專利名稱：芐達(dá)賴氨酸在制備治療糖尿病周圍神經(jīng)病變藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及芐達(dá)賴氨酸制劑的新用途，尤其是涉及芐達(dá)賴氨酸在制備治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病神經(jīng)病變是糖尿病最常見的并發(fā)癥之一，病變可累及中樞神經(jīng)和周圍神經(jīng)，尤以后者多見。目前我國有5 000萬人以上正面臨著糖尿病的威脅，據(jù)統(tǒng)計，糖尿病患者5年、10年和20年后周圍神經(jīng)病變的發(fā)病率分別達(dá)到30％、60％和90％。糖尿病神經(jīng)病變可累及中樞神經(jīng)和周圍神經(jīng)(diabetes peripheral neuropathy，DPN)等，其中以后者最為常見，且嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。臨床上糖尿病患者并發(fā)周圍神經(jīng)病變時，早期出現(xiàn)肢端感覺異常和痛覺過敏，隨后有痛覺遲鈍等感覺神經(jīng)病變的癥狀，晚期可表現(xiàn)為肌張力下降，肌力減弱，甚至肌萎縮和癱瘓等運(yùn)動神經(jīng)病變的癥狀。DPN的發(fā)病機(jī)理是多因素共同作用的結(jié)果，諸如代謝紊亂，血管損害，神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏，氧化應(yīng)激和免疫損傷因素等。可以預(yù)見，隨著我國人民生活水平的迅速提高和人均壽命的延長，21世紀(jì)我國糖尿病的患病率將不斷上升，由DPN發(fā)展而的發(fā)生比例也將顯著提高。因此如何防治DPN正在成為本世紀(jì)全世界醫(yī)藥界的重要研究課題之一。
芐達(dá)賴氨酸(bendazac lysine，BDL)是由Angelini制藥集團(tuán)于1983年在意大利首先上市的抗白內(nèi)障新藥，其作用機(jī)制為抑制醛糖還原酶(aldose reductase，AR)的活性，不僅對糖性白內(nèi)障有效，還對多種類型的早期老年性白內(nèi)障有預(yù)防和治療作用，而且不良反應(yīng)輕微。
但至今未見到芐達(dá)賴氨酸能治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的有關(guān)報導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
1.發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供芐達(dá)賴氨酸制劑的新用途，即在制備治療糖尿病周圍神經(jīng)病變藥物中的新應(yīng)用。
2.技術(shù)方案本發(fā)明涉及芐達(dá)賴氨酸制劑在制備治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物中的應(yīng)用。
在芐達(dá)賴氨酸中加入適當(dāng)?shù)妮o料，用常規(guī)的制備方法，可以制成片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液等口服制劑。
DPN的發(fā)病機(jī)理是多因素共同作用的結(jié)果，諸如代謝紊亂，血管損害，神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏，氧化應(yīng)激和免疫損傷因素等.代謝紊亂因素主要有(1)、多元醇通路激活神經(jīng)細(xì)胞能量的獲得主要依賴葡萄糖糖，高血糖引起的代謝紊亂直接影響神經(jīng)細(xì)胞的代謝，是誘發(fā)DPN發(fā)病機(jī)制的主要因素.正常生理條件下，多元醇通路的代謝極低，糖尿病時非胰島素依賴性組織(如晶體、神經(jīng)、腎臟、視網(wǎng)膜等)的葡萄糖攝取大大增加，細(xì)胞內(nèi)高糖激活醛糖還原酶(AR，aldose reductase)，多元醇通路有兩個關(guān)鍵酶，即AR和山梨醇脫氫酶，葡萄糖經(jīng)前者催化生成山梨醇，山梨醇再經(jīng)山梨醇脫氫酶催化生成果糖。由于神經(jīng)組織內(nèi)不含果糖激酶，因此不能利用果糖，結(jié)果周圍神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)大量的山梨醇和果糖積聚，由于自身的極性。不易透過細(xì)胞膜，在胞內(nèi)形成很高的滲透壓，致神經(jīng)纖維節(jié)段性脫髓鞘，不同程度的軸突損害；生理功能導(dǎo)致神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢，以遠(yuǎn)端感覺神經(jīng)病變?yōu)橹?多元醇聚積可競爭性地抑制神經(jīng)組織攝取肌醇和干擾肌醇的正常代謝，致神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)肌醇耗竭。肌醇減少，引起二酯酰甘油下降，Na+-K+-ATP酶活性降低，使神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)外Na+濃度梯度下降，和Ca2+內(nèi)流增加，出現(xiàn)神經(jīng)傳導(dǎo)功能降低和膠質(zhì)細(xì)胞軸突分離結(jié)構(gòu)變化。此外，AR的激活可以消耗大量的還原型輔酶II(NADPH)，使還原型谷胱甘肽的含量下降致一-些含巰基的酶或蛋白質(zhì)易受氧化劑特別是過氧化物的損傷；一氧化氮合成酶(NOS)也需NADPH為輔酶，NADPH含量減少，NOS活性下降致一氧化氮合成減少，導(dǎo)致內(nèi)皮依賴性血管舒張功能下降，局部血流灌注不足，神經(jīng)內(nèi)膜血流降低引起神經(jīng)缺血，造成神經(jīng)組織的結(jié)構(gòu)或功能損傷。
(2).非酶促蛋白糖基化正常情況下AGEs的生成極其緩慢，糖尿病時持續(xù)的高血糖可導(dǎo)致神經(jīng)組織中蛋白質(zhì)的非酶促化反應(yīng)異常增高，大量的糖基化終末產(chǎn)物(AGEs，advanced glycation endproducts)，導(dǎo)致血管壁增厚，管腔狹窄，使神經(jīng)缺血，缺氧，后者，可增強(qiáng)氧化應(yīng)激反應(yīng)，自由基生成過多，使AGEs形成過多又可進(jìn)一步加重氧化應(yīng)激反應(yīng)，造成惡性循環(huán)。AGEs與AGEs受體(RAGE)結(jié)合，可破壞髓鞘的完整性，影響神經(jīng)組織的微管蛋白，影響具有神經(jīng)分泌及軸索傳導(dǎo)的微管系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能，使細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)蛋白對周圍神經(jīng)纖維的營養(yǎng)作用受到損害。
此外，糖尿病時，神經(jīng)微血管低灌注引起的血管損害和血液粘滯度增高，血小板功能異常，紅細(xì)胞變形能力下降，組織纖溶酶激活物減少及組織纖溶酶原抑制物(PAI-I)增多致血液流變學(xué)異常；神經(jīng)生長因子(NGF)等缺乏，周圍神經(jīng)的雪旺細(xì)胞與神經(jīng)元軸突之間的聯(lián)系異常致神經(jīng)營養(yǎng)和聯(lián)系障礙，和氧化應(yīng)激損傷及自身免疫損傷等因素均與DPN發(fā)病機(jī)制有關(guān)。
本課題組實(shí)驗研究還發(fā)現(xiàn)，BDL能有效防治糖尿病腎病，而DPN與糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)理有諸多共同之處?；贒PN的發(fā)病機(jī)制和已有的工作基礎(chǔ)，本實(shí)驗采用STZ腹腔注射造成糖尿病大鼠模型，研究BDL對糖尿病外周神經(jīng)病變大鼠的整體生理狀況、血糖和胰島功能的影響、坐骨神經(jīng)AGEs和AR活性的抑制作用、抗氧化作用、Na+-K+-ATP酶活性的影響、神經(jīng)纖維的形態(tài)學(xué)變化，多角度觀察BDL對DPN的防治作用并闡明其機(jī)理。來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途，從而進(jìn)一步理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)。
實(shí)驗結(jié)果證明(1)、BDL中高劑量治療組(100、200mg/kg)血糖和HbA1C與DPN模型組比較，表現(xiàn)出明顯的降血糖作用(P＜0.05，P＜0.01)。而且血漿胰島素的含量比DPN模型組明顯增多(P＜0.05，或P＜0.01)。
(2)、BDL中高劑量治療組坐骨神經(jīng)GSH-Px的活力比DPN組顯著增加(P＜0.05，P＜0.01)。示BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織有抗氧化作用。
(3)、糖尿病狀態(tài)下COX-2/COX-1活性大幅增加。BDL低中高劑量組的PGE2尿排泄率較DPN組明顯減少(P＜0.05或P＜0.01)，說明BDL能抑制COX-2的活性；但BDL高劑量組的TXB2減少，表明對COX-1也有抑制作用。
(4)、BDL低劑量治療組(50mg/kg)的神經(jīng)和血清中AGEs含量較DPN組下降不明顯，BDL中高劑量治療組降低神經(jīng)和血清中AGEs含量的作用非常顯著(P＜0.01，或P＜0.05)。
(5)、BDL低中高劑量治療組AR活性較DPN組低(P＜0.01)，表明BDL對AR有明顯的抑制作用。
(6)、BDL三個劑量治療組甩尾溫度均比DPN組低，有非常顯著性差異(P＜0.01)。運(yùn)動神經(jīng)傳導(dǎo)速度(MNCV)測定結(jié)果表明，DPN組的傳導(dǎo)速度較正常組大鼠顯著降低(P＜0.01)，而BDL中高劑量組對DPN的傳導(dǎo)速度下降有顯著的改善作用(P＜0.01)。
(7)、BDL低中高劑量治療組均能顯著地提高糖尿病大鼠Na+-K+-ATP酶活性(P＜0.05，或P＜0.01)。
(8)、BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織光鏡下形態(tài)學(xué)顯示，與正常大鼠相比，DPN組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)外膜有大量的伊紅色無結(jié)構(gòu)的沉積物(糖基化蛋白)，并伴有纖維化形成。BDL低劑量組大鼠的以上形態(tài)學(xué)病變僅見輕微改變，而BDL中高劑量組改善則更為明顯.
(9)、BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織電鏡下形態(tài)學(xué)顯示BDL中高劑量組大鼠有髓神經(jīng)纖維髓鞘厚度，電子密度，軸突節(jié)段性脫髓鞘現(xiàn)象有明顯的減輕。BDL低中高劑量組的有髓纖維面積比DPN組顯著增加(P＜0.05，或P＜0.01)；BDL低中高劑量組的有髓纖維密度也降低。
3.有益效果從以上藥理試驗結(jié)果，可以得出本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明對已知芐達(dá)賴氨酸發(fā)現(xiàn)了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域，(2)本發(fā)明的芐達(dá)賴氨酸藥理效果好，作用強(qiáng)，預(yù)示著有良好的藥用前景，(3)本發(fā)明的芐達(dá)賴氨酸具有非常顯著的降低血糖和糖化血紅蛋白以及促胰島素分泌的作用，且呈明顯的劑量相關(guān)性。
(4)芐達(dá)賴氨酸中高劑量治療組增加坐骨神經(jīng)GSH-Px的活力，抑制COX-2的活性，顯示BDL對DPN大鼠有抗氧化和抗炎作用。芐達(dá)賴氨酸具有顯著降低神經(jīng)和血清中AGEs的含量，且呈明顯的劑量相關(guān)性。
(5)芐達(dá)賴氨酸具有非常顯著的降低醛糖還原酶(AR)的活性，呈明顯的劑量相關(guān)。
(6)芐達(dá)賴氨酸三個劑量治療組均能提高痛閾，提高糖尿病大鼠外周神經(jīng)內(nèi)Na+-K+-ATP酶活性，增加運(yùn)動神經(jīng)傳導(dǎo)速度。
(7)光鏡或電鏡下形態(tài)學(xué)顯示芐達(dá)賴氨酸有明顯的減輕DPN大鼠神經(jīng)組織的病理改變因此BDL作為AR的抑制劑對DPN有很好的治療效果。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1BDL對DPN大鼠一般生理狀況的影響(一).材料和方法1實(shí)驗動物雄性Sprague-Dawley品系大鼠，體重180～210g，上海斯萊克實(shí)驗動物有限責(zé)任公司提供，動物合格證號SCXK(滬)2003-0003。
2藥品、試劑和儀器芐達(dá)賴氨酸(bendazac lysine，BDL)為白色粉末，分子量428，分子式C6H14N2O2.C16H14N2O3，化學(xué)名L-賴氨酸(1-芐基-1H-吲哚唑-3-氧基)乙酸鹽，由浙江平湖莎普愛斯制藥有限公司提供，批號Lot030507，其余試劑同第一部分。鏈脲霉素(Streptozotocin，STZ)購自Calbiochem公司，批號Lot.B51229。血糖檢測藥盒購自浙江東甌生物工程有限公司，批號Lot2004030266。胰島素放免檢測藥盒購自北京中國原子能科學(xué)研究院，批號Lot20040701。依帕司他(epalrestat，EPS)由江蘇揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)惠贈。大鼠尿白蛋白放免分析藥盒購自北京福瑞生物工程公司，批號Lot20050301。PGE2放免分析藥盒購自解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所，批號Lot20040625。TXB2放免分析藥盒購自解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所，批號Lot20040625。Na+-K+-ATP酶測試盒購自南京建成生物工程研究所，批號Lot20040702。羥脯氨酸測試盒購自南京建成生物工程研究所，批號Lot20040702。β-NADPHP購自Sigma公司(Sigma Co.St，Louis，USA)批號123K7012。DL-甘油醛購自Sigma公司(Sigma Co.St，Louis，USA)，批號Lot023K2512。其余化學(xué)試劑皆為分析純級。
3糖尿病造模和藥物治療 雄性SD大鼠，禁食12h后，腹腔一次性注射STZ75mg.kg-1(臨用前溶于0.1mmol.L-1檸檬酸鈉緩沖液，pH4.3)，72h后尾靜脈取血，測定空腹血糖＞13.9mmol.L-1者為造模成功。75只糖尿病大鼠按照血糖平行分組分為病理模型組(DPN)，BDL低劑量治療組(BL)，BDL中劑量治療組(BM)，BDL高劑量治療組(BH)，依帕司他治療組(EPS)，每組15只，另設(shè)10只正常大鼠為對照組(NS)，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗動物中心SPF級動物房飼養(yǎng)。糖尿病成模當(dāng)日作為實(shí)驗第一天，BDL治療組的低中高劑量分別為50，100，200mg.kg-1，早晚各灌胃給藥一次，EPS治療組50mg.kg-1每天給藥一次，BDL和EPS均用1％羧甲基纖維素(1％CMC)配成混懸液，按5.0ml.kg-1體重灌胃給藥。實(shí)驗中觀察各組大鼠的體重、進(jìn)食水量、尿量、毛發(fā)等一般狀態(tài)，每周稱體重1次。實(shí)驗12周末測定各組大鼠的擺尾溫度閾值，收集24小時尿液，20％烏拉坦5ml.kg-1麻醉，八道生理記錄儀PowerLab/8SP測定大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度，處死大鼠，腹主動脈收集血液，剝?nèi)蓚?cè)坐骨神經(jīng)，進(jìn)行各指標(biāo)測定。
4指標(biāo)測定用大鼠擺尾溫度值(Tailflick threshold temperature，TTT)測定痛閾。痛.八道生理記錄儀(Powerlab/8SP，澳大利亞ADInstruments公司)，以單脈沖方波刺激進(jìn)行坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度(MNCV)測定。用葡萄糖氧化酶法測定空腹血糖。HbA1C以親和層析法測定；BUN用化學(xué)比色法測定，血漿胰島素、尿白蛋白、尿PGE2和TXB2由南京醫(yī)科大學(xué)同位素室采用放免法測定。血清和神經(jīng)組織中AGEs的含量用熒光分光光度法測定。紅細(xì)胞和坐骨神經(jīng)AR活性用熒光分光光度計測定。
紅細(xì)胞和坐骨神經(jīng)Na+-K+-ATP酶活性測試盒按南京建成生物工程研究所試劑盒說明進(jìn)行。坐骨神經(jīng)谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力的測定用紫外分光光度法。
腓腸神經(jīng)纖維形態(tài)學(xué)采用光鏡，電鏡觀察和圖像分析5統(tǒng)計學(xué)處理 所有測定結(jié)果用x±SD表示，各組間比較采用單因素方差分析ANVOA，藥物治療組與DPN組比較采用Dunnett’s檢驗，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。
(二)結(jié)果(1).BDL對DPN大鼠一般生理狀況的影響正常對照組大鼠精神振奮，毛發(fā)純白光澤，活動頻繁；進(jìn)食量和飲水量正常，尿量尿量正常，墊料干燥，體重增長快。DPN病理模型組大鼠毛發(fā)枯黃、無光澤，精神萎靡，下腹部鼓脹，活動少，耳廓、眼球蒼白，尾巴蒼白濕冷，豎毛弓背，攝食量多，飲水量較正常組明顯增多，尿量較正常組明顯增多且粘性，墊料極易潮濕，體重增長緩慢，與DPN模型組相比，BDL高劑量治療組大鼠在以上各方面皆有有明顯改善，接近于正常對照組大鼠。BDL低劑量治療組的精神、活動、外觀、攝食量和尿量則接近于DN模型組。BDL中劑量治療組和EPS陽性治療組的整體表現(xiàn)則介于BDL低劑量治療組和高劑量治療組之間。每組均有若干只大鼠因相互撕咬或其他原因受傷感染致死。
至第7～8周開始同時并發(fā)白內(nèi)障，并且隨著時間的延長，發(fā)病率和病情呈明顯劑量相關(guān)。明顯加重。與DPN病理模型組相比，BDL高劑量治療組大鼠在各方面皆有很明顯的改善，白內(nèi)障發(fā)病率很低且病情明顯減輕；BDL中劑量治療組外觀、精神、活動接近高劑量治療組，但攝食量、飲水量和尿量較之略多，白內(nèi)障發(fā)病率較之略多；BDL低劑量治療組毛發(fā)偏黃、無光澤，精神不振，攝食量、飲水量和尿量較中劑量組多，白內(nèi)障發(fā)病率較高，但比DPN模型組明顯少。EPS陽性治療組的整體表現(xiàn)則介于BDL中劑量治療組和高劑量治療組之間。
(2).BDL對DPN大鼠腎功能的影響DPN組大鼠的腎指數(shù)、尿蛋白排泄率和血肌酐比正常組均明顯增高，表明糖尿病大鼠的腎功能損害比較嚴(yán)重。BDL高劑量組的三個指標(biāo)均比DPN組降低(P＜0.05)(見表1)。
表1.BDL對DPN大鼠腎指數(shù)，尿蛋白排泄率和血清肌酐的作用(x±s)

注NS組與DPN組比，##P＜0.01；BDL組與DPN組比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例2 BDL對DPN大鼠血糖和糖化血紅蛋白的影響1.材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果DPN組大鼠的血糖和糖化血紅蛋白(HbA1C)明顯高于正常對照組，有非常顯著性差異(P＜0.01)，表明造模是成功的。BBL低劑量治療組大鼠的血糖和HbA1C與DPN組相比，降血糖不明顯；而BDL中高劑量治療組血糖和HbA1C與DPN組比較，表現(xiàn)出明顯的降血糖作用(P＜0.05，P＜0.01)。陽性藥EPS治療組則沒有降血糖的作用(見表2)。
表2.BDL對DPN大鼠血糖和糖化蛋白的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組比，*P＞0.05，**P＜0.013 BDL對DPN大鼠的促胰島素分泌作用正常組大鼠血漿胰島素的含量比DPN組顯著增多(P＜0.01)，BDL低劑量治療組胰島素含量僅輕微增加，BDL中高劑量組血漿胰島素的含量比DPN組明顯增多(P＜0.05，或P＜0.01)。陽性藥EPS治療組血漿胰島素的含量較DPN組沒有增加(見表3)。
表3.BDL對DPN大鼠血漿胰島素的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例3 BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織AR和紅細(xì)胞AR的抑制作用1材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果DPN組大鼠坐骨神經(jīng)和紅細(xì)胞中AR活性較正常組顯著升高(P＜0.01)，表明高血糖時組織細(xì)胞中AR活性被激活。BDL低中高劑量治療組AR活性較DPN組低(P＜0.01)，表明BDL對AR有抑制作用。EPS治療組AR活性與BDL中高劑量組接近，顯著低于DPN組(P＜0.01)，對AR表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用(見表4)
表4.BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織和紅細(xì)胞醛糖還原酶的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例4 BDL對糖尿病腎病大鼠的抗氧化作用及對DPN大鼠尿中COX-2的影響1材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果(1).BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織的抗氧化作用DPN組大鼠與正常大鼠相比，坐骨神經(jīng)谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活力明顯降低(P＜0.01)。BDL中高劑量治療組坐骨神經(jīng)GSH-Px的活力比DPN組顯著增加(P＜0.05，P＜0.01)。EPS組GSH-Px的活力未見明顯增加(見表5)。
表5.BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織谷胱甘肽-過氧化物酶的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01(2).BDL對對DPN大鼠尿中COX-2的影響正常組大鼠尿PGE2和TXB2排泄率極低，DPN組大鼠PGE2的排泄率是正常組的9倍，TXB2的排泄率是正常組的7倍，表明糖尿病狀態(tài)下COX-2/COX-1活性大幅增加。BDL低中高劑量組的PGE2排泄率較DPN組明顯減少(P＜0.05或P＜0.01)，說明BDL能抑制COX-2的活性；但BDL高劑量組的TXB2減少，表明對COX-1也有抑制作用。EPS組PGE2和TXB2排泄率超過或接近DPN組，對COX-2/COX-1沒有抑制作用(見表6)。
表6.BDL對DPN大鼠尿PGE2和TXB2排泄率的作用x±s)(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例5 BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織AGEs和血清AGEs的影響1材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果DPN組大鼠神經(jīng)組織中的AGEs相對含量和血清中的AGEs相對含量與正常對照組相比明顯升高，有非常顯著性差異(P＜0.01)。BDL低劑量治療組的神經(jīng)和血清中AGEs含量較DPN組下降不明顯，BDL中高劑量治療組降低神經(jīng)和血清中AGEs含量的作用非常顯著(P＜0.01，或P＜0.05)。EPS治療組神經(jīng)和血清中AGEs含量也都有顯著性降低(P＜0.01)，說明BDL和EPS有降低AGEs的作用，且BDL的作用呈劑量依賴性(見表7)。
表7.BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織AGEs和血清AGEs的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例6 BDL對DPN大鼠擺尾溫度和運(yùn)動神經(jīng)傳導(dǎo)速度的影響1材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果DPN病理模型組大鼠的擺尾溫度值與正常組大鼠相比，顯著增高，表明飼養(yǎng)12周的糖尿病大鼠并發(fā)外周神經(jīng)病變，感覺神經(jīng)受累。BDL三個劑量治療組甩尾溫度均比DPN組低，有非常顯著性差異(P＜0.01)。運(yùn)動神經(jīng)傳導(dǎo)速度測定結(jié)果表明，正常組大鼠MNCV均值54.42m/s，為生理情況下的神經(jīng)傳導(dǎo)速度，DPN組的傳導(dǎo)速度較正常組大鼠顯著降低(P＜0.01)，而BDL中高劑量組對DPN的傳導(dǎo)速度下降有顯著的改善作用(P＜0.01)。EPS對DPN大鼠的擺尾溫度和MNCV均有顯著的改善作用(P＜0.01)(見表8)。
表8.BDL對DPN大鼠擺尾溫度值和運(yùn)動神經(jīng)傳導(dǎo)速度的作用(x±s)

注正常對照組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例7 BDL對DPN大鼠坐骨神經(jīng)組織和紅細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性的影響1材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果DPN組大鼠神經(jīng)組織和紅細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性較正常組顯著降低(P＜0.01)，表明糖尿病狀態(tài)下組織細(xì)胞上Na+-K+-ATPase活力下降。與DPN組相比，BDL低中高劑量治療組均能顯著地提高糖尿病大鼠Na+-K+-ATP酶活性(P＜0.05，或P＜0.01)。陽性藥EPS治療組也能顯著提高DPN組大鼠神經(jīng)組織和紅細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性(P＜0.05，或P＜0.01)(見表9)。
表9.BDL對DPN大鼠坐骨神經(jīng)組織和紅細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01
實(shí)施例8 BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織形態(tài)學(xué)的影響1材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果(1)BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織光鏡下形態(tài)學(xué)的影響光鏡顯示，與正常大鼠相比，DPN組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)外膜有大量的伊紅色無結(jié)構(gòu)的沉積物(糖基化蛋白)，并伴有纖維化形成。BDL低劑量組大鼠的以上形態(tài)學(xué)病變僅見輕微改變，而BDL中高劑量組和EPS組的形態(tài)學(xué)改善則較為明顯(見表10)。
表10.BDL對DPN大鼠神經(jīng)外膜糖基化蛋白的作用

(2)BDL對DPN大鼠神經(jīng)組織電鏡下形態(tài)學(xué)的影響NS組大鼠有髓神經(jīng)纖維表面Schwann細(xì)胞膜完整，髓鞘結(jié)構(gòu)清晰，電子密度一致，軸突內(nèi)軸絲結(jié)構(gòu)清晰；DPN組大鼠有髓神經(jīng)纖維髓鞘厚度不一，電子密度不等，軸突有明顯的節(jié)段性脫髓鞘現(xiàn)象，且Ranvier結(jié)分布不均。BDL低劑量組有髓神經(jīng)纖維髓鞘厚度不一，軸突有比較明顯的脫髓鞘改變；BDL中高劑量和EPS組病理改變則明顯減輕.
DPN組大鼠的有髓纖維面積比正常組顯著減少，而有髓纖維密度反而增加。BDL低中高劑量組和EPS組的有髓纖維面積比正常組顯著減少，但比DPN組顯著增加(P＜0.05，或P＜0.01)；BDL低中高劑量組的有髓纖維密度也比DPN組減少，但BDL中劑量組減少顯著(P＜0.05)。各組的軸突/髓鞘比值無顯著變化(見表11)。
Tabll.Morphometric data of myelinate nerve fibres in the sural nerveof DPN rats(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例9 芐達(dá)賴氨酸膠囊劑的制備1、芐達(dá)賴氨酸的口服膠囊制劑1.1、口服膠囊的原料配比芐達(dá)賴氨酸 200g硬脂酸鎂 3.5g50％乙醇 適量制成 1000粒1.2、制粒灌裝取200g芐達(dá)賴氨酸粉通過80目篩后與32g淀粉混勻，加入適量的50％乙醇作為濕潤劑，攪拌成適度的軟材，過18目篩，制成松緊適度的顆粒，在60-70℃下干燥，干粒經(jīng)16目篩整，加入3.5g硬脂酸鎂混勻后制成1000粒，測定含量，按顆粒含量計算后灌膠囊。
實(shí)施例10 芐達(dá)賴氨酸片劑組分的含量配比及制備方法1、片劑的原料配比芐達(dá)賴氨酸 200g淀粉 32g硬脂酸鎂 3.5g95％乙醇 適量制成 1000片2、制粒壓片取200g通過80目篩的芐達(dá)賴氨酸(BDC)粉與32g淀粉混勻，加入適量的95％乙醇作濕潤劑，攪拌成適度之軟材，過18目篩，制成松緊適度的顆粒，經(jīng)50-60℃干燥，干粒稱重后，加入3.5g硬脂酸鎂，經(jīng)18目篩整?；靹蚝?，測定含量與水分，供壓片用，壓片按照顆粒含量計算片重，用Φ10mm片凹沖壓片，檢查合格后分裝。
權(quán)利要求
1.芐達(dá)賴氨酸制劑在制備治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求2所述的芐達(dá)賴氨酸制劑，其特征是在芐達(dá)賴氨酸中加入適當(dāng)?shù)妮o料，用常規(guī)的制備方法，可以制成片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液。
全文摘要
本發(fā)明公開了芐達(dá)賴氨酸的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。實(shí)際上是涉及芐達(dá)賴氨酸在制備治療糖尿病周圍神經(jīng)病變藥物中的應(yīng)用。經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗研究證明芐達(dá)賴氨酸具有非常顯著的降低血糖和糖化血紅蛋白以及促胰島素分泌的作用，能增加坐骨神經(jīng)GSH－PX的活力，抑制COX－2的活力，顯示BDL對DPN大鼠有抗氧化和抗炎作用；具有顯著降低神經(jīng)和血清中AGES的含量，還具有顯著降低醛糖還原酶(AR)的活性，能提高痛閾，提高糖尿病大鼠外周神經(jīng)內(nèi)Na
文檔編號A61K9/08GK1739502SQ20051009427
公開日2006年3月1日 申請日期2005年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月8日
發(fā)明者張銀娣, 余俊先, 沈建平, 吳建偉, 金弟, 陳德康, 丁虹彬, 邱俊 申請人:南京醫(yī)科大學(xué), 浙江平湖莎普愛思制藥有限公司