記3分；IV級含脂滴的肝細胞＞75％，記4分。肝臟脂肪變性分級統(tǒng)計用秩和檢驗，各用藥組肝臟脂肪變性病變明顯輕于模型組(P＜0.01)。肝臟的臟器濕重系數(shù)MW147大、中劑量組及Lov組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)，小劑量組與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)，見表8。
表8 MW147預防用藥對肝臟脂肪變性分級及肝臟系數(shù)的影響

aP＜0.05，compared with model group；cP＜0.01，compare with control group
2.MW147治療用藥對AS的影響(1)對血清脂質的影響停用高脂飼料兩周后模型組動物血清中TC、TG、LDL-C仍明顯高于正常對照組(P＜0.05，P＜0.01)，MW147各劑量組及Lov陽性對照組在用藥2周后動物血清中TG、TC、LDL-C含量均低于模型組，尤其TC降低明顯(P＜0.01)。MW147及Lov組的HDL-C則高于模型組(P＜0.01).見表9。
表9 MW147治療用藥對鵪鶉血清脂質的影響(用藥2周，n＝10 x±s)

aP＜0.05 bP＜0.01，compared with model group；cP＜0.01，compared with control group停用高脂飼料4周后，模型組動物血清中TC、TG、LDL-C已開始下降，但仍高于正常對照組(P＜0.01)。而此時已用藥4周的MW147大、中、小劑量組及Lov陽性對照組鵪鶉的上述各項血脂則明顯低于模型組(P＜0.05，P＜0.01)，有的指標已接近正常組，而HDL-C則高于模型組(P＜0.05，P＜0.01)，見表10。
表10 MW147治療用藥對鵪鶉血清脂質含量的影響(用藥4周，n＝10 x±s)


aP＜0.05 bP＜0.01，compared with model group；cP＜0.01，compared with control group(2)對組織中脂質含量的影響模型組鵪鶉停止喂高脂飼料4周后，其心肌、肝臟及主動脈壁中的TC及TG含量與正常對照組相比仍然較高，表明仍有較大量脂質沉積于主動脈及冠狀動脈內膜中。經(jīng)過連續(xù)4周藥物治療的MW147各組及Lov組動物的組織中TC、TG含量降低，與模型組差異明顯(P＜0.05，P＜0.01)，結果見表11、12、13。
表11 MW147治療用藥對主動脈壁中TC及TG含量的影響(n＝8 x±s)

bP＜0.01，compared with model group；cP＜0.01，compared with control group表12 MW147治療用藥對心肌中TC及TG含量的影響(n＝8 x±s)

aP＜0.05，bP＜0.01，compared with model group；cP＜0.01，compared with control group表13 MW147治療用藥對肝臟中TC及TG含量的影響(n＝8 x±s)

aP＜0.05，bP＜0.01，compared with model group；cP＜0.01，compared with control group(3)病理形態(tài)學觀察①肝臟脂肪變模型組動物的肝臟無論肉眼還是顯微鏡下觀察均可看到明顯的脂肪變，觸之有油膩感，鏡下可見彌漫性肝細胞脂肪變性，空泡數(shù)量多且體積大，MW147各組及Lov組脂肪變明顯較輕，根據(jù)文獻記載肝臟的脂肪變的分級標準，肝臟脂肪變性分級統(tǒng)計用秩和檢驗，各用藥組肝臟脂肪變性病變明顯輕于模型組(P＜0.01)。肝臟的臟器濕重系數(shù)MW147大、中劑量組及Lov組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)，小劑量組與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)，見表14。
表14 MW147治療用藥對肝臟脂肪變性分級及肝臟系數(shù)的影響(x±s)

aP＜0.05bP＜0.01，compared with model group；cP＜0.01，compared with control group
②主動脈AS病變模型組多數(shù)動物的主動脈有明顯的AS病變，在主動脈內膜表面可見形狀、大小不等的灰黃色脂質斑塊。病變嚴重的標本主動脈內膜面的大部分為融合的脂質斑塊，鏡檢可見內膜下層間隙增大，內見梭形細胞、少量壞死、膽固醇針狀結晶及炎性浸潤，內膜增厚，脂質斑塊主要由泡沫細胞構成。多數(shù)標本的AS病變在2級以上，MW147各組及Lov組部分動物主動脈壁上也有粥樣病灶，但病變程度較輕(P＜0.05，P＜0.01)，多在1級以下，見表15，鏡檢可見多數(shù)動脈內膜完整，有的標本有輕度脂質浸潤，內含散在泡沫細胞。
表15 MW147治療用藥對鵪鶉主動脈、冠狀動脈病變的影響

aP＜0.05 bP＜0.01，compared with model groupcP＜0.01，compared with control group③冠狀動脈病變與模型組(病變基本同預防用藥中的模型組)比較，各用藥組多數(shù)動物的冠狀動脈AS病變程度較輕(P＜0.05，P＜0.01)，見表15。
(二)MW147抗氧化作用的研究在預防用藥試驗結束時，MW147大、中劑量組可使鵪鶉血清中T-SOD、GSH-Px、T-AOC明顯升高(P＜0.05，P＜0.01)，小劑量組與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)，MW147三劑量組鵪鶉血清中MDA含量低于對照組(P＜0.01)，結果見表16。
表16 藥物對預防給藥血清T-SOD及MDA含量的影響(n＝8 x±s)

aP＜0.05，bP＜0.01，compared with model group；cP＜0.01，compared with control group在治療用藥試驗結束時，MW147大、中劑量組可使鵪鶉血清中T-SOD、T-AOC明顯升高(P＜0.05，P＜0.01)，MW147大劑量組可使鵪鶉血清中GSH-Px明顯升高(P＜0.05)，中、小劑量組與模型組比較無顯著性差異(P＜0.05)。MW147大、中劑量組鵪鶉血清中MDA含量低于對照組(P＜0.01)，小劑量組與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)，結果見表17。
表17 藥物對治療給藥血清T-SOD及MDA含量的影響(n＝8 x±s)

aP＜0.05，bP＜0.01，compared with model group；cP＜0.01，compared with control group
試驗例二MW147的急性、慢性毒性試驗一試驗材料1、動物昆明種小鼠(二級)，體重18-22g，由河北醫(yī)科大學試驗動物中心提供，合格證號冀醫(yī)動字04056。
2、藥和試劑MW147、西黃蓍膠二試驗方法1 MW147的急性慢性毒性試驗1.1動物分組昆明種小鼠50只，大鼠160只，雌雄兼有，體重18-20g，180-220g隨機分為5組，每組10只；試驗前禁食12h，自由飲水；控制室溫在20±2℃。
1.2藥品的配備西黃蓍膠用生理鹽水配制成1.25％的膠體供試驗使用；MW147為橙色粉末狀，不溶于水，試驗前用1.25％的西黃蓍樹膠配制成所需濃度的懸濁液供試驗使用。
1.3給藥方法一次性ig，劑量分別為3，2，1.5，1，0.7g·kg-1，組間比為k＝0.7，ig容積0.6ml/只。試驗于上午進行。
1.4半數(shù)致死量(LD50)測定觀察給藥后24h各組動物的死亡和存活情況，計算死亡率，采用孫氏改良法計算LD50。
三試驗結果1 MW147的急性毒性試驗動物的一般表現(xiàn)中毒動物表現(xiàn)為少動、萎靡不振、行走不穩(wěn)等。存活動物觀察7d，生長良好，體重增加，尸檢，心肝腎腦等組織肉眼觀察未發(fā)現(xiàn)異常變化。
2 半數(shù)致死量(LD50)的測定為用藥后24h的死亡率，采用孫氏改良法計算LD50＝1091±359mg·kg-1(95％可信區(qū)間為751~1374mg·kg-1)為確保長期用藥的安全性，按國家醫(yī)藥食品監(jiān)督管理局、國家I類新藥慢性毒性試驗標準，對MW147進行安全性綜合評價。吲哚-2，3-二酮按臨床用量的1.17、58.5、117倍的不同劑量給大鼠連續(xù)灌胃3個月、6個月及第7個月恢復期對大鼠的體重增長、進食情況以及行為活動等無顯著影響，對大鼠的血液學、血液生化學及心電圖等各項指標亦無明顯的不利影響。22種臟器與組織的病理組織學觀察與空白對照組比較均未見異常。
結果表明，MW147長期大劑量口服用藥，對動物無明顯損害，未發(fā)現(xiàn)因蓄積而對機體產(chǎn)生的毒性反應，是一種安全可靠的抗As藥物。
權利要求
1.吲哚-2，3-二酮在制備預防和/或治療心腦血管疾病藥物中的應用。
2.權利要求1的應用，其中所述心腦血管疾病可指動脈粥樣硬化癥。
3.權利要求1的應用，其中所述心腦血管疾病可指高脂血癥。
全文摘要
本發(fā)明公開吲哚－2，3－二酮(MW147)在制備預防和/或治療心腦血管疾病藥物中的應用。MW147有防止AS的形成和促使AS消退作用，并驗證了其抗AS作用與其降血脂以及抗氧化作用有關。已完成臨床前在大鼠的急性和慢性毒理和藥理學研究，對血液生化和心、肝、脾、肺、腎、生殖等二十種組織進行病理切片檢測，完成了長期口服給藥的安全性評價。MW147可作為長期大劑量口服用藥，對動物無明顯損害，未發(fā)現(xiàn)因蓄積而對機體產(chǎn)生的毒性反應，是一種安全可靠的抗As藥物。
文檔編號A61P3/00GK1813716SQ20051004547
公開日2006年8月9日 申請日期2005年11月30日 優(yōu)先權日2005年11月30日
發(fā)明者岳旺, 劉占濤, 楊志宏, 仲偉珍, 王蕾, 徐敏 申請人:青島大學